趙國玉，曹 莉，陳鏡華，韓日疇

(廣東省昆蟲研究所，廣東省野生動物保護與利用公共實驗室，廣東省農業(yè)害蟲綜合治理重點實驗室，廣州 510260)

隨著21 世紀世界經濟高速發(fā)展、社會人口激增和人民生活水平提高，人們對優(yōu)質蛋白質的需求量也愈來愈大，蛋白質資源不足是當今世界存在的四大危機之一。據報道，世界上缺乏蛋白質的人口約占總人口的1/5，尤其是缺乏動物性蛋白質，尋求新的蛋白質資源已是擺在我們面前的一項迫切任務 (胡榮學，2009;Makkar et al.，2014)。

昆蟲是地球上最大的生物類群，全世界現存昆蟲可能超過1000 萬種，目前已定名的昆蟲約100 萬種，遍布所有的生態(tài)系統(tǒng)，具有種類多、周期短、繁殖快、易于飼養(yǎng)且可利用廢棄物進行大規(guī)模飼養(yǎng)等優(yōu)點(ˇCiˇcková et al.，2012)，其蛋白質含量高，可達干重的50%-82% (Schabel，2010)，是一類巨大的生物資源，被認為是目前最大且最具開發(fā)應用潛力的動物蛋白源，將成為21 世紀人類蛋白質的主要來源之一 (Makkar et al.，2014)。

1 昆蟲蛋白的價值

1.1 昆蟲蛋白的營養(yǎng)價值

昆蟲蛋白是一種高質量的動物蛋白質資源，富含各種氨基酸 (李奕冉等，2010;祝海娟，2013;Barroso et al.，2014)，氨基酸種類和含量比例符合聯(lián)合國糧農組織/世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)提出的氨基酸模式(馮穎，2005)。

昆蟲中蛋白質含量優(yōu)于豬肉、大豆以及風干牛肉，可與魚粉相媲美(Ran and Zhao，2014)。常見干物質基礎昆蟲如黑水虻幼蟲粗蛋白含量達40%-44% (Newton et al.，1977;安新城和呂欣，2007;St-Hilaire et al.，2007 a，2007 b;Sealey et al.，2011)，黃粉蟲粗蛋白質含量達47.70%-64.70% (謝保令，1994)，蝗蟲蛋白質含量達50.00%-60.00%，其中7種必需氨基酸含量與氨基酸總量的比值在35%左右，水溶性蛋白的比例超過40% (段玉峰，2005);蠶蛹中蛋白質含量占60% 左右，18種氨基酸的含量均占1.5% 以上，其中必需氨基酸占總氨基酸量42.20%-60.00% (王偉等，2006);家蠅幼蟲(蠅蛆)風干物中粗蛋白質含量為40.00%-65.00% (Adesina et al.，2011;Odesanya et al.，2011;Okah and Onwujiariri，2012)，賴氨酸、蛋氨酸和必需氨基酸總量分別是魚粉的2.6、2.7 倍和2.3 倍，氨基酸質量接近魚粉(白鋼和張翼翔，2010)。

另外，昆蟲氨基酸的消化利用率非常高，可達70.00%-98.93%，接近或超過肉、魚的消化率(Newton et al.，1977;Hwangbo et al.，2009;Pretorius，2011)，高于植物性蛋白的消化利用率(Finke，2008)。因此，將昆蟲蛋白粉加入到主食品中混合食用，可以相互補充，為機體提供合理、全面、豐富的蛋白質。

1.2 昆蟲蛋白的保健價值

昆蟲蛋白具免疫增強作用，可通過促進淋巴細胞增殖，刺激抗體分泌，調節(jié)特異性免疫應答或促進巨噬細胞的吞噬作用，調節(jié)非特異性免疫，提高機體對外界的抵御能力。

研究表明，蠶蛹氨基酸能提高免疫功能低下小鼠的細胞免疫和體液免疫功能(尹武英和彭力，1998)。黃粉蟲具有一定的促進生長、益智、抗疲勞和抗組織缺氧作用，不僅能降低血脂及促進膽固醇代謝，還能提高小鼠外周淋巴細胞轉化和降低骨髓微核率(楊兆芬等，1999)，提高飼料利用率，增加小鼠主要免疫器官的臟器系數，提高機體免疫力(李漢臣等，2007)。蠅蛆蛋白粉可顯著提高正常小鼠半數溶血值(HC50)，增強其體液免疫功能，對免疫功能低下小鼠HC50 無影響，但可顯著提高其吞噬指數(a)值，并使體液免疫功能恢復至正常水平(覃容貴等，2007)。蠶蛹蛋白能顯著提高小鼠生成抗體脾細胞數，同時，明顯增加IL-2 分泌，促進淋巴細胞的增殖(昌友權等，2007)。蠶蛹蛋白多肽可增強小鼠網狀內皮系統(tǒng)的吞噬功能(楊安樹等，2008)，顯著增加小鼠胸腺指數、小鼠足跖腫脹度、小鼠抗體細胞生成數量以及單核-巨噬細胞吞噬能力(戚穎欣等，2009)，具明顯的免疫調節(jié)作用。

1.3 昆蟲蛋白的藥用價值

昆蟲作為傳統(tǒng)的中藥材資源在我國已有2000多年歷史(李奕冉等，2010)，昆蟲蛋白具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤作用，是篩選藥物、制備疫苗等的天然資源寶庫。

研究表明，栗蠶蛹經大腸埃希菌誘導后體液中產生的新蛋白對大腸埃希菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球茵及柞蠶鏈球菌均表現出一定的抑菌作用(李亞潔等，2009)。黃粉蟲防御性分泌蛋白物對不同菌的抑制強度為桔青霉 ＞大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌 ＞ 白色假絲酵母 ＞ 黑曲霉(強承魁等，2006)。源于蠅蛆體內的抗菌肽對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽胞桿菌、肺炎克氏菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、白色念珠菌等細菌均有抑制作用 (郭海萍等，2006)。

蜂毒素和天蠶素在亞毒性濃度下可抑制艾滋病病毒HIV-1 基因的表達，降低其增殖(Wachinger et al.，1998)。宮霞等(2004)從蠅蛆經沸水熱變性過程中分離純化得到一種抗菌肽MDL-1，不僅具有抗熱性，還有很強的抗病毒活性。煙蚜夜蛾幼蟲的血液淋巴細胞對多種DNA、RNA 病毒具有明顯的抑制作用，可使病毒的感染力降低(楊瑞麗等，2003)。

研究還發(fā)現，柞蠶蛹抗菌肽可明顯降低小鼠大腸癌發(fā)生率，對大腸癌細胞的抑制率達46%(李奕冉等，2010);在蠶蛹中含有少量干擾素，也具備一定的抑制腫瘤的作用，尤其是對肺癌效果明顯(李琴韻和胡蓓莉，1996)。蠅蛆抗菌肽能有效抑制人胃癌細胞MGC80-3 和BGC-823、人肺癌細胞SPC-A-1、人乳腺癌細胞MCF-7、黑色素瘤A375 細胞、肝癌SMMC-7721 細胞以及白血病細胞K562 的體外增殖(邱曉燕等，2003;文彩虹等，2004;曹小紅等，2006;賀莉芳等，2006)，工程蠅蛆體內分離的凝集素在體外對K562細胞也具有抑制生長作用(曹小紅等，2009)，這表明可通過生物工程技術大量表達并提取某種昆蟲蛋白以用于臨床試驗研究。

2 昆蟲蛋白的開發(fā)應用

2.1 昆蟲蛋白食品

將昆蟲作為美味食品，在世界上許多國家和地區(qū)早已開始了，并且各自具有獨特的食用種類、方法和習俗(Bodenheimer and Junk，1951)。昆蟲食品加工效益很高，生產全過程不用化學藥物、添加劑等，屬于綠色食品(尹凱，2008)。我國食用昆蟲資源的調查結果顯示，目前已報道的283種及亞種的昆蟲，涉及13 個目、71 個科(Hu and Zha，2009)。為人們所接受的已商業(yè)化的可食用昆蟲主要有蟬、蠅蛆、蝗蟲、螞蟻、黃粉蟲、蠶蛹等，這些昆蟲除可直接烹制食用外，也已被加工成各種休閑零食如罐頭或以原料的形式添加入各種食品如餅干、蛋糕中商業(yè)化應用(趙大軍，2000;潘怡歐，2005;崔葉潔，2009;祝海娟，2013)。

然而，并不是所有昆蟲都可以直接食用，例如劇毒昆蟲如斑蝥、豆蕪脊、青胺蟲等不能直接食用，微毒昆蟲則需適當處理后方可食用。由此可見，選擇食用昆蟲時要慎重、準確，一方面可以參考民間傳統(tǒng)文化，另一方可以通過大量試驗進一步驗證研究。

由于昆蟲蛋白含有豐富的營養(yǎng)成分，具有某些特殊功效，經加工提取后的昆蟲蛋白作為功能食品備受關注。日本從蠶蛹制取優(yōu)質蛋白，生產氨基酸系列產品已獲多項專利(羅贊，2009)，德國、美國、法國及澳大利亞等國家的昆蟲加工公司也在蓬勃發(fā)展。在我國，以蠅蛆血淋巴為原料研制出了“力諾健之素”，以及以蠅蛆幾丁糖為原料的“力諾活力素”(潘怡歐，2005)。膜翅目、蟻科的鼎突多翅蟻因具有抗炎、抗風濕、抗癌等多種藥效已被精加工為口服液、飲料、沖劑等保健食品(崔葉潔，2009)。以黃粉蟲為主要原料制作成的黃粉蟲酒、黃粉蟲蛋白功能飲料、氨基酸口服液等產品也已推向市場(趙大軍，2000)。

2.2 昆蟲蛋白飼料

昆蟲蛋白富含天然抗菌肽等有益物質，是優(yōu)質的蛋白質飼料來源，作為飼料添加劑用于動物飼養(yǎng)，可促進動物生長、提高各種動物的抗病能力、減少抗生素的使用、降低飼料成本，提高養(yǎng)殖效益。目前，在畜禽及水產動物等養(yǎng)殖中應用較多的主要是蠶蛹粉、黃粉蟲、蠅蛆粉等。

研究表明，利用蠶蛹粉喂豬后，豬平均日增重比不加蠶蛹粉的要高23.6%，且可縮短育肥期，提高出欄率(張建紅和周恩芳，2002)。用黃粉蟲粉等昆蟲粉代替基礎飼料蛋白原料2.5%、5.0%、7.5%飼喂豬，可使豬平均日增重較對照組分別提高15.4%、37.2%、40.1%，料肉比分別下降4.8%、9.7%、11.3% (陳曉偉，2012)。在沒有氨基酸補充的情況下，將50%的黑水虻預蛹粉代替常規(guī)飼料中的血漿蛋白粉飼喂斷奶小豬，可以顯著提高4%的收益和9%的飼料轉化率(Newton et al.，2005)。

用黃粉蟲蛋白飼料飼喂蛋雞較普通飼料產蛋率提高5.06%，蛋重提高12.4%，料蛋比下降低6.9%，凈增效益提高32.12% (鄧青云等，2008)。在飼料中添加蠅蛆粉飼喂肉雞，可顯著提高肉雞飼料轉化率、日增重、胸肌和腿肌的重量，提高生長指標和經濟效益 (賈生福和馬彥彪，2007;Hwangbo et al.，2009;Pretorius，2011;Okah and Onwujiariri，2012)，基礎飼料中蠅蛆粉添加的最佳配比為10%-15% (Hwangbo et al.，2009)。用黑水虻蟲粉代替的豆粉飼喂雞可顯著提高飼料轉化率，利于雞的生長 (Newton et al.，2005)。

同樣，在水產養(yǎng)殖中昆蟲蛋白粉的應用甚廣。用16%的柞蠶免疫活性蛋白替代魚粉飼喂鮑魚，增長率可提高31.2%-32.9%，并有望縮短鮑魚的育成時間(祁芳和李崗生，2001)。將蠅蛆粉添加到凡納濱對蝦飼料中，可顯著提高對蝦體長、體質量、特定生長率和成活率(鄭偉等，2010)，并在一定程度上提高對蝦抵抗弧菌的能力(陳乃松等，2007);凡納濱對蝦飼料中添加蠅蛆抗菌肽可促進對蝦生長，并能提高對蝦的免疫相關指標(陳冰等，2010)。蠅蛆粉代替魚粉飼喂羅非魚，有利于羅非魚的生長，且代替34%的魚粉時，羅非魚的生長指標和存活率最高 (Ogunji et al.，2007);與肉骨粉、豆粉飼喂異鰓胡鯰魚相比，蠅蛆粉能提高其生長指標(Ossey et al.，2012);蠅蛆粉部分取代魚粉能促進鯽魚生長，提高飼料利用效率，增強鯽魚白細胞吞噬功能和呼吸爆發(fā)能力，并可增強魚體抗氧化能力，從而增強其非特異性免疫功能，且對魚肉品質無不良影響(李小波，2013)。

用蠶蛹粉飼養(yǎng)水貂，100 g 蠶蛹可代替200-500 g 肉類蛋白質;100 g 蠶蛹粉的可消化蛋白質可代替312 g 淡水魚的可消化蛋白質，同時還可以增強貂皮毛絨的光澤，提高毛絨的品質(李靜等，2007)。用黑水虻蛹粉飼喂美洲鱷，結果證明黑水虻有利于美洲鱷的生長(Bodri and Cole，2007)。

2.3 昆蟲蛋白藥物

隨著生物技術及生產工藝的飛速發(fā)展，昆蟲蛋白藥物的研發(fā)已進入更深層次。從多種昆蟲體內免疫血淋巴中提純的凝集素、免疫蛋白、免疫肽、酚氧化酶、抗菌肽已被用于廣譜性抗細菌、抗病毒、抗腫瘤細胞的藥品開發(fā) (Yu and Li，2005;王毅力等，2009)，抗菌肽應用研究已進入臨床試驗(王毅力等，2009)，螞蟻提取物臨床上已用于治療類風濕關節(jié)炎、風濕性關節(jié)炎、治療慢性肝炎，降低谷丙轉氨酶，起到保肝護肝作用(沈立榮和任玉翠，1999)。

浙江省中醫(yī)藥研究院以蠶蛹復合氨基酸為主要原料制成的“復方營養(yǎng)要素”制劑能顯著抑制肝癌、肉瘤S180荷瘤小鼠的瘤體生長，延長艾氏腹水瘤小鼠的生存期，該制劑對包括胃癌、食管癌、大腸癌等120 例惡性腫瘤臨床試驗結果顯效88 例，有效24 例，無效8 例，總有效率為93.33% (樓錦新，1995)。

昆蟲抗菌肽作為藥物成分的產品已大量上市。蜂毒肽作為一種可應用于制備殺滅細菌和治療膿毒癥的藥物小分子多肽已被申請專利(郭毅斌等，2005)，多種蜂毒制劑如蜂毒素、蜂散痛、蜂特靈和蜂毒注射液等已被廣泛應用于臨床(劉紅云和童富淡，2003)。此外昆蟲抗凍蛋白可用于人和動物的卵、精子、胚胎、心臟或肝臟等器官的超低溫保存以改善冷凍質量(Amir et al.，2004)。昆蟲細胞培養(yǎng)技術也已用來工業(yè)化大規(guī)模生產重組蛋白如凝集素等用于醫(yī)藥行業(yè)(Hink，1991;曹小紅等，2006;Spiros，2008)。

2.4 其他

利用特定昆蟲蛋白的性質，可將昆蟲蛋白基因通過基因工程技術轉入到目標生物中表達使其發(fā)揮作用，如將抗菌肽MB39 基因轉入到蘋果中可得到抗病力增強的轉基因株系 (劉慶忠等，2001)，昆蟲神經毒素與桿狀病毒重組后可改善苜蓿夜蛾的殺蟲效果(Jinn et al.，2006)，在轉入Bt伴孢晶體蛋白基因等毒素基因的同時轉入增效蛋白基因，既可增強轉基因植物的抗蟲能力，又能防止昆蟲對單一有效成分產生抗性 (胡蓉等，2002)。

昆蟲蛋白還可用作化妝品原料如蠶絲素蛋白制成的化妝品，制造高級醫(yī)用材料，如生物膜、生物反應器、人造皮膚、人造血管、免拆除手術逢合線等(楊金蘭和閻杰，2011)。

3 昆蟲蛋白提取工藝

3.1 前處理

昆蟲蛋白提取時需進行前處理獲得下一步蛋白抽提所需基質:鮮蟲或去脂干蟲。方法為(ⅰ)鮮蟲，即將鮮蟲清洗干凈，晾干備用;(ⅱ)去脂干蟲，即挑選新鮮無腐爛的蟲體為原料禁止飼喂24-48 h 自然排空，清洗除雜后在烘箱中50-60℃烘干(潘怡歐，2005;馬林林，2013)，用高速粉碎機粉碎蟲體后進行采用索氏抽提法進行脫脂處理(李帥等，2008)，將蟲粉用濾紙包好后置于索氏提取器的提取筒中，倒入有機溶劑，設定水浴溫度及抽提時間，待濾紙包至恒重即抽提結束，不同昆蟲的最適脫脂溶劑不同，蠶蛹、黃粉蟲、蠅蛆的最適脫脂溶劑分別為正己烷(楊梅琳和成玉粱，2006)、石油醚(王文亮等，2008;竇珍偉，2009)與無水乙醚(胡榮學，2009)、無水乙醚(李帥等，2008)。

昆蟲經不同處理方式處理后蛋白提取效果不同。研究發(fā)現原料經脫脂后蛋白水解率較未脫脂的蛋白水解率提高了27.43%，可能是因內部的蛋白質不再受脂肪的包裹，減少了脂肪對它的束縛因而易被酶解，使蛋白質水解率得以提高。而潘怡歐(2005)的研究發(fā)現以鮮蟲作為提取原料效果明顯優(yōu)于使用去脂干蟲提取昆蟲蛋白質。目前研究多采用去脂干蟲作為蛋白提取基質。

3.2 蛋白提取

蛋白提取主要分為兩大類:發(fā)酵法和抽提法。發(fā)酵法提取蛋白是選用一些合適的菌種對原料進行發(fā)酵培養(yǎng)，然后用水將其洗到中性，干燥(程倩等，2012)。用發(fā)酵法提取昆蟲蛋白的具體菌種選擇及提取工藝條件未見報道。

抽提法是目前提取昆蟲蛋白的主要方法。抽提通常是指采用適當的溶劑和方法，從原料中把有效成份分離出來。依溶劑不同抽提法主要有五種:堿法、鹽法、酶法、有機溶劑法以及Tris-HCl 法，其中，堿法效率高，能耗和成本較低，但蛋白損失較高，且過程中易產生苦味物質，酶法可更多的保留蛋白的營養(yǎng)價值，但成本較高，鹽法介于二者之間，有機溶劑法適用于提取與脂結合較緊密或分子中非極性側鏈較多的蛋白質，但易造成溶劑殘留 (穆利霞等，2014;楊田，2014)，Tris-HCl 法效率較鹽法高，蛋白品質好，但成本較高(仲義等，2009)。

昆蟲蛋白提取的主要影響因素有液固比、提取液pH、離子種類、提取時間、提取液濃度、溫度等。不同昆蟲提取工藝不同，且因褪色、除臭等問題，加上純化過程繁瑣，昆蟲蛋白并沒有進行廣泛的工廠化生產，目前許多學者仍致力于對昆蟲蛋白提取工藝的研究，供試昆蟲主要為蠶蛹、黃粉蟲、蠅蛆等，由于研究者所用的材料和處理方法不同，其結論不盡相同。

3.2.1 蠶蛹蛋白提取工藝

蠶蛹蛋白的提取多采用堿法和酶法。有機溶劑法制備蠶蛹蛋白得率低，不能廣泛應用(陳芳艷等，2003)。邱英華等(2012)采用堿法對蠶蛹蛋白的提取工藝進行研究，得到的最佳工藝條件為:反應溫度70℃，NaOH 濃度2%，液固比(V/m)為6∶1，反應時間6 h，蠶蛹蛋白得率為27.6%。穆利霞等(2014)研究超聲處理對堿法制備蠶蛹蛋白得率的影響發(fā)現，超聲處理可提高堿法制備蠶蛹蛋白得率，優(yōu)化的蠶蛹堿法提取工藝條件為:室溫(16-20℃)，NaOH 濃度0.3%，浸提液固比(V/m)60∶1，超聲功率400 W，超聲時間20 min，蠶蛹蛋白得率為88.14%，高于醇提法的8.47% (陳芳艷等，2003)和普通堿提法的78.69% (孫雁等，2009)。

趙鵬等(2005)采用中性蛋白酶結合動物蛋白酶雙酶水解的方法對蠶蛹蛋白的提取工藝做了探索，確定最佳酶解工藝條件為:反應溫度50℃，pH7.0，動物蛋白加酶量150 U/g (動物蛋白酶酶活/中性蛋白酶比為1∶4)，底物濃度1.0%，水解時間3 h，水解度達27.36%，酶解液為短鏈的活性多肽。李高揚等(2011)以丙酮脫脂后的蠶蛹蛋白為原料，以DPPH 的清除能力作為酶解過程的分析指標，分別用堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶水解脫脂蠶蛹蛋白，結果表明胃蛋白酶水解蠶蛹蛋白效果最好，并對胃蛋白酶水解脫脂蠶蛹蛋白的工藝條件做了正交優(yōu)化，得到最優(yōu)水解條件為:反應溫度50℃，pH1.5，加酶量8000 U/g，底物濃度(質量分數)4%，反應時間6 h，水解度達25%。馬林林(2013)用木瓜蛋白酶、1398 中性蛋白酶和2709堿性蛋白酶對脫脂蠶蛹進行酶法提取工藝研究，發(fā)現1398 中性蛋白酶的水解效果最佳，通過對1398 中性蛋白酶水解脫脂蠶蛹蛋白的各參數進一步研究得出最適參數為:水解溫度50℃，pH7.0，酶用量2%，底物濃度4%，反應時間4 h，水解度達20%。

3.2.2 黃粉蟲幼蟲蛋白提取工藝

仲義等(2009)采用堿法、鹽法、胰蛋白酶法和Tris-HCl 法對黃粉蟲幼蟲蛋白提取方法進行篩選，得出最佳提取方法為胰蛋白酶法，堿法和Tris-HCl 法次之，鹽法效果最差。

盧文靜等(2012)采用胰蛋白酶法對黃粉蟲粉的提取工藝進行研究，得到最佳工藝條件為:溫度 46℃，pH8.5，加酶量 1.8%、液固比(V/m)為10∶1，反應時間4 h，水解度為13.22%。

羅贊(2009)采用了堿法和酶法兩種方法提取黃粉蟲幼蟲蛋白，結果表明，堿法的最佳條件為:反應溫度70℃，堿液濃度1.0% mol/L，液固比(V/m)12∶1，反應時間90 min，黃粉蟲蛋白提取率可達70.11%，純度為91.20%;蛋白酶法提取的最佳工藝為復合蛋白酶和復合風味蛋白酶雙酶共同進行酶法提取:反應溫度55℃，pH6.5，加酶量6%、復合蛋白酶與復合風味蛋白酶加量比1∶3，液固比(V/m)9∶1，反應時間8 h，在該最佳工藝條件下提取黃粉蟲蛋白，提取率可以達64.83%，純度為92.17%。黃雄偉(2010)采用鹽提法研究了黃粉蟲幼蟲蛋白的提取工藝條件，其最佳工藝為:反應溫度70℃，NaCl 濃度0.5%，液固比(V/m)8∶1，反應時間3 h，蛋白質沉淀pH 值4.8，蛋白提取率可達到71.30%，純度為90.20%。

楊田(2014)用Na2HPO4檸檬酸緩沖液作為黃粉蟲幼蟲蛋白的提取液，在工藝條件:反應溫度20℃，pH7.0，液固比(V/m)8∶1，反應時間50 min，得到的蛋白提取率為71.02%，蛋白純度為90.34%。

3.2.3 蠅蛆蛋白提取工藝

李玲玲等(2008)采用多種酶混合酶解脫脂蠅蛆粉得到的最佳工藝條件為:反應溫度45℃，pH7.5，酶量8000 U/g，風味酶∶木瓜酶∶胃蛋白酶∶胰蛋白酶配比為35∶50∶5∶10，反應時間為7 h。鹽析法脫脂蠅蛆干粉的最佳蛋白提取工藝為反應溫度4℃、pH4、硫酸銨濃度70%、反應時間7 h，獲得了較高的提取率(李帥等，2008)。將家蠅幼蟲脫脂干粉和含0.18 mol/L NaCI 的檸檬酸-Na2HPO4緩沖溶液，pH7.0，在4℃溫度下預冷，液固比(V/m)按10∶1，進行充分溶解后取上清液用0.01 mol/L HCI 溶液調節(jié)上清液pH 值至5.8，加入65%硫酸銨進行飽和沉淀可提取家蠅幼蟲清蛋白(艾輝，2008)。

雷土青(2014)采用噴霧干燥法制備蠅蛆蛋白，通過檢測其得率及抗菌活性，優(yōu)化出了在4℃環(huán)境下的最佳提取工藝條件:提取液為PBS 緩沖溶液，液固比(V/m)4∶1，浸提時間為0。陸婕等(2007)以蠅蛆干粉為材料，發(fā)現加熱-層析法較海藻酸吸附法快速簡便，但是得率只有0.26%。黨向利(2008)以家蠅蛹為材料，用酸過夜提取、熱處理、離心、過濾、超濾處理等工藝提取分離，并用噴霧干燥法制備出得率近1.3%的產品，具有較高的抗菌活性，產品主要活性成分分子量小于20 kD，且穩(wěn)定性高，利于保存，是一種可行性較高的方法。

另外，有學者用層析技術分離出具有較高抗菌活性的蛋白/肽和凝集素等物質 (Jin et al.，2005;Hou et al.，2007;Tang et al.，2009)，但是工藝復雜，產品回收率低，不利于規(guī)?；瘧?，且主要用于活性蛋白的鑒定研究。

3.2.4 其他

祝海娟(2013)對大麥蟲的提取工藝進行了研究，結果表明，堿法的最佳工藝條件為:反應溫度60℃，堿液濃度1.0 g/100 mL、液固比(V/m)10∶1，、反應時間2.0 h，蛋白提取率為81.54%，純度為82.13%;鹽法最佳工藝條件:反應溫度50℃，鹽濃度1.0 g/100 mL、液固比(V/m)15∶1，反應時間2.0 h，，蛋白提取率為53.74%，含量為75.01%;通過對5種酶制劑的篩選，確定堿性蛋白酶為最佳酶制劑，其最佳工藝條件:反應溫度50℃，pH12.0，加酶量(E/S)5.0%，液固比(V/m)20∶1，反應時間為2.5 h，蛋白提取率為86.96%，含量為76.22%。

李淑萍等(2009)對鋪道蟻蛋白提取工藝進行研究，確定堿法最佳條件為:反應溫度80℃，堿液濃度1%，液固比(V/m)15∶1，浸提時間60 min;鹽提最佳條件為:反應溫度50℃，鹽液濃度1.5%，液固比 (V/m)15∶1，浸提時間60 min;Tris-HCl 法最佳條件為:反應溫度20℃，pH8.3，液固比(V/m)15∶1，浸提時間90 min;三種方法中堿提蛋白法的蛋白質得率最高，其次為鹽提蛋白法，而Tris-HCl 緩沖液提蛋白法最低。

金會鑫等(2012)對蚱蟬若蟲蛋白提取工藝進行了研究，結果表明，堿法的蛋白質得率最高，其次為鹽法，Tris-HCl 法得率最低;堿提蛋白法的主要工藝條件為:反應溫度60℃，堿液濃度0.5%、液固比(V/m)為5∶1，浸提時間60 min時蛋白質得率有最大值;鹽提蛋白法的主要工藝條件為:反應溫度40℃，鹽濃度1.5%，液固比(V/m)10∶1，浸提時間120 min 時蛋白質得率有最大值;Tris-HCl 提蛋白法的主要工藝條件為:反應溫度20℃，pH8.1，液固比(V/m)10∶1，浸提時間30 min 時蛋白質得率有最大值。

4 問題及對策

目前昆蟲蛋白研究方面存在的主要問題:一是飼養(yǎng)技術還處于初級階段，并未實現自動化，缺乏針對各個昆蟲飼養(yǎng)的系統(tǒng)研究;二是昆蟲蛋白產品的開發(fā)利用僅停留低水平層次，工業(yè)化程度不高;三是昆蟲蛋白市場不成熟，質量標準、企業(yè)標準、衛(wèi)生標準等規(guī)章制度并未制定，沒有監(jiān)管，暫時處于混亂狀態(tài);四是昆蟲蛋白安全性測定，有人食用昆蟲例如蝗蟲有過敏現象，甚至造成休克，危害身體健康。

對策:首先，加大科研投入，各個學科相互交叉，研究資源昆蟲飼養(yǎng)技術的同時開發(fā)自動化養(yǎng)殖技術;其次，加大昆蟲蛋白產品的開發(fā)利用，利用高新技術生產高價值昆蟲蛋白例如昆蟲活性多肽篩選藥物、制備疫苗、食品添加劑;再次，通過權威機構制定相關法律法規(guī)，對昆蟲的生產、加工、銷售進行監(jiān)管，提高昆蟲生產者的準入標準;最后，建立檢測鑒定昆蟲蛋白產品安全性的技術體系。

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