姚 東 胡 北 高 軍 郭曉歡 馬宏達(dá) 安 曄

(沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽，110016)

心腦脈舒口服液質(zhì)量控制與降血脂作用相關(guān)研究

姚 東 胡 北 高 軍 郭曉歡 馬宏達(dá) 安 曄

(沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽，110016)

目的：探索心腦脈舒口服液中羥基紅花黃色素A含量與高脂血癥大鼠降血脂作用的相關(guān)性。方法:采用高效液相色譜法建立羥基紅花黃色素A含量測定方法，測定高脂血癥大鼠血清三酰甘油(Triglyceride，TG)、膽固醇(Cholesterol，TC)、高密度脂蛋白(Highdensitylipoprotein，HDL-C)、低密度脂蛋白(Low Densith Lipoprotein，LDL-C)的含量。結(jié)果：羥基紅花黃色素A含量測定方法準(zhǔn)確性、重復(fù)性良好，羥基紅花黃色素A的含量與高脂血癥大鼠降血脂作用存在一定相關(guān)性。結(jié)論：羥基紅花黃色素A可作為心腦脈舒口服液質(zhì)量控制指標(biāo)。

心腦脈舒口服液；羥基紅花黃色素A；高效液相色譜法；降血脂

心腦脈舒口服液為軍隊(duì)醫(yī)療單位非標(biāo)準(zhǔn)制劑，處方由紅花、當(dāng)歸和川芎組成，具有補(bǔ)血活血、化瘀止痛之功效，主治冠心病，心絞痛，動脈粥樣硬化等癥。該制劑在沈陽軍區(qū)總醫(yī)院臨床應(yīng)用近20年，療效確切，為本院治療心血管疾病的主要藥物。應(yīng)《關(guān)于軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)標(biāo)準(zhǔn)提高計(jì)劃》要求，提高本制劑質(zhì)量控制水平，建立羥基紅花黃色素A含量測定方法，同時(shí)考察不同含量心腦脈舒口服液對高脂血癥大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Thermo公司U3000色譜儀)；BT25S型電子分析天平(德國賽特利斯)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物 健康SD大鼠50只，體重(300±20)g，雄性，年齡360～390 d之間，隨機(jī)分組，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動物的合格證號：SCXK(遼)2010-0001。

1.3 試藥 羥基紅花黃色素A對照品(中檢所，批號為：111637-201207)。心腦脈舒口服液(沈陽軍區(qū)總醫(yī)院，批號：20131030，20140428，20140822)；丙硫氧嘧啶(上海朝暉藥業(yè)有限公司，批號：1308F06)；甲醇(色譜純，購自Fisher公司)，冰醋酸(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，重蒸水(自制)。

2 方法

2.1 羥基紅花黃色素A含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；柱溫：30 ℃；流動相：甲醇-水-醋酸(25∶75∶0.2)；流速：1 mL/min；檢測波長為403 nm。

2.1.2 溶液的制備 取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加入甲醇適量使溶解，制成每1 mL含1.004 mg羥基紅花黃色素A的對照品溶液；精密量取心腦脈舒口服液1 mL，置10 mL量瓶中，加入流動相至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；取不含紅花藥材的陰性樣品溶液，按供試品溶液制備方法制得陰性樣品溶液。

2.1.3 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各20 μL，按“2.1.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測定，測定結(jié)果見圖1。

圖1 羥基紅花黃色素A液相色譜圖

注：A 陰性樣品溶液 B 供試品溶液 C 羥基紅花黃色素A對照品溶液 1 羥基紅花黃色素A

結(jié)果表明，羥基紅花黃色素A的保留時(shí)間約為13 min，陰性對照樣品無干擾，羥基紅花黃色素A分離度(R)大于1.5。實(shí)驗(yàn)表明此法專屬性強(qiáng)。

2.1.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取濃度為0.251、0.502、1.004、2.008、4.016、8.032、16.064 μg/mL的羥基紅花黃色素A對照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定各自峰面積，以對照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得回歸方程為y=3.098 68x-3.945 19，r=0.999 7(n=6)。結(jié)果表明羥基紅花黃色素A在0.251～16.064 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對照品溶液20 μL，連續(xù)測定6次，記錄各色譜峰的峰面積，測得羥基紅花黃色素A峰面積值的RSD為0.83%(n=6)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度較好。

2.1.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10測定，記錄色譜峰的峰面積，結(jié)果羥基紅花黃色素A峰面積RSD為0.89%(n=6)，結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批次樣品，平行制備6份供試品溶液，測定羥基紅花黃色素A含量。結(jié)果樣品中羥基紅花黃色素A平均含量為59.92 μg/mL，RSD為0.76%(n=6)，結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.1.8 回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取已知濃度(59.92 μg/mL)的心腦脈舒口服液0.5 mL(共6份)，分別加入羥基紅花黃色素A對照品溶液(56.22 μg/mL)0.5 mL，制成供回收率用供試品溶液，測定羥基紅花黃色素A含量，計(jì)算回收率，結(jié)果羥基紅花黃色素A的平均回收率為100.98%，RSD為1.92%(n=6)，符合要求。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.9 樣品含量測定 取3批次樣品，制備供試品溶液，測定各批次樣品中羥基紅花黃色素A的含量。結(jié)果見表2。

表2 三批次樣品含量測定結(jié)果

2.2 高脂血癥大鼠血脂的測定

2.2.1 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)大鼠50只，分為5組，空白對照組10只，給予普通飼料喂養(yǎng)，其余40只作為高脂血癥組，給予高脂乳液[1]喂養(yǎng)2周后，根據(jù)體重水平，隨機(jī)分為高脂模型組，心腦脈舒口服液3個(gè)批次組(見表3)，分組結(jié)束開始給藥，空白對照組和高脂血癥模型組給予同體積的蒸餾水，除空白對照組其余各組繼續(xù)給予高脂乳液喂養(yǎng)，連續(xù)給藥4周。末次給藥后禁食不禁水12 h，大鼠眼眶靜脈叢取血1 mL，待凝血后，3 000 r/min離心15 min，分取血清，測定TC、TG、LDL-C、HDL-C含量。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 高脂血癥大鼠血脂測定結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中TC、TG和LDL-C均顯著高于正常組(P<0.01)，HDL-C顯著低于正常組(P<0.01)，心腦脈舒口服液各組可顯著降低高脂血癥大鼠血清TC、TG和LDL-C含量，顯著提高HDL-C。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 11.0軟件統(tǒng)計(jì)，進(jìn)行單因素方差分析。結(jié)果見表3。

表3 心腦脈舒口服液對高脂血癥大鼠血脂的影響例數(shù)=10)

注：劑量以羥基紅花黃色素A計(jì)，*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

心腦脈舒口服液因其具有良好的臨床療效，沈陽軍區(qū)總醫(yī)院數(shù)年來對該制劑品種進(jìn)行了多方面較為深入研究,包括對其多指標(biāo)成分進(jìn)行含量測定,考察該制劑對血管平滑肌細(xì)胞增殖、血小板聚集功能和血流動力學(xué)的影響,研究結(jié)果顯示該制劑通過多途徑對冠心病起治療作用[2-4]。在前期研究基礎(chǔ)上對制劑中紅花的有效成分進(jìn)行質(zhì)量控制研究，開展該制劑對血脂調(diào)節(jié)方面的實(shí)驗(yàn)研究，因此本課題對制劑中的紅花進(jìn)行含量與藥效學(xué)研究。

紅花作為傳統(tǒng)的活血化瘀中藥，用于冠心病、高血壓和心絞痛的治療[5-9]。紅花中的紅花黃色素能明顯降低高脂血癥大鼠血清TC、TG、LDL-C，升高HDL-C水平[9-10]，提示紅花黃色素有助于預(yù)防和治療動脈粥樣硬化。

由于紅花黃色素對熱不穩(wěn)定[11-12]，在制劑生產(chǎn)過程中存在損失,提取工藝對其含量影響明顯[13-15]，羥基紅花黃色素A可作為其指標(biāo)性成分進(jìn)行質(zhì)量控制[16-20]。依據(jù)本實(shí)驗(yàn)制定的含量測定方法對多批次心腦脈舒口服液進(jìn)行測定,實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，各批次產(chǎn)品中羥基紅花黃色素A的含量存在差異。優(yōu)選3個(gè)批次產(chǎn)品進(jìn)行藥效學(xué)研究，結(jié)果提示制劑中羥基紅花黃色素A的含量水平與其對高脂血癥大鼠血脂水平的調(diào)節(jié)效果存在相關(guān)性，中高劑量優(yōu)于低劑量。因此以羥基紅花黃色素A為指標(biāo)建立制劑標(biāo)準(zhǔn),可以有效控制制劑質(zhì)量,保證產(chǎn)品療效。

[1]宋兆旭,常紅,程海燕.利之舒對老齡大鼠高脂血癥模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2007,10(12):37-38.

[2]隋因,郭濤,孫沂,等.高效毛細(xì)管電泳法測定心舒口服液中腺苷、蘆丁和阿魏酸的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2005,25(3):232-234.

[3]郭濤,劉明妍,隋因,等.心舒口服液對大鼠主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖和家兔體外血小板聚集功能的影響[J].中國藥學(xué)雜志,2005,40(19):1466-1469.

[4]郭濤,宋洪濤,韋平,等.心舒口服液對麻醉犬心臟血流動力學(xué)的影響[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2001,17(1):8-13.

[5]陳夢,趙丕文,孫艷玲,等.紅花及其主要成分的藥理作用研究進(jìn)展[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2012,5(7):556-560.

[6]張宏宇,陳沫,熊文激.紅花黃色素抗血栓和降血脂作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2010,14(7):1028-1031.

[7]王志輝,丁思華,王宏宇.調(diào)脂膠囊對動脈粥樣硬化患者血脂、炎癥反應(yīng)以及氧化損傷的影響[J].中國醫(yī)刊,2013,48(2):39.

[8]趙敏,邢武軍,姜宇宙.自擬調(diào)脂飲對高脂血癥大鼠血脂及過氧化物水平的影響[J].中國醫(yī)藥,2013,8(7):915-916.

[9]何偉,謝雁鳴,王永炎.血脂康膠囊上市后證候臨床再評價(jià)癥狀條目的篩選[J].中國中藥雜志,2011,36(20):2898-2900.

[10]史旭波,胡大一.動脈粥樣硬化性心血管疾病防治中的誤區(qū)[J].中國循環(huán)雜志,2014,29(2):158-160.

[11]羅晶,黃宇玫,曾文雪.紅花中羥基紅花黃色素A的提取工藝及其熱穩(wěn)定性研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,21(5):39-42.

[12]李紅,黃羅生,平其能,等.紅花黃色素的穩(wěn)定性考察[J].海峽藥學(xué),2009,21(1):12-14.

[13]李文靜,蔡德福,于慶蓮,等.正交法優(yōu)選紅花抗肝纖維化的水溶性成分提取工藝[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,33(7):931-934.

[14]張榮,劉睿,黃天來,等.HPLC法研究當(dāng)歸-紅花單煎及共煎液中有效成分含量的變化[J].中藥新藥與臨床藥理,2009,20(5):448-452.

[15]張靜,陳紅專,王海亮,等.紅花中羥基紅花黃色素A的提取純化工藝研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2013,41(6):13-16.

[16]成西霞,王琳.活血液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].解放軍醫(yī)藥雜志,2013,25(10):82-84.

[17]汪建君,李玲玲,陳慧玲,等.HPLC法測定正天丸和正天膠囊中羥基紅花黃色素A的含量[J].國家藥品標(biāo)準(zhǔn),2014,14(3):197-200.

[18]莎日娜,何春龍,王煥蕓.高效液相色譜法測定伊赫湯中羥基紅花黃色素A的含量[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志,2013,31(2):140-142.

[19]何珊珊,萬軍,譚睿.高效液相色譜法測定肺熱普清散中羥基紅花黃色素A含量[J].中國藥業(yè),2013,22(19):29-30.

[20]李長印,儲繼紅,張軍,等.LC-MS/MS法測定人血漿中羥基紅花黃色素A的濃度[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2014,30(10):1402-1407.

(2015-03-19收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Research on the Correlation between the Quality of Xinnao Maishu Oral Solution and its Hypolipidemic Effect

Yao Dong， Hu Bei， Gao Jun， Guo Xiaohuan， Ma Hongda， An Ye

(DepartmentofPharmacy，GeneralHospital，ShenyangMilitaryCommandArea，shenyang110016,China)

Objective:To explore the correlation between the content of hydroxysafflor A in Xinnao Maishu oral solution and hypolipidemic effect in hyperlipidemia rats. Methods: The content of hydroxysafflor A in Xinnao Maishu oral solution was determined by High Performance Liquid Chromatography(HPLC), and the content of serum cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein (LDL-C), high density lipoprotein (HDL-C) in hyperlipidemic rats were determined. Results: The method of hydroxysafflor A content determination is accurate and reproducible. The results showed that there was a certain correlation between the content of hydroxysafflor A and hypolipidemic effect. Conclusion: The content of hydroxysafflor A can be used as the quality control index of Xinnao Maishu oral solution.

Xinnao Maishu oral solution; Hydroxysafflor A; HPLC; Hypolipidemic

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題面上項(xiàng)目(編號：13ZJZ01-3)；遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號：2013020182)

姚東(1986—)，女，滿族，藥師，碩士，研究方向：中藥學(xué)，E-mail：yaodong_2010@163.com

安曄(1967—)，女，漢族，副主任藥師，碩士，研究方向：生藥學(xué)，E-mail：anye3595@sina.com

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.11.037