戚晴雪 馬玉峰 吳 忌 鄭皓云 朗 松 楊黎黎 趙 軍 張 棟 王慶甫

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京，100029； 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京，100029)

低頻超聲促透通絡(luò)止痛中藥對不同程度膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠模型CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3的影響

戚晴雪1馬玉峰2吳 忌1鄭皓云1朗 松1楊黎黎1趙 軍1張 棟1王慶甫2

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué),北京，100029； 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京，100029)

目的：探討通絡(luò)止痛中藥在低頻超聲促透下對大鼠不同程度膝骨關(guān)節(jié)炎(Knee Osteoarthritis，KOA)模型的軟骨組織形態(tài)學(xué)及血清中CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3的影響，闡述該療法的作用機(jī)制及其優(yōu)勢。方法：采用切斷前交叉韌帶的經(jīng)典方法制備KOA大鼠模型。SD大鼠隨機(jī)分為3組：空白對照組、超聲促透組和中藥外敷組。所有大鼠左膝造模，空白對照組正常飼養(yǎng)，術(shù)后2、4、8周時(shí)隨機(jī)選取空白對照組大鼠檢測血清相關(guān)細(xì)胞因子；處死后觀察膝關(guān)節(jié)股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨組織形態(tài)學(xué)改變，根據(jù)軟骨改良Mankin’s評分予以評價(jià)，并根據(jù)Mankin’s評分結(jié)果確定大鼠KOA的病變程度。超聲促透組和中藥外敷組在術(shù)后2、4、8周時(shí)各隨機(jī)選取大鼠進(jìn)行干預(yù)處理，超聲促透組使用超聲電導(dǎo)儀對術(shù)側(cè)膝關(guān)節(jié)促透通絡(luò)止痛中藥，中藥外敷組僅使用中藥外敷。1次/d，30 min，連續(xù)治療2周。2周后處死，記錄數(shù)據(jù)同空白對照組。結(jié)果：空白對照組大鼠造模后2、4、8周時(shí)大鼠軟骨組織形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯改變，Mankin’s評分的增加與時(shí)間成正相關(guān)，血清中CTX-Ⅱ、COMP、MMP-3的含量發(fā)生不同程度的增高。超聲促透組與空白對照組相比，軟骨組織形態(tài)學(xué)發(fā)生改變，Mankin’s評分2、4、8周組降低，2、4周時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，4周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其作用顯著優(yōu)于中藥外敷組，2周時(shí)下降明顯，兩兩相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。超聲促透組與空白對照組相比，2、4、8周時(shí)CTX-Ⅱ含量明顯降低，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；8周時(shí)，CTX-Ⅱ含量降低，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其作用顯著優(yōu)于中藥外敷組。超聲促透組與空白對照組相比，2、4周時(shí)COMP含量減少(P<0.05)；與中藥外敷組相比，4周時(shí)含量降低明顯，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。超聲促透組和空白對照組相比，2、4周時(shí)MMP-3含量降低，二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；4周時(shí)超聲促透組與空白對照組相比，MMP-3含量顯著降低(P<0.01)，與中藥外敷組相比，含量降低明顯，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：低頻超聲促透通絡(luò)止痛中藥可以有效減緩或阻止膝關(guān)節(jié)軟骨的退行性變，這可能是通過降低血清中軟骨基質(zhì)相關(guān)細(xì)胞因子CTX-Ⅱ、COMP和MMP-3含量，減緩軟骨基質(zhì)的退變所致，但對重度KOA軟骨退變的緩解作用并不明顯；與傳統(tǒng)的中藥外敷法相比，具有起效快，療效好等優(yōu)點(diǎn)。

膝骨性關(guān)節(jié)炎；低頻超聲；通絡(luò)止痛中藥；軟骨基質(zhì)；軟骨組織形態(tài)學(xué)

膝骨關(guān)節(jié)炎(Knee Osteoarthritis，KOA)是老年人群常見的骨科疾病，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。盡管中醫(yī)外治法在針對該病的治療上取得一定成績，但受傳統(tǒng)方法限制，中藥有效成分不能很好的滲入患處，療效難以發(fā)揮。而近些年新興的低頻超聲促透法可能改變這一現(xiàn)狀，中藥多為大分子物質(zhì)，很難透過皮膚屏障達(dá)于患處，而通過低頻超聲特有的空化作用[1]可以使得藥物有效成分直達(dá)病灶，形成局部濃集和浸潤而起到靶位治療的作用。通絡(luò)止痛中藥主要由桃仁、紅花、桂枝、白芍等構(gòu)成，具有活血通絡(luò)止痛的功效。臨床上應(yīng)用低頻超聲促透通絡(luò)止痛中藥治療KOA的臨床療效也得到證實(shí)[2]。我們通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)建立不同程度大鼠KOA模型，并利用通絡(luò)止痛中藥的低頻超聲促透法對其進(jìn)行干預(yù)，從大鼠軟骨組織形態(tài)學(xué)以及相關(guān)細(xì)胞因子CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3含量變化等方面對該療法的有效性及起效機(jī)制進(jìn)行近一步驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 藥物與動(dòng)物 通絡(luò)止痛中藥萃取液，批號：201303，由北京諾亞同舟醫(yī)療技術(shù)有限公司提供；SPF級SD大鼠[SCXK(京)2012-0001]，雄性，體重約200 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。

1.2 主要儀器設(shè)備 超聲電導(dǎo)儀，型號：NAVA-01TD，北京諾亞同舟醫(yī)療器械有限公司提供；光學(xué)顯微鏡(日本)，BX50-3E01；石蠟切片機(jī)(日本)，IVS-400；全自動(dòng)封閉式組織脫水機(jī)(日本)，Rotovy 4634；精密電子天平(上海)，52750；超低溫冰箱(日本)，MDF-U50A。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理 84只全雄SD大鼠按照隨機(jī)區(qū)組法隨機(jī)分為3組：空白對照組(18只)、超聲促透組(33只)和中藥外敷組(33只)。所有大鼠采取StooP前交叉韌帶切除的經(jīng)典方法[3]予以造模，左膝為手術(shù)側(cè)，右膝為對照側(cè)。空白對照組術(shù)后2、4、8周隨機(jī)選取6只大鼠觀察其行為學(xué)變化，記錄Lequesne MG評分后予以處死，肉眼觀察膝關(guān)節(jié)軟骨大體改變，光鏡下觀察滑膜和股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨組織形態(tài)學(xué)變化，記錄軟骨Mankin’s評分；超聲促透組和中藥外敷組在術(shù)后2、4、8周時(shí)分別隨機(jī)選取11只大鼠進(jìn)行藥物干預(yù)，2周后觀察其行為學(xué)變化，記錄Lequesne MG評分后予以處死，檢測指標(biāo)同空白對照組。干預(yù)時(shí)，剪去左膝關(guān)節(jié)周圍的鼠毛，溫水擦拭干凈，選取大鼠膝關(guān)節(jié)股骨下段外側(cè)平坦處，滴上中藥萃取液約0.5 mL，放置超聲探頭，使與皮膚接觸。1次/d，30 min，連續(xù)干預(yù)2周。超聲促透組打開超聲電導(dǎo)儀，參數(shù)設(shè)定：超聲頻率：10 kHz，功率30 W，透入速率：30～60 μg，30 min/次。中藥外敷組保持超聲電導(dǎo)儀的關(guān)閉狀態(tài)。

1.4 動(dòng)物造模 根據(jù)前交叉韌帶切除的經(jīng)典方法制備大鼠KOA模型。10%水合氯醛腹腔注射麻醉，髕旁內(nèi)側(cè)入路，顯露大鼠髕骨后將髕骨向外側(cè)脫位，過屈膝關(guān)節(jié)顯露前交叉韌帶，直視下眼科剪切斷前交叉韌帶，行抽屜試驗(yàn)確認(rèn)前交叉韌帶完全切斷，止血，髕骨復(fù)位，沖洗創(chuàng)口，絲線逐層閉合關(guān)節(jié)腔。術(shù)后3 d，每日大鼠臀大肌肌注10萬青霉素以預(yù)防感染。術(shù)后強(qiáng)迫大鼠在籠外運(yùn)動(dòng)2 h/d。

1.5 指標(biāo)檢測 空白對照組大鼠術(shù)后2、4、8周分別按照隨機(jī)區(qū)組法編號隨機(jī)隨機(jī)選取6只進(jìn)行指標(biāo)檢測，包括大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)學(xué)變化、Mankin’s評分以及血清中CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3含量變化。

1.5.1 膝關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)學(xué)檢測及Mankin’s評分 大鼠禁食24 h，麻醉下打開左膝關(guān)節(jié)，使用銳利刀片切取股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨，用10%中性福爾馬林溶液固定后，脫鈣、切片，作蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察。軟骨組織學(xué)應(yīng)用Mankin’s評分予以評價(jià)(Mankin’s評分見表1)，并按照評分對軟骨的破壞程度進(jìn)行分級[4]：(0～1分為正常軟骨，1～5分為輕度軟骨損傷，6～9分為中度軟骨損傷，10～14分為重度軟骨損傷)

表1 Mankin’s評分

1.5.2 血清中CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3含量檢測 大鼠麻醉后，胸前區(qū)去毛，探測心尖搏動(dòng)最強(qiáng)處標(biāo)記并消毒，應(yīng)用1 mL注射器，將針頭對準(zhǔn)此處，深度約3 mm，回血后即可緩緩地抽血約1 mL。靜置后離心，用移液器吸取血清，放在EP管里，-20 ℃保存待檢，采用采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對其進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果

超聲促透組4周組與中藥外敷組8周組各死亡1只大鼠，不列入最終統(tǒng)計(jì)。

2.1 軟骨組織形態(tài)學(xué)觀察 大鼠正常膝關(guān)節(jié)軟骨：軟骨表面光滑，細(xì)胞排列正常，分布均勻，層次正常，軟骨細(xì)胞無簇集，染色正常，潮線清晰，Mankin’s評分0～1分(見圖1A)。

空白對照組(2周)：軟骨表面不平整，輕度染色，軟骨細(xì)胞排列出現(xiàn)無序，數(shù)量增多，潮線正常，Mankin’s評分2～5分(見圖1B)。

空白對照組(4周)：軟骨表層裂隙形成，裂隙達(dá)移行層，軟骨細(xì)胞排列無序，層次不清，可見簇集的軟骨細(xì)胞，細(xì)胞輕度染色，可見潮線不完整，Mankin’s評分6～9分(見圖1C)。

空白對照組(8周)：軟骨破損深達(dá)骨質(zhì)鈣化層，細(xì)胞簇集明顯，排列紊亂，層次不清，深染或失染，潮線不完整，Mankin’s評分10～14分(見圖1D)。

超聲促透組與空白對照組相比，在2周組和4周組可以觀察到一定差別：2周組軟骨表面不平整，細(xì)胞染色正常，軟骨細(xì)胞排列基本正常，層次清楚，潮線完整(見圖1E)；Mankin’s評分降低，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；4周組軟骨表層可見不明顯裂隙，裂隙較淺，細(xì)胞輕度染色，軟骨細(xì)胞排列較為規(guī)則，細(xì)胞簇集程度減輕，潮線完整(見圖1F)，Mankin’s評分降低，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；

中藥外敷組與空白對照組相比，在2周時(shí)意義較大：2周組軟骨表面粗糙，細(xì)胞染色正常，軟骨細(xì)胞排列尚可，層次清晰，潮線完整(見圖1G)，Mankin’s評分降低，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；超聲促透組與中藥外敷組相比，2、4周組細(xì)胞染色正常，簇集不明顯，排列尚可，Mankin’s評分進(jìn)一步減少，以2周組最為顯著，二者相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(中藥外敷組4周組見圖1H)見表2。軟骨組織形態(tài)學(xué)見圖1。

表2 Mankin’s評分

注：與空白對照組相比，*P<0.05;與中藥外敷組相比，△P<0.05。

圖1 軟骨組織形態(tài)學(xué)

2.2 CTX-Ⅱ含量變化 2、4周時(shí)，超聲促透組與空白對照組相比，含量降低，二者相比有明顯意義(P<0.01)；中藥外敷組含量低于空白對照組，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；8周時(shí)，超聲促透組與空白對照組相比，CTX-Ⅱ含量較少，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其作用優(yōu)于中藥外敷組(P<0.05)。(結(jié)果見表3)。

表3 Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)含量變化

注：與空白對照組相比,*P<0.05,**P<0.01；與中藥外敷組相比,△P<0.05。

2.3 COMP含量變化 2周時(shí)，超聲促透組和中藥外敷組與空白對照組相比含量均明顯減少(P<0.01)；4周時(shí)，超聲促透組與空白對照組相比，COMP含量明顯減少(P<0.01)，這一作用優(yōu)于中藥外敷組，二者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；8周時(shí)，超聲促透組和中藥外敷組與空白對照組相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(結(jié)果見表4)。

表4 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)的含量變化

注：與空白對照組相比,*P<0.05,**P<0.01；與中藥外敷組相比,△P<0.05。

2.4 MMP-3含量變化 2周時(shí)，超聲促透組和空白對照組相比，MMP-3含量降低，二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；4周時(shí)超聲促透組與空白對照組相比，MMP-3含量明顯減少(P<0.01)，這一作用優(yōu)于中藥外敷組(P<0.05)；8周時(shí)，超聲促透組含量低于空白對照組和中藥外敷組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(結(jié)果見表5)。

表5 基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)含量

注：與空白對照組相比,*P<0.05,**P<0.01；與中藥外敷組相比,△P<0.05。

3 討論

本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)利用前交叉韌帶切除的經(jīng)典方法成功制備出大鼠不同程度的KOA模型；通過低頻超聲促透通絡(luò)止痛中藥對大鼠模型進(jìn)行干預(yù)并與中藥的普通外敷法進(jìn)行比較，從大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)學(xué)以及軟骨基質(zhì)的相關(guān)降解產(chǎn)物Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)及基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)等指標(biāo)對其進(jìn)行觀察，以闡述低頻超聲促透通絡(luò)止痛中藥對不同程度KOA的作用效果和作用機(jī)制。

3.1 低頻超聲作用機(jī)理 低頻超聲又稱為長波超聲，它的頻率低但波長較長，目前所公認(rèn)的頻率在20～80 kHz，與高頻超聲相比，低頻超聲在從近場向遠(yuǎn)場傳遞時(shí)作用更強(qiáng)，其有效的治療空間在遠(yuǎn)場，即在同樣的聲壓下，超聲頻率越低，質(zhì)點(diǎn)所達(dá)到的組織越深，這便是低頻超聲效應(yīng)的關(guān)鍵點(diǎn)，低頻超聲些大多數(shù)的能量可以被組織所吸收而發(fā)揮效應(yīng)[5]。有學(xué)者[6]應(yīng)用低頻超聲(20 kHz)和高頻超聲(850 kHz的)研究其對脫脂牛奶腸桿菌的失活作用，發(fā)現(xiàn)低頻超聲作用距離遠(yuǎn)長于高頻超聲，可以顯著使腸桿菌失活，而高頻超聲無法滅活腸桿菌。

Mitragotri早在1995年即提出超聲介導(dǎo)下藥物透入的機(jī)理，包括空化效應(yīng)(氣泡的產(chǎn)生震動(dòng))，對流傳遞，局部熱效應(yīng)(溫度增高)和力學(xué)效應(yīng)(超聲所致力學(xué)變化)等。郭芳[7]等也在其論著中敘述了低頻超聲的作用機(jī)制，并將其總結(jié)為空化效應(yīng)和非空化效應(yīng)。通過上述作用，超聲波可以增加表皮、真皮等組織和細(xì)胞的通透性，強(qiáng)化藥物吸收，有助于增加中藥有效成分中大、中分子的吸收率，在傳統(tǒng)外用法的基礎(chǔ)上，借助物理和生物方法近一步改善療效。另外，國內(nèi)也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)[8]低頻脈沖超聲能夠作用于關(guān)節(jié)軟骨、關(guān)節(jié)囊和滑膜，將其作用機(jī)制總結(jié)為促使局部毛細(xì)血管擴(kuò)張，促進(jìn)血液循環(huán)，改善細(xì)胞功能，加速體內(nèi)化學(xué)反應(yīng)，軟化局部組織，增強(qiáng)膠體通透性，影響酶及生物活性物質(zhì)的活性與含量，加強(qiáng)組織新陳代謝，調(diào)節(jié)組織酸堿度改善pH值，提高痛閾等，通過上述作用而達(dá)到治療效果。

3.2 軟骨組織病理學(xué) KOA最主要的發(fā)病機(jī)制是關(guān)節(jié)軟骨的退行性改變[9-10]。軟骨組織病理學(xué)最常用的是Mankin’s評分，該評分中對軟骨組織的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞、光鏡下的染色以及潮線的完整性進(jìn)行了分級和評價(jià)，在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中使用廣泛，具有很高的準(zhǔn)確性[11-12]。應(yīng)用這一評分，可以反映出軟骨病變的程度(0～1分為正常軟骨，1～5分為輕度軟骨損傷，6～9分為中度軟骨損傷，10～14分為重度軟骨損傷)。在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的發(fā)展，大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)評分越來越高，顯示了與時(shí)間的正相關(guān)性，這是因?yàn)榍敖徊骓g帶的剪斷改變了膝關(guān)節(jié)的生物力學(xué)，膝關(guān)節(jié)在失衡狀態(tài)學(xué)每天進(jìn)行足量的運(yùn)動(dòng)即可以誘導(dǎo)KOA的發(fā)生，而這種病理發(fā)展也與時(shí)間關(guān)系密切。超聲促透組對于2周、4周大鼠軟骨組織病理學(xué)的改善作用比較明顯，這一作用明顯強(qiáng)于中藥外敷組，光鏡下觀察到，對于此時(shí)軟骨組織的改善，大多集中在軟骨細(xì)胞，對于細(xì)胞的數(shù)量、大小、排列及染色等有不同程度的改善，但對于軟骨的結(jié)構(gòu)，如表面的裂隙、潮線的完整性則作用不大；此外，對于8周組大鼠無明顯作用，這也正與肉眼觀察軟骨的結(jié)果一致，這可能是由于軟骨基質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生重塑、細(xì)胞發(fā)生完全變性后，普通方法難以阻止這一病理發(fā)展所致，而在其完全變性前，應(yīng)用該療法能夠改善膝關(guān)節(jié)內(nèi)環(huán)境，從而減緩軟骨的退變、促進(jìn)軟骨細(xì)胞的修復(fù)。

3.3 軟骨基質(zhì)相關(guān)降解產(chǎn)物 KOA的主要病位在關(guān)節(jié)軟骨，軟骨組織包括軟骨細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)，其中細(xì)胞外基質(zhì)約占99%，主要是由Ⅱ型膠原和蛋白多糖構(gòu)成，這兩種物質(zhì)在KOA的發(fā)病過程中占有重要的地位；軟骨中細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解處于一個(gè)平衡的動(dòng)態(tài)過程，一旦這種平衡被打破，其合成降解代謝不平衡，則會(huì)導(dǎo)致軟骨變性，而這也是KOA發(fā)生的直接原因。Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)本身位于Ⅱ型膠原羧基的末端，因此而得名，Ⅱ型膠原發(fā)生降解時(shí)產(chǎn)生出Ⅱ型膠原羧基端肽，可以在尿液、血清等體液中檢測到，具有較高的敏感度。Christgau S[13]等通過觀察骨關(guān)節(jié)炎患者尿液中Ⅱ型膠原羧基端肽的含量，發(fā)現(xiàn)其具有較高的精確度，與正常人相比有明顯意義，能夠很好的監(jiān)測關(guān)節(jié)軟骨的新陳代謝。李昊[14]等利用關(guān)節(jié)鏡對59名KOA患者進(jìn)行軟骨損傷的分級，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者血清中Ⅱ型膠原羧基端端肽的含量與軟骨損傷的程度成正相關(guān)，進(jìn)一步驗(yàn)證了該物質(zhì)對KOA的診斷價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)中隨著時(shí)間的推移，空白對照組大鼠血清中CTX-Ⅱ含量呈增長趨勢，說明軟骨基質(zhì)的降解近一步嚴(yán)重，而超聲促透組可以很好的降低該物質(zhì)的含量，在2、4、8周時(shí)均能夠發(fā)揮作用，且這種作用要明顯優(yōu)于常規(guī)的中藥外敷法，說明該療法可能抑制或減緩了軟骨基質(zhì)的近一步破壞，降低了Ⅱ型膠原的降解率。軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)是軟骨細(xì)胞外多糖蛋白的一種，是細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成成分，該物質(zhì)含量的變化可以反映出軟骨的破壞程度，目前對其研究較多。國外有學(xué)者[15]對KOA患者血清中COMP的含量進(jìn)行了研究，將患者膝關(guān)節(jié)X線片的K-L分級與血清中COPM含量做比較，發(fā)現(xiàn)COMP含量與X線嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，另外，該研究還發(fā)現(xiàn)COMP的含量患者滑膜炎癥的程度呈正相關(guān)，但人體中COMP的含量并不穩(wěn)定，目前只能作為骨關(guān)節(jié)炎的輔助診斷。本實(shí)驗(yàn)中，空白對照組大鼠在2、4、8周時(shí)COMP呈增長趨勢，2、4周時(shí)超聲促透組大鼠血清COMP含量明顯降低，且這一作用效果要強(qiáng)于中藥外敷組，但8周時(shí)作用卻不明顯，這可能是由于病程較長，大鼠滑膜炎性反應(yīng)減輕所致?；|(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)，是軟骨基質(zhì)降解過程中最重要物質(zhì)之一，MMP-3和TIMP-1的比例存在一定關(guān)系，這種關(guān)系的平衡保持著軟骨的正常狀態(tài)，但在某些致病因素的作用下，MMP-3的含量增高，能夠加速軟骨基質(zhì)的降解，因此，MMP-3的含量可以間接反應(yīng)出軟骨損傷的狀態(tài)，黃勝[16]等發(fā)現(xiàn)家兔骨關(guān)節(jié)炎模型的關(guān)節(jié)液中，MMP-3的含量與病程的發(fā)展呈正相關(guān)，張金山[17]等也發(fā)現(xiàn)在KOA患者血清中MMP-3的含量與病情呈呈正相關(guān)，重度患者M(jìn)MP-3的含量遠(yuǎn)大于輕、中度患者，這也與本實(shí)驗(yàn)結(jié)構(gòu)相吻合，本實(shí)驗(yàn)中，隨著大鼠KOA退變的程度增加，血清中MMP-3的含量也增加。但也有學(xué)者認(rèn)為，MMP-3的含量在軟骨降解最活躍的時(shí)候最高，而在后期軟骨破壞過多時(shí)含量反而下降。在實(shí)驗(yàn)中，超聲促透組能夠明顯降低大鼠血清中MMP-3的含量，這種作用要強(qiáng)于中藥外敷組，但主要體現(xiàn)在輕度和中度KOA大鼠模型。

本實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)低頻超聲促透通絡(luò)止痛中藥能夠很好的減緩輕、中度KOA大鼠軟骨的退變，降低大鼠血清中Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)及基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)的含量，從而減緩或抑制軟骨基質(zhì)的過度降解，除了Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)含量的降低出現(xiàn)在所有大鼠中，COMP和MMP-3含量的降低主要體現(xiàn)在輕、中度大鼠模型中，能夠從軟骨基質(zhì)這一角度解釋低頻超聲促透通絡(luò)止痛中藥對于KOA的作用機(jī)制；而上述作用的效果均強(qiáng)于中藥的普通外敷法。

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(2014-06-11收稿 責(zé)任編輯：徐穎)

世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)中醫(yī)藥文化專業(yè)委員會(huì)籌備會(huì)召開

2015年3月27日，在北京中醫(yī)藥大學(xué)召開了世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)中醫(yī)藥文化專業(yè)委員會(huì)籌備工作會(huì)議，參加此次會(huì)議的有世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)的領(lǐng)導(dǎo)，中醫(yī)藥文化專業(yè)委員會(huì)籌備組成員，以及各地中醫(yī)藥學(xué)術(shù)組織領(lǐng)導(dǎo)、各老字號藥企領(lǐng)導(dǎo)共30多人。北京中醫(yī)藥大學(xué)國學(xué)院作為中醫(yī)藥文化專委會(huì)會(huì)長單位，主辦了此次籌備會(huì)。會(huì)議由籌備會(huì)秘書長、健民集團(tuán)總裁徐勝先生主持。世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)學(xué)術(shù)部關(guān)濤主任介紹了世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)專業(yè)委員會(huì)組織管理規(guī)定、籌備成立工作的程序，并且就一些關(guān)鍵性問題作了說明。

世中聯(lián)中醫(yī)藥文化專業(yè)委員會(huì)籌備組組長、北京中醫(yī)藥大學(xué)國學(xué)院院長張其成教授作了籌備工作報(bào)告，他提出中醫(yī)藥文化是中醫(yī)藥精神文化、行為文化、物質(zhì)文化的總和，具體研究領(lǐng)域包括中醫(yī)藥文化資源的挖掘、保護(hù)、利用與開發(fā)、中醫(yī)藥文化的學(xué)術(shù)研究與人才培養(yǎng)、中醫(yī)藥文化的國際傳播與應(yīng)用。中醫(yī)藥文化資源十分豐厚，可分為地域中醫(yī)藥文化、中藥企業(yè)中醫(yī)藥文化、中醫(yī)院中醫(yī)藥文化、中醫(yī)院校中醫(yī)藥文化、民族醫(yī)藥文化、儒釋道醫(yī)藥文化等等。中醫(yī)藥文化專委會(huì)今后的工作任務(wù)將圍繞上述領(lǐng)域開展學(xué)術(shù)交流、項(xiàng)目合作、人才培養(yǎng)、國內(nèi)國際傳播、社會(huì)服務(wù)等。

針對張?jiān)洪L的報(bào)告與中醫(yī)藥文化專業(yè)委員會(huì)的籌備建設(shè)工作，與會(huì)專家紛紛發(fā)言，建言獻(xiàn)策。國學(xué)院副院長李良松就佛醫(yī)學(xué)問題在中醫(yī)藥文化傳播中的重要性作了發(fā)言；北京市道教協(xié)會(huì)副會(huì)長王成亞道長就道醫(yī)、道藥的獨(dú)特性作了發(fā)言；北京大學(xué)醫(yī)學(xué)人文研究院賴立里女士就文化人類學(xué)與中醫(yī)藥文化的關(guān)系作了發(fā)言；上海中醫(yī)藥大學(xué)李海英副總編就中醫(yī)藥文化在海外的傳播作了發(fā)言；澳大利亞首都中醫(yī)健康中心董事長王海東就中醫(yī)藥文化在澳洲的推廣作了發(fā)言；一些老字號藥店的領(lǐng)導(dǎo)也就此表示了自己的決心，如天津中新醫(yī)藥集團(tuán)達(dá)仁堂制藥廠廠長李燕玨、山西廣譽(yù)遠(yuǎn)國藥有限公司董事長張斌、蘭州眾聯(lián)醫(yī)藥有限公司唐繼軍董事長、吉林省恒愛醫(yī)藥董事長王懷偉等，大家一致認(rèn)為，老字號藥店的傳承離不開中醫(yī)藥文化的引領(lǐng)，而世中聯(lián)中醫(yī)藥文化專委會(huì)的成立，正好給各大藥店、藥廠的進(jìn)一步發(fā)展提供了一個(gè)學(xué)術(shù)平臺與交流平臺，非常期待專委會(huì)能夠如期順利成立。

會(huì)議還討論了中醫(yī)藥文化專業(yè)委員會(huì)人員構(gòu)成及成員招募工作、成立大會(huì)會(huì)議計(jì)劃及安排、未來工作規(guī)劃等相關(guān)事宜。

Effect of CTX-Ⅱ,COMP and MMP-3 on Rat Models with Knee Osteoarthritis by Tongluozhitong Herbs Through Low-Frequency Ultrasound Transdermal Penetration

Qi Qingxue1,Ma Yufeng2,Wu Ji1,Zheng Haoyun1,Lang Song1,Yang Lili1,Zhao Jun1,Zhang Dong1,Wang Qingfu2

(1BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029，China; 2TheThirdAffiliatedHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective: To investigate effect of cartilage morphology and CTX-Ⅱ,COMP and MMP-3 in serum on varying degrees of knee osteoarthritis in rats treated with Tongluozhitong herbal with low-frequency ultrasound transdermal penetration and explain the mechanism and advantage of the therapy.Methods: The rat models of KOA were built by the classic method of cutting off anterior cruciate ligament.SD rats were randomly divided into three groups: control group,the group of ultrasonic transdermal penetration and herbal topical groups.Left knees of rats were models.The control group were normally fed,and were randomly selected to extract serum and detect cytokines at 2nd/4th/8th weeks after surgery and the control group were observed on femoral condylar cartilage morphology and were evaluated by cartilage Mankin's score.Ultrasonic transdermal penetration group and herbal topical group were randomly selected for intervention treatment at the2nd/4th/8th weeks after surgery,1/d,30min,2 weeks.After 2 weeks,the data was recorded which was the same as the control group.Results: Cartilage morphology of the control group were changed significantly at 2nd/4th/8th weeks after modeling and cartilage Mankin's score was positively correlated with increased time and CTX-Ⅱ,COMP,MMP-3 in serum increased.Compared with the control group,cartilage morphology and Mankin's score at 2nd/4th weeks changed (P<0.05).Its role was better than topical medicine group:.Mankin's score decreased significantly at 2nd week(P<0.05).Compared with the control group,CTX-Ⅱof ultrasonic transdermal penetration group decreased sharply at 2nd/4th/8th weeks (P<0.05),and it was significantly better than herbal topical groups.Compared with the control group,COMP of ultrasonic transdermal penetration group decreased sharply at 2nd and 4th weeks (P<0.05).Compared with the herbs topical group,COMP of ultrasonic transdermal penetration group decreased at 4th week (P<0.05).Compared with the control group,MMP-3 of ultrasonic transdermal penetration group decreased at 2nd/4th weeks and there was diversity(P<0.05).Compared with the herbs topical group,MMP-3 of ultrasonic transdermal penetration group decreased at 4 weeks (P<0.05).Conclusion: The low-frequency ultrasound transdermal Penetration Tongluozhitong herbs can effectively Preventing and slowing the Progression of the disease.It may be reducing cartilage matrix-associated cytokines CTX-Ⅱ,COMP and MMP-3 in serum,slowing the degeneration of cartilage matrix; but there is no obvious effect on cartilage of severe KOA.Compared with the traditional method of herbs topical,it has the advantages of rapid onset and efficacy.

Knee osteoarthritis; Low-frequency ultrasound; Tongluozhitong herbs; Cartilage matrix; Cartilage morphological

2012年北京市中醫(yī)藥外治法項(xiàng)目(編號：303-02-71)

戚晴雪(1984—)，男，河北省張家口人，在讀博士生

王慶甫(1956.10—)，男，碩士學(xué)歷，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)藥防治骨關(guān)節(jié)病，Tel：(010)52075251，E-mail：qingPu-wang@sohu.com

R285.6；R684.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.04.024