張瀾瀾李桂偉花麗茹何海龍

（1.黑龍江省漁業(yè)經(jīng)濟研究所 黑龍江 哈爾濱 150018）

（2.黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所 黑龍江 齊齊哈爾 161006）

（3.黑龍江省動物衛(wèi)生監(jiān)督所 黑龍江 哈爾濱 150001）

（4.黑龍江省饒河大馬哈魚放流試驗站 黑龍江 哈爾濱 150018）

禁用獸藥—孔雀石綠

張瀾瀾1李桂偉2花麗茹3何海龍4

（1.黑龍江省漁業(yè)經(jīng)濟研究所 黑龍江 哈爾濱 150018）

（2.黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所 黑龍江 齊齊哈爾 161006）

（3.黑龍江省動物衛(wèi)生監(jiān)督所 黑龍江 哈爾濱 150001）

（4.黑龍江省饒河大馬哈魚放流試驗站 黑龍江 哈爾濱 150018）

孔雀石綠是一種人工合成的三苯甲烷類工業(yè)染料，被應(yīng)用于制陶業(yè)、紡織業(yè)、皮革業(yè)、食品顏色劑和細胞化學(xué)染色劑等。自1933年以來，因其價格低廉、效果顯著，孔雀石綠開始作為驅(qū)蟲劑、殺菌劑和防腐劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中出現(xiàn)，許多國家曾廣泛用于控制魚和魚苗真菌的生長、孵化過程中魚卵的消毒、活魚運輸中的消毒以及魚苗魚種下塘前的消毒，主要用于預(yù)防和治療養(yǎng)殖及運輸過程中高發(fā)的水霉病、鰓霉病和小瓜蟲病，是藥用染料中抗菌效力較強的一類。由于孔雀石綠對防治水霉病等有特效，曾在水產(chǎn)養(yǎng)殖中大量使用，由此也引發(fā)很多問題。

一、孔雀石綠性質(zhì)

孔雀石綠別名堿性孔雀(石)綠、品綠鹽基塊綠、堿性綠、鹽基塊綠、苯胺綠等，為金屬光澤的深綠色結(jié)晶狀固體，易溶于水和乙醇，是由一分子苯甲醛與兩分子二甲基苯胺在濃硫酸或氯化鋅存在的條件下聚合而形成的，以多種形式存在，主要是以草酸鹽或鹽酸鹽的形式存在于醋酸鹽和鹽酸鹽的混合液中?？兹甘G鹽酸鹽是一種工業(yè)級化學(xué)物，是一種雙鋅鹽，是在孔雀石綠生產(chǎn)過程中加氯化鋅而合成的。與其它三苯甲烷一樣，孔雀石綠以鹽、醇類化合物或假堿化合物形式存在時呈二價陰離子形式。由于孔雀石綠假堿的脂溶性較大，因而認為孔雀石綠進入細胞可能是以假堿的形式完成的?？兹甘G分工業(yè)用和試劑用兩大類：工業(yè)用孔雀石綠價值低廉，但含有金屬化合物；試劑用孔雀石綠中有草酸鹽、硫酸鹽、鹽酸鹽和氯化鋅復(fù)鹽4種，其中氯化鋅復(fù)鹽為黃銅色棱形結(jié)晶，以染料鹽和甲醇或假堿兩種離子形式存在，易溶于水，還有很強的脂溶性可以進入細胞，毒性最強。

二、孔雀石綠毒性

孔雀石綠在生物體內(nèi)代謝還原成無色孔雀石綠。由于孔雀石綠和無色孔雀石綠潛在的致突變、致畸和致癌危險性，許多國家均禁止其作為人類食用魚的獸藥使用。

1、對水生動物的毒性

孔雀石綠的毒性較強，對水生動物的安全濃度較低。隨著暴露時間、溫度和濃度的增加,孔雀石綠和無色孔雀石綠對魚類的毒性增強，另外毒性也與環(huán)境因素，特別是pH值、硬度和溶解氧的多少有關(guān)?？兹甘G能使魚卵染色體發(fā)生異常，并使紅細胞產(chǎn)生微核，可使胚胎的存活率下降，孵化時間延長，孵化出的魚苗出現(xiàn)脊椎、頭、背鰭等部位的畸變。使魚鰓嚴重受損，鰓部上皮細胞和片層細胞壞死，白細胞浸潤，引起肝臟竇狀腺充血，局部黑斑癥、肝臟肥大、形成空泡，以致肝細胞壞死、肝硬化等，引起腎臟回旋細管基部的上皮細胞增殖，細胞核溶解破裂，紅細胞皺縮等細胞壞死的病癥，并在莢膜和細血管從之間形成缺口，使腎小球收縮變形，腎細管的腔梢擴大；對消化道也造成不利影響，腸道上皮細胞變性壞死,杯狀細胞數(shù)量增加，腸絨毛和黏膜皺褶破裂，肌層和絨毛膜的結(jié)構(gòu)破壞；位于腦垂體腺的促性腺細胞活性受到抑制，性腺退化；能造成魚體滲透調(diào)節(jié)和糖代謝的紊亂，肝臟和肌肉中的糖原分解引起高血糖、高氯血，蛋白質(zhì)的合成能力也下降，造成魚體貧血。孔雀石綠和無色孔雀石綠對魚類器官（腎、腸）造成損害后，魚體排泄和解毒機能發(fā)生障礙，降低了藥物在魚體內(nèi)的消除速度，造成藥物蓄積性中毒，最終影響魚類的正常攝食和生長發(fā)育。

2.對哺乳動物的毒性

孔雀石綠代謝產(chǎn)物的衍生物及初級和次級芳香胺在癌癥發(fā)生中起著重要的作用。這些產(chǎn)物會穿過細胞膜，到達細胞核中的DNA,破壞DNA導(dǎo)致癌變；實驗顯示，孔雀石綠可導(dǎo)實驗動物子代出現(xiàn)骨骼、心臟、肝和腎發(fā)育異常，表明孔雀石綠有致畸作用；無色孔雀石綠的致突變作用的靶器官是肝臟，嚙齒類動物對無色孔雀石綠更敏感，孔雀石綠和無色孔雀石綠的N去甲基化代謝產(chǎn)物的激活方式與致癌的苯胺類物質(zhì)類似，由此認為孔雀石綠和無色孔雀石綠在體內(nèi)和體外均具有致突變作用。另外，孔雀石綠可引起肝、腎、心臟、脾、皮膚、眼睛、肺等多器官毒性。

三、孔雀石綠代謝

孔雀石綠進入機體后，具有2種代謝途徑：一是孔雀石綠在還原酶的催化下降解成無色孔雀石綠，在組織中殘留，分布于血清、肝、腎、皮膚、肌肉和脂肪等全身組織中。無色孔雀石綠的結(jié)構(gòu)與苯胺相似，它是合成孔雀石綠的前體物質(zhì)，因此也被看成是商品孔雀石綠的污染雜質(zhì)。二是在細胞色素P450催化下經(jīng)N脫甲基作用生成初級和次級代謝產(chǎn)物芳香胺。無色孔雀石綠可在氧化酶的作用下被重新氧化成孔雀石綠，也可在TPO催化下脫甲基生成初級和次級代謝產(chǎn)物芳香胺，其殘留量大小是由代謝時間決定的。

四、孔雀石綠檢測

目前孔雀石綠的檢測主要采用液相色譜法。高效液相色譜法（HPLC）可以檢測孔雀石綠和無色孔雀石綠，普遍使用的是利用衍生柱（填充二氧化鉛）同時測定兩種物質(zhì)。其基本原理是：無色孔雀石綠和孔雀石綠的保留時間不同，無色孔雀石綠從分析柱洗脫后再經(jīng)過衍生柱（填充二氧化鉛），在二氧化鉛的作用下氧化成孔雀石綠，這樣利用紫外檢測器對孔雀石綠和無色孔雀石綠都可以檢測。另外，也可以不采用衍生柱，孔雀石綠先還原成無色孔雀石綠,利用無色孔雀石綠能產(chǎn)生熒光的性質(zhì)進行測定，此方法的特點是靈敏度較高，但測定的是孔雀石綠的總量，無法分別定量孔雀石綠和無色孔雀石綠。高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLCMSMS）是近年來發(fā)展起來的新的檢測技術(shù)，其與液相色譜法不同的是∶使用三重四極桿質(zhì)譜或離子阱質(zhì)譜作為檢測器，代替高效液相色譜的紫外檢測器，該方法兼具定性功能、靈敏度高，但檢測費用昂貴。除此之外，還有薄層色譜法、普通分光光度法等。薄層色譜法雖然具有簡便快速的特點，但是不能同時檢測孔雀石綠的代謝物無色孔雀石綠。分光光度法：普通分光光度法檢測限較高，靈敏度較低，準確性較差，也不能用于代謝物無色孔雀石綠的檢測，而且僅僅局限于水樣的檢測，尚未見該方法在復(fù)雜樣品基質(zhì)中的應(yīng)用，僅可用于孔雀石綠原料藥等的測定。

五、孔雀石綠替代

孔雀石綠因其效果好、價格低廉曾被廣泛使用，又因其殘留時間長、毒副作用大而被禁用。作為一種化工常用原料、試劑，難以禁止生產(chǎn)，其價格低廉、對某些水產(chǎn)病害有特效的特點，加大了對其控制的難度。因此，研制價格低、效果好、對環(huán)境沒有污染的替代藥品是控制孔雀石綠違禁使用的關(guān)鍵。