范興興，李新建，李改英，郭吉利，韓雪蕾，呂 剛，任廣志

(河南農業(yè)大學牧醫(yī)工程學院，鄭州 450002)

豬Fosl2基因克隆、結構預測及其mRNA發(fā)育性表達變化

范興興，李新建，李改英，郭吉利，韓雪蕾，呂 剛，任廣志*

(河南農業(yè)大學牧醫(yī)工程學院，鄭州 450002)

本試驗旨在克隆豬Fosl2基因CDS序列并對其進行分析，研究該基因在豬的不同階段各種組織(心、肝、脾、肺、腎、背最長肌、背部脂肪)中的發(fā)育性表達規(guī)律。以豫南黑豬為材料，利用RT-PCR技術克隆豬Fosl2基因CDS區(qū)域，利用生物信息學方法預測蛋白結構，應用qRT-PCR檢測豫南黑豬7～180日齡上述組織中Fosl2基因的發(fā)育性表達。結果表明，豬Fosl2基因的CDS區(qū)為984 bp，編碼327個氨基酸，跨膜序列為17～33位氨基酸，該肽鏈沒有信號肽，為跨膜非分泌型蛋白，在122～187位氨基酸的位置存在亮氨酸拉鏈結構域，核苷酸和氨基酸序列同其他種屬間的保守性很高。Fosl2基因擁有廣泛的組織表達譜，在心、肝、脾、腎、肺、背最長肌和背部脂肪的不同發(fā)育階段均有不同程度的表達，而其在肺中的表達量均高于同時期其他組織內的表達量，推測豬Fosl2基因可能與肺部組織的發(fā)育有關；其在背部脂肪不同發(fā)育階段的變化趨勢表明其可能參與調控豬脂肪的生成進而影響瘦肉率。本研究結果將為進一步研究豬Fosl2結構及其多功能奠定基礎。

豬；Fosl2；克??；序列分析；發(fā)育性表達

Fos基因家族包含4個基因：Fos、FosB、Fosl以及Fosl2(Fos-like antigen 2)，這些基因編碼形成的亮氨酸鏈可以與Jun基因家族(包含C-Jun、Junb和Jund)編碼的蛋白二聚合成活化因子蛋白1(Activator protein-1,AP1)[1]，而AP1與細胞增殖、分化和轉化調控，細胞凋亡的發(fā)生，胚胎發(fā)育及器官發(fā)生以及體內免疫系統(tǒng)的調控功能相關[2]。近年來，隨著AP1研究的日趨深入，人們發(fā)現Fos基因家族在細胞的增殖分化，動物體的新陳代謝、生長性狀、免疫系統(tǒng)應答等生理活動中起著重要的調節(jié)作用[3]。V.Foletta等[4]1994年首次克隆出小鼠Fosl2基因的cDNA序列，并指出其在卵巢、胃、大腸、小腸、肺、心等內臟器官中呈現高表達狀態(tài)，隨后的研究更顯示出該基因與人和動物的脂肪代謝[2]、骨骼發(fā)育[5-7]以及疾病和癌癥的發(fā)生相關[8-10]，因此該基因也引起了動物育種界以及醫(yī)學界的廣泛關注。然而目前關于Fosl2的相關研究都集中在國外，且多數以人、牛、小鼠為主，豬上關于該基因的研究未見報導。本試驗旨在揭示豬Fosl2的結構與功能，為進一步研究豬Fosl2的生物學功能提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

1.1.1 試驗材料 選取同等飼養(yǎng)條件下喂養(yǎng)的7、30、60、180日齡豫南黑豬各3頭，屠宰后立即取心、肝、脾、肺、腎、背最長肌、背部脂肪7種組織樣品，迅速放入液氮中，-80 ℃保存，用于組織表達特性分析；同時，選取產仔母豬新鮮胎衣樣品組織，放入液氮，-80 ℃保存，用于Fosl2基因CDS的克隆。

1.1.2 主要試劑 DL2000 Marker、TaqDNA聚合酶均購自北京康為試劑公司；凝膠回收試劑盒(TIANgel Midi)購自天根生化科技(北京)有限公司；X-gal、IPTG購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司；Amp購自Sigma公司；RNAiso Plus Trizol、DEPC、大腸桿菌DH5α、反轉錄PCR試劑盒PrimeScript RT reagent Kit With gDNA Eraser、熒光定量PCR試劑盒購自TaKaRa公司，pTA2 Vector載體購自東洋紡(上海)生物科技有限公司。1.1.3 引物的設計與合成 通過比對GenBank上人Fosl2基因(BC022791.1)、牛(NM_001192950.1)、獼猴(NM_001260911.1)序列的保守區(qū)域后，利用Primer5.0設計克隆豬Fosl2基因CDS區(qū)的PCR引物，同時設計該基因以及內參基因GAPDH(AF017079.1)的熒光定量PCR引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物序列信息見表1。1.2 豬Fosl2基因CDS區(qū)擴增及產物的克隆與測序

提取樣品組織總RNA，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA的質量。使用PrimeScript RT reagent Kit With gDNA Eraser試劑盒及特異性引物對豫南黑豬總RNA進行去除基因組DNA以及反轉錄反應，利用RT-PCR方法擴增目的片段，反應結束后取PCR反應液5 μL進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。將產物進行凝膠回收后，將PCR產物與pTA2載體連接，然后轉化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞，37 ℃恒溫培養(yǎng)12～16 h后，Amp+平板挑取陽性菌落后提取質粒并進行PCR鑒定，選取陽性重組子送寶生物(大連)工程有限公司測序。

表1Fosl2基因及內參基因的引物信息

Table 1 The information of primers used in the study

基因名稱Genename引物序列(5'-3')Primersequence產物長度/bpLengthofproduct用途PurposeFosl2F1-GAGGGCGGGGGAAGAAAAACAR1-GGTGAAACCAAAAGGCACTGAGCATT1427CDS克隆Fosl2F2-AGCAGAAATTCCGGGTAGATATGGR2-AGCGAGGGTATGGGTTGGACC138組織表達特性分析GAPDHF-GGTCACCAGGGCTGCTTTTR-CATTTGATGTTGGCGGGAT210組織表達特性分析

1.3 多物種種間Fosl2進化分析

應用DNAStar軟件對8個不同物種間Fosl2 CDS區(qū)域的核苷酸及氨基酸序列進行同源性比較，構建Fosl2基因序列的進化關系樹，Fosl2核苷酸及氨基酸序列信息來源于GenBank，具體信息為牛(NM_001192950.1)、人(BC022791.1)、獼猴(NM_001260911.1)、大猩猩(XM_004029036.1)、星鼻鼴鼠(XM_004686333.1)、樹鼩(XM_006162129.1)、綿羊(XM_004005786.1)、虎鯨(XM_004268168.1)。

1.4 豬Fosl2蛋白結構和功能預測

用ExPASy-ProtParam Tool工具對豬Fosl2蛋白基本理化性質進行包括氨基酸組成、元素組成、等電點、分子量等的預測，應用ProtScale的在線版本對豬Fosl2蛋白質進行疏水區(qū)域預測，應用TM-PRED在線軟件分析豬Fosl2蛋白的跨膜區(qū)，應用Signa1P4.0在線軟件進行豬Fosl2的信號肽分析，應用PHD在線軟件對豬Fosl2的二級結構進行預測，應用InterProScan在線軟件對豬Fosl2蛋白結構域進行預測。

1.5 豬Fosl2基因組織表達特性分析

1.5.1 cDNA合成 取4個不同時期(7、30、60、180日齡)豫南黑豬的心、肝、脾、肺、腎、背最長肌以及背部脂肪分別進行總RNA提取，測得總RNA的OD260 nm/OD280 nm比值在1.8～2.0即為符合要求，根據PrimeScript RT reagent Kit With gDNA Eraser試劑盒進行去除基因組DNA反應以及反轉錄，基因組DNA的去除反應體系10 μL：5×gDNA Eraser Buffer 2.0 μL，gDNA Eraser 1.0 μL，RNase Free dH2O 5.0 μL，總RNA 2.0 μL?；靹蚝蠖虝弘x心，42 ℃ 2 min，該產物命名為A。反轉錄體系為20 μL ：A 10 μL，5×PrimeScript BufferⅡ 4.0 μL，PrimeScript RT Enzyme Mix1 1.0 μL，RT Primer Mix 1.0 μL，RNase Free dH2O 4.0 μL。37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 S，該反應產物命名為B，即為cDNA產物。1.5.2 熒光定量PCR反應 根據試劑盒說明，在羅氏熒光定量PCR Lightcycler 480儀上進行，熒光定量PCR反應體系為25 μL：SYBR GREEN 12.5 μL，Fosl2-F1(10 μmol·L-1)1 μL，Fosl2-R1(10 μmol·L-1)1 μL，B反應液 1.5 μL，加滅菌ddH2O至終體積為25 μL。反應條件：94 ℃預變性30 s ；94 ℃變性30 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸1.5 min，45個循環(huán)。系統(tǒng)將自動采集熒光強度增長指數，并進行分析繪制每一感應管的擴增動力學曲線。在PCR反應過程中，設定無cDNA 樣品的空白管作為陰性對照。

1.5.3 熒光定量結果分析及數據處理 定量中以180日齡肺的Ct值為對照進行計算，以GAPDH為參照進行相對定量數值分析，結果用Ct法(2-△△Ct)進行統(tǒng)計計算，最終數據用Graphpad Prism 5.0軟件進行圖形制作以及單因素方差分析(One way ANOVA)和多重比較分析，所有結果均以“平均值±標準誤差(Mean±SE)”表示。P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著。

2 結 果

2.1 豬Fosl2基因的克隆

豬胎衣中的總RNA提取后，經測定OD值符合要求。反轉錄后進行PCR，產物經凝膠電泳顯示獲得長度為1 427 bp的片段(圖1)，將產物回收與載體連接后，選取陽性質粒進行測序。結果表明，所得片段長度為1 427 bp，其中包括豬Fosl2基因CDS區(qū)984 bp(圖2)，將序列提交NCBI，獲得登錄號KM191330。通過BLAST在線比對，與GenBank牛的Fosl2基因同源性為91%，所得片段即為豬的Fosl2基因。

圖1 豬胎衣組織目的片段RT-PCR結果Fig.1 The RT-PCR results of Fosl2 of the pig afterbirth

2.2 多物種間Fosl2的同源性比較以及進化分析

利用DNAStar軟件，對豬與牛、人、獼猴、大猩猩、鼴鼠、樹鼩、綿羊以及虎鯨的Fosl2 基因的CDS區(qū)域核苷酸及氨基酸序列進行比對，結果如表2所示：豬與牛、人、獼猴、大猩猩、星鼻鼴鼠、樹鼩、綿羊，虎鯨的核苷酸序列同源性分別為 91%、92%、92%、100%、91%、92%、94%、94%；豬與牛、人、獼猴、大猩猩、星鼻鼴鼠、樹鼩、綿羊、虎鯨的氨基酸序列同源性分別為 95%、97%、96%、100%、95%、96%、95%、96%。利用GenBank 公布的核苷酸序列，采用DNAman軟件建立了系統(tǒng)進化樹(圖3)。該進化樹顯示，豬Fosl2與大猩猩Fosl2在一個小分枝上，2個物種的分子進化地位最近，同時與其他哺乳動物在一個大分枝上。

上行表示豬Fosl2核苷酸序列，下行表示推測的豬Fosl2氨基酸序列；起始密碼子ATG用下劃線標出，“﹡”代表終止密碼子TAAThe upper line show the nucleotide sequences and the lower line show the deduced amino acid sequences；The initial code ATG is underlined，﹡indicate the terminal code TAA圖2 豬Fosl2 核苷酸序列及推測氨基酸序列Fig.2 Nucleotide sequences and deduced amino acid sequences of pig Fosl2

表2 豬Fosl2與其他動物的核苷酸和氨基酸序列一致性比較

Table2 Comparison of nucleotide and amino acid of Fosl2 between pig and other animals

物種Species核苷酸一致性/%Nucleotideidentity氨基酸一致性/%Aminoacidsidentity牛Bostaurus9195人Homosapiens9297獼猴MacacaMulatta9296大猩猩Gorilla100100星鼻鼴鼠Condyluracristata9195樹鼩Tupaiachinensis9296綿羊Ovisaries9495虎鯨Orcinusorca9496

所引用的序列均來自GenBank數據庫。登錄號如下：牛(NM_001192950.1)、人(BC022791.1)、獼猴(NM_001260911.1)、大猩猩(XM_004029036.1)、星鼻鼴鼠(XM_004686333.1)、樹鼩(XM_006162129.1)、綿羊(XM_004005786.1)、虎鯨(XM_004268168.1)All sequences come from the GenBank database.Bos Taurus(NM_001192950.1)，Homo sapiens(BC022791.1)，Macaca Mulatta(NM_001260911.1)，Gorilla(XM_004029036.1)，Condylura cristata(XM_004686333.1)，Tupaia chinensis(XM_006162129.1)，Ovis aries(XM_004005786.1)，Orcinus orca(XM_004268168.1)圖3 豬Fosl2 與其他動物之間系統(tǒng)進化樹的構建Fig.3 Phylogenetic tree of Fosl2 between pig and other animals

2.3 豬Fosl2蛋白理化性質分析以及結構與功能的預測

利用在線軟件分析可知，豬Fosl2蛋白由327

個氨基酸組成，分子質量為35.33 ku，理論等電點為6.42，分子式為C1512H2447N449O504S11，原子總數為4 923，N端為蛋氨酸，估計半衰期為30 h，蛋白質的不穩(wěn)定指數為89.94，表明此蛋白的性質不穩(wěn)定，脂溶系數為66.51。雖為親水性蛋白，但在42、44～54、64～72、85～95、98～100、102～107、181～192、205、213、215～224、246～254、264～272、277～286、321～323等位點具有疏水性，最大疏水區(qū)位于第218位氨基酸，最大疏水值為2.167，最大親水區(qū)位于第124位氨基酸，最大親水值為-3.256，其親水性平均值為-0.669；Fosl2包括α-螺旋63個，百分比為19.27%，多集中在序列的中間區(qū)域，β-折疊共2個，位于第58和59位氨基酸，占0.61%，延伸主鏈占7.34%，無規(guī)則卷曲238個，占72.78%；Fosl2蛋白存在36個磷酸化位點，其中絲氨酸29個，蘇氨酸5個，絡氨酸2個；Fosl2的跨膜序列為17～33位氨基酸，序列為SGSPAHAESYSSGGGGQ，該蛋白為跨膜蛋白，Signa1P4.0信號肽預測工具分析發(fā)現存在信號肽的概率為0，說明該蛋白不存在信號肽，為非分泌型蛋白(圖4)。Fosl2蛋白在122～187位氨基酸的位置含有亮氨酸拉鏈域。

A.豬Fosl2氨基酸序列理化性質；B.豬Fosl2氨基酸二級結構預測圖。A圖中上行字母表示推測的豬Fosl2氨基酸序列；下行中的下劃線表示延伸主鏈，波浪線表示無規(guī)則卷曲，雙劃線表示α-螺旋，加重加粗下劃線表示β-折疊；上行中字母加粗斜體表示該位點為酪氨酸磷酸化位點，字母外加方框表示絲氨酸磷酸化位點，字母本身只加粗表示蘇氨酸磷酸化位點。B圖中R表示無規(guī)則卷曲，B表示β-折疊，A表示α-螺旋，E表示延伸主鏈A.The physicochemical properties of Fosl2 amino acid sequence in pig；B.The prediction graph of Fosl2 amino acid sequence in pig.The upper line showed deduced amino acid sequences；The lower line extended strand was underlined，random coil was marked by wavy lines，alpha helix was double underlined，beta turn was bold underlined；The bold italic letter indicated Tyr phosphorylation sites，the blocked letter showed Ser phosphorylation sites，the only bold letter indicated Thy phosphorylation sites.In Fig.B，R showed random coil，beta turn was showed by B，alpha helix was showed by A，the extended strand was showed by E.圖4 豬Fosl2氨基酸序列理化性質分析及二級結構預測Fig.4 Physical and chemical properties analysis and secondary structure prediction of pig Fosl2 amino acids sequence

2.4 豬Fosl2 mRNA組織表達特性

Fosl2基因在不同時期豬心、肝、脾、肺、腎、背最長肌、背部脂肪中的發(fā)育性表達量見表3。結果表明，Fosl2基因在上述7種組織的4個不同時期(7、30、60和180日齡)都有不同程度的表達：肺不同時期的表達量均不同程度的高于同時期的其他組織表達量，其中7日齡為表達量最高值，且顯著高于其他日齡(P<0.05)，隨后30日齡表達量驟然下降(P<0.05)并達到最低值，隨后開始逐漸上升。其余組織在7日齡為表達量最大值的還有肝、脾和腎，肝在7日齡后表達量逐漸下降，且到60日齡時為最低值，180日齡時又有回升；脾則表現出先降低后升高，隨后再降低的曲折線表達模式；腎則是從7日齡后，表達量一直呈下降的趨勢。心和背部脂肪在4個不同發(fā)育時期呈現出一致的變化規(guī)律，均為30日齡時表達量降低，隨后逐漸增加，直到180日齡時表達含量達到最高值。背最長肌內的表達量在30日齡時達到最大值，隨后又逐漸降低直至180日齡時達到最低值。

表3 豬Fosl2基因的組織表達量

Table 3 The expression of pigFosl2 in different tissues

組織Tissue7日齡7d30日齡30d60日齡60d180日齡180d心Heart0.018±0.0010ab0.0071±0.0013a0.019±0.0044ab0.026±0.0039b肝Liver0.076±0.021b0.037±0.0036a0.011±0.0056a0.036±0.0041a脾Spleen0.22±0.042b0.064±0.013a0.21±0.065b0.12±0.012ab肺Lung1.4±0.17c0.21±0.023a0.55±0.12ab0.87±0.059b腎Kidney0.095±0.01b0.063±0.036ab0.058±0.0051ab0.022±0.0021a背最長肌Longissimusmuscle0.0071±0.00021b0.015±0.00051c0.0041±0.0011a0.0037±0.00095a背部脂肪Backfat0.021±0.0048a0.088±0.0043b0.041±0.0015a0.14±0.012c

同行數據后所標數字相同表示差異不顯著(P>0.05)，所標字母不同表示差異顯著(P<0.05)

In the same tissue,values with the same letter show no significant difference(P>0.05)；value with the different letter show significant difference(P<0.05)

3 討 論

本試驗通過RT-PCR技術獲得豬Fosl2基因的CDS區(qū)，其包含984個堿基，編碼327個氨基酸。人Fosl2全長25.17 kb，cDNA為981 bp，編碼由326個氨基酸殘基組成的蛋白[11]。小鼠的Fosl2全長22.05 kb，編碼由326個氨基酸殘基組成的蛋白[12]。研究預測豬Fosl2基因編碼蛋白質的理論分子量為35.33 ku，為跨膜非分泌型蛋白，具有14個疏水區(qū)，但其屬于親水性蛋白，由此可推測，Fosl2可能存在膜結合形式，并作為機體某些調控機制的載體通道。通過不同脊椎動物種間Fosl2基因的同源性比較，發(fā)現Fosl2基因物種間的同源性很高，尤其與大猩猩核苷酸序列的同源性高達100%，與虎鯨的同源性也高達94%，這表明該基因的進化保守性非常高。同時發(fā)現，Fosl2蛋白在122～187位氨基酸含有亮氨酸拉鏈結構域，正是通過該區(qū)域，Fosl2蛋白與Jun基因家族編碼的蛋白聚合成AP1，進而發(fā)揮其作用。

本試驗利用實時熒光定量PCR技術對7、30、60和180日齡豫南黑豬的心、肝、脾、肺、腎、背最長肌以及背部脂肪中Fosl2基因的表達規(guī)律進行了研究，結果顯示，Fosl2基因擁有廣泛的表達譜，在上述組織的不同發(fā)育階段均有不同程度的表達，7日齡肺內的表達量明顯高于其他組織，因此推測該基因與胚胎肺部組織的早期發(fā)育相關。一些病理的研究發(fā)現，Fosl2基因的不同表達量與肺部組織的階段性發(fā)育調節(jié)或病變相關，R.Eferl等[13]發(fā)現，Fosl2基因參與調控肺纖維化病變過程中的細胞外基質生成，并認為該基因是引起肺纖維化的一種致病因子，Fosl2轉基因小鼠較正常小鼠更易患上嚴重的非特異間質性肺炎等肺病，本試驗中，肺Fosl2基因的表達量在30日齡下降、后又上升的規(guī)律，反映出該基因可能在豬肺的發(fā)育過程中有某些特殊意義，其在病理研究中的發(fā)現提示該基因可能參與豬肺部疾病的發(fā)生，這還需要更深入的試驗佐證。

C.Wrann等[2]證實，哺乳動物類細胞Fosl2基因的敲除會導致瘦素基因(Leptin，LEP)表達量的降低，Fosl2的過量表達會促進小鼠脂肪細胞內LEP基因表達量的增加，而瘦素與哺乳動物的能量代謝、脂肪生成息息相關。C.Wrann[14]發(fā)現Fosl2基因對離體培養(yǎng)的細胞以及小鼠體內LEP基因的表達發(fā)揮重要的調控作用。本試驗中，背部脂肪內Fosl2基因在30日齡時的表達量較7日齡顯著升高，60日齡時又有顯著下降，180日齡的表達量顯著上升，結合豬的整個生長階段分析其原因：30日齡是仔豬的哺育階段，體內脂肪或者細胞分裂有較快且明顯的增加，因而Fosl2表達量升高；隨后60日齡保育階段，仔豬的飼料結構、生長環(huán)境發(fā)生變化，導致仔豬掉膘，其體內脂肪的蓄積略有降低，因而Fosl2表達量降低；180日齡時Fosl2基因的表達量驟然上升，這可能是由于育肥豬此階段生長迅速、營養(yǎng)充足、體內脂肪快速蓄積[15]；綜合該基因的變化趨勢與豬脂肪的生長規(guī)律，推測該基因可能通過與LEP基因的相互協調作用影響豬的脂肪生成，同時參與調控育肥期豬的瘦肉率，進而影響其生長速度，這種推測如果得到證實，將對豬育種工作發(fā)揮一定的作用。

N.Reich等發(fā)現，Fosl2轉基因小鼠從12周開始，皮膚發(fā)生纖維化病變，成肌纖維細胞的分化增強[16]，另外，Fosl2基因的沉默表達促進了肌肉肌酸激酶和肌球蛋白重鏈表達含量的升高[17]。豬肉品質的評判指標中，嫩度是肉的主要食用品質之一，而嫩度是由肌肉中各種蛋白質的結構決定的。同時肌肉系水力是一項重要的肉質性狀，它不僅影響肉的色香味、營養(yǎng)成分、多汁性、嫩度等食用品質，而且有著重要的經濟價值，而系水力大部分是由肌肉的纖維結構和毛細血管張力而定。本試驗中，肌肉內Fosl2基因的表達量在30日齡達到最大值，而此時正是肌肉細胞的快速分裂增長期[15]，60和180日齡該基因的表達量較30日齡有顯著降低，原因可能是肌肉的生長速度降低，因此推測Fosl2基因可能參與豬肌肉生成的調控過程，進而對豬肉的品質產生一定的影響。

Fosl2基因在脾、腎、肝、心等組織中也有適量表達。但4種內臟中Fosl2的表達規(guī)律卻不盡相同：脾呈現30日齡稍有下降、60日齡小幅上升、180日齡再降低的曲折線表達規(guī)律；7日齡的腎表達量最高，隨后其表達量緩慢降低；肝是自7日齡后開始降低，60日齡為最低表達量，隨后的180日齡又有所回升；心內30日齡為最低表達量，后又有所回升，直到180日齡時其表達量達到最大值。Fosl2基因在不同內臟組織中表達規(guī)律的差異性也預示著該基因可能參與多種內臟的發(fā)育過程，這需要更深入的試驗驗證。

4 結 論

本試驗成功克隆豬Fosl2基因CDS區(qū)，分析其種間高度保守性，該基因編碼肽鏈無信號肽，為跨膜非分泌型蛋白，第122～187位氨基酸位點存在亮氨酸鏈結構域。豬Fosl2基因在肺組織內的表達量均高于同時期在心、肝、腎、脾、背最長肌和背部脂肪內的表達量，推測該基因可能參與肺組織的生長發(fā)育過程；另外該基因在脂肪組織內的表達變化規(guī)律與豬發(fā)育階段的脂肪生長規(guī)律一致，預測該基因可能參與豬的脂肪生長調控進而影響瘦肉率；該基因在豬的心、肝、脾、腎、背最長肌中的功能作用，還需要進一步的研究證實。

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(編輯 郭云雁)

Gene Cloning，Bioinformatics Analysis and Developmental Expression ofFosl2 Gene in Pig

FAN Xing-xing，LI Xin-jian，LI Gai-ying，GUO Ji-li，HAN Xue-lei，Lü Gang，REN Guang-zhi*

(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)

The study was conducted to clone and analyze CDS sequence of pigFosl2 gene，and to investigate the developmental expression ofFosl2 in pig various tissues(heart，liver，spleen，lung，kidney，the longissimus muscle and backfat) at different stages.In this study，Yunan Black pig was used as experimental animal to clone the CDS region ofFosl2 gene by RT-PCR，the protein structure were predicted by bioinformatics，meanwhile，qRT-PCR was used to analyze developmental expression ofFosl2 gene in pig from 7- to 180-day-old.The results showed that the CDS of pigFosl2 gene was 984 bp，encoding 327 amino acids.It had no signal peptide in peptide chain，but had a transmembrane domain and a basic-domain leucine-zipper，which were from 17 to 33 amino acids and from 122 to 187 amino acids,respectively.The protein of pig Fosl2 had high conservatism among mammal，and it was transmembrane and non-secretory protein.TheFosl2 was widely expressed in tissues，the expression ofFosl2 in lung was higher than other tissues at the same stage，it was deduced that pigFosl2 might be related to the process of lung development；the variation trend in backfat showed thatFosl2 might had the function enhancing adipogenesis and then regulate lean meat percentage.Therefore，the results of this study may lay foundation for further research on the structure and the role ofFosl2 gene in physiogenesis in pig.

pig;Fosl2；cloning；sequence analysis；developmental expression

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.02.006

2014-05-26

河南省生豬產業(yè)技術體系創(chuàng)新團隊(S2012)

范興興(1988-)，女，河南三門峽人，碩士生，主要從事豬遺傳育種與繁殖研究，E-mail:13643806298@163.com

*通信作者：任廣志，教授，主要從事豬遺傳育種與繁殖研究，E-mail: rgzhxt@163.com

S828.2

A

0366-6964(2015)02-0211-08