薛利華

西安市中醫(yī)醫(yī)院(710001)

乳沒鎮(zhèn)痛膠囊中馬兜鈴酸的含量測定研究*

薛利華

西安市中醫(yī)醫(yī)院(710001)

目的：控制乳沒鎮(zhèn)痛膠囊中馬兜鈴酸的含量。方法：采用高效液相色譜法建立了乳沒鎮(zhèn)痛膠囊中馬兜鈴酸的含量測定方法。結(jié)果：該方法靈敏度高，準(zhǔn)確可靠, 可以作為乳沒鎮(zhèn)痛膠囊中馬兜鈴酸的質(zhì)控方法。結(jié)論：該品中不含馬兜鈴酸。

乳沒鎮(zhèn)痛膠囊是由鎮(zhèn)痛飲進行劑型改革而來的制劑，是國家級名老中醫(yī)姚樹錦主任醫(yī)師集30余年臨床經(jīng)驗總結(jié)出治療痹痛的經(jīng)驗方，處方由乳香、沒藥、細(xì)辛、蟲、血竭等藥組成，功效為活血定痛，破瘀化滯，祛寒逐風(fēng)[1]。方中細(xì)辛為馬兜鈴科植物北細(xì)辛、漢城細(xì)辛或華細(xì)辛的干燥全草[2]。馬兜鈴酸是馬兜鈴科植物中的主要成分,近年來已證實其具有腎臟毒性[3-5]。2010版中國藥典規(guī)定細(xì)辛中馬兜鈴酸的限量為0.001%[2]，但中藥復(fù)方制劑中是否含有馬兜鈴酸還有待進一步研究，為了更有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，保證臨床用藥安全，采用高效液相色譜法建立了乳沒鎮(zhèn)痛膠囊中馬兜鈴酸的含量測定方法。

1 儀器與試藥 1.1 儀器LC-20AT恒流泵 SPD-20A紫外檢測器；SIL-20A自動進樣器；CTO-10ASVP校溫箱(日本島津)；FA2104(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司) 。

1.2 試藥 乳香、沒藥、細(xì)辛等藥味(購自西安盛興飲片廠)；磷酸(廣東汕頭市西隴化工廠)；甲醇(天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)；馬兜鈴酸對照品(110746-200507購自中國食品藥品檢定研究院，含量測定用)；乙腈、磷酸為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。乳沒鎮(zhèn)痛膠囊樣品及相應(yīng)藥材陰性樣品由本實驗室自制。

2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.05%磷酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為260nm。理論板數(shù)按馬兜鈴酸Ⅰ峰計算應(yīng)不低于5000。

2.2 供試品溶液的制備 取乳沒鎮(zhèn)痛膠囊內(nèi)容物5g，天平精密稱定，放置錐形瓶中，用移液管加入70%甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率500W，頻率40kHz)40min，放置室溫，再稱量，所減少重量用70%甲醇補足，震搖均勻，微孔濾過，取續(xù)濾液做供試品溶液備用。

表1 馬兜鈴酸Ⅰ峰值情況

2.3 對照品溶液的制備 取適量對照品馬兜鈴酸Ⅰ，天平精密稱定，加甲醇制成濃度0.4μg/mL的溶液，備用。

2.4 陰性對照品的制備 取不含細(xì)辛的乳沒鎮(zhèn)痛膠囊處方藥材, 按乳沒鎮(zhèn)痛膠囊生產(chǎn)工藝制備膠囊,作為陰性膠囊。取適量, 按2.2中方法制備，備用。

2.5 檢測方法 分別吸取上述備用供試品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄結(jié)果。如圖2，圖3。

2.6 線性范圍考察 按上述色譜條件吸取備用對照品溶液3、5、10、15、20、25μL注入色譜儀，以進樣量、峰面積分別為橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)，計算得回歸方程為Y=72.906,X+8.3167，r=0.9999。 結(jié)果表明馬兜鈴酸Ⅰ在0.198～1.316μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系 。結(jié)果見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.7 重復(fù)性實驗 取同一批次乳沒鎮(zhèn)痛膠囊樣品，按2.2中所述方法制備供試液6份，每次自動進樣10μL測定，6份均未檢出，顯示方法重復(fù)性良好。

2.8 精密度實驗 精密吸取馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液(0.4μg/mL)， 重復(fù)測定6 次，結(jié)果馬兜鈴酸Ⅰ峰面積的RSD2.4%。

2.9 穩(wěn)定性實驗精密進樣按2.3中方法所制馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液，每次10μL，分別在0, 2, 4, 6, 8 h 進樣, 檢測溶液的穩(wěn)定性，計算峰面積RSD為2.5%，說明該溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.10 回收率實驗 取乳沒鎮(zhèn)痛膠囊樣品5份，每份20 粒。取內(nèi)容物混勻，取約0.20g，天平精密稱定，置25 mL 棕色瓶中，分別精密加入馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液(0.4μg/mL)10 mL，按2.2中方法制取供試品溶液5份，計算測定所得平均回收率為97.9%, RSD 為0. 8%。說明本研究方法回收率良好。

2.11 空白干擾實驗 取乳沒鎮(zhèn)痛膠囊陰性對照品備用溶液, 依2.5中方法測定, 在馬兜鈴酸Ⅰ峰相應(yīng)位置無干擾。

2.12 含量測定 取乳沒鎮(zhèn)痛膠囊樣品3批, 依2.2中方法制備供試品, 經(jīng)測定,該 3批乳沒鎮(zhèn)痛膠囊中均未檢出馬兜鈴酸Ⅰ。

圖2 馬兜鈴酸Ⅰ對照品

圖3 供試品溶液

2.13 結(jié) 論 本品中未檢測出馬兜鈴酸Ⅰ，因此規(guī)定本品不得檢出馬兜鈴酸。 3 討 論 3.1 臨床研究表明, 馬兜鈴酸的腎臟毒性作用, 主要表現(xiàn)為急性腎功能障礙。而馬兜鈴酸Ⅰ是馬兜鈴屬植物中毒性最強的成分[5]。近年來由于馬兜鈴酸已確定為一種具有腎毒性和致癌作用的物質(zhì)[4-6]，從而引起人們對安全使用馬兜鈴科中藥的的關(guān)注。乳沒鎮(zhèn)痛膠囊是本院腎病科所用制劑，本實驗為臨床用藥安全提供依據(jù)。

3.2 本實驗檢測乳沒鎮(zhèn)痛膠囊樣品三批, 檢測結(jié)果均未檢出馬兜鈴酸Ⅰ。 據(jù)此可規(guī)定乳沒鎮(zhèn)痛膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中不得檢出馬兜鈴酸。

3.3 用HPLC法測定本制劑中馬兜鈴酸Ⅰ含量[7-11]專屬性強, 結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作方法簡單,可以用來控制乳沒鎮(zhèn)痛膠囊中馬兜鈴酸的檢測。

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(收稿2014-11-12；修回2014-11-25)

*陜西省中醫(yī)藥管理局立項課題 題目編號ZY49

@乳沒鎮(zhèn)痛膠囊 馬兜鈴酸 含量測定

R28

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.04.049

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