陳思進(jìn) 廖歆 王倚天 楊欣建

椎間盤退變性疾病是骨科常見的疾病之一，也是引起腰痛的主要原因［1］，臨床上約20%的下腰痛由椎間盤退變引起［2］。退變的椎間盤細(xì)胞內(nèi)會發(fā)生一系列有害的生化改變，致使細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)、生物力學(xué)載荷發(fā)生變化，進(jìn)而誘發(fā)疼痛［3］。目前，上述椎間盤細(xì)胞內(nèi)外生化改變的機(jī)制仍不明確，主要有基因遺傳學(xué)說［4］、細(xì)胞因子學(xué)說［5］等。近年來，椎間盤退變性疾病的實(shí)驗(yàn)對象和研究方法的發(fā)展，促進(jìn)了對椎間盤退變性疾病相關(guān)基因的研究，現(xiàn)作如下綜述。

一、椎間盤退變研究的實(shí)驗(yàn)對象

病變椎間盤是大多數(shù)學(xué)者首選的實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本［6］，但由于倫理問題，難以收集對照組的正常椎間盤。胡明等［7］的研究中采用經(jīng)倫理委員會同意的自然流產(chǎn)胎兒的椎間盤作為對照組。Zhao等［8］的研究中選擇有嚴(yán)重臨床表現(xiàn)、MRI證實(shí)為椎間盤退變、Pfirrmann分級為Ⅳ～Ⅴ級、切除術(shù)后HE 染色證實(shí)為退變、排除腫瘤和感染的標(biāo)本納入實(shí)驗(yàn)組，對照組樣本則來自于腰椎爆裂骨折需融合取出椎間盤，既往影像學(xué)未見明顯退變的患者。亦有學(xué)者采用動物模型進(jìn)行研究。然而，自然流產(chǎn)的胎兒缺乏相應(yīng)影像學(xué)分級支持，較難鑒別椎間盤是否已退變；應(yīng)用動物模型雖擺脫了相關(guān)倫理問題，但是否真正能夠反映人椎間盤的情況，仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。目前，多數(shù)學(xué)者采納經(jīng)影像學(xué)證實(shí)并分級的退變椎間盤及爆裂骨折后需融合取出的椎間盤。

二、椎間盤退變的研究方法

蔡利軍等［9］采用免疫組化方法，標(biāo)本冰凍后切片，聚丁二酸丁二醇酯（poly butylene succinate，PBS）沖洗，N，N－二丁基丙烯酰胺（N，N－dibutylacryla－mide，DBA）溶液對目標(biāo)基因下游產(chǎn)物進(jìn)行染色，以顏色深淺為標(biāo)準(zhǔn)，觀察目標(biāo)基因下游產(chǎn)物在實(shí)驗(yàn)組和對照組中的表達(dá)情況。部分學(xué)者應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription－polymerase chain reaction，RT－PCR）法，提取間盤組織RNA，行PCR 擴(kuò)增，后在瓊脂糖凝膠電泳分離，掃描成像，用凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度分析［10］。近年來，DNA 微陣列分析成為多數(shù)學(xué)者熱門的研究方法，將標(biāo)本按類別分類，與基因芯片相結(jié)合，快速檢測標(biāo)本的基因表達(dá)，再與GEO 數(shù)據(jù)中心的數(shù)據(jù)相比較，來顯示過表達(dá)及未表達(dá)的基因，同時(shí)研究表達(dá)的基因蛋白相互之間可能存在的聯(lián)系［11］。Zhang等［12］在DNA 微陣列的基礎(chǔ)上，采取TSP（top－score pair）的方法，通過應(yīng)用計(jì)算公式計(jì)算分?jǐn)?shù)，來研究環(huán)境因素對基因成對表達(dá)的影響，并認(rèn)為分?jǐn)?shù)越高，成對表達(dá)的基因內(nèi)在聯(lián)系越緊密。免疫組化法雖簡便易行，但此法研究目標(biāo)基因較少，無法準(zhǔn)確研究多基因內(nèi)在間的聯(lián)系；DNA 微陣列雖可快速檢測過度表達(dá)基因，但成本過高成為此法不能普及的一個(gè)限制因素。

三、椎間盤退變的相關(guān)基因及可能機(jī)制

椎間盤由髓核、纖維環(huán)和軟骨終板這幾個(gè)重要部分組成。其可能的營養(yǎng)途徑主要有兩種：①軟骨終板下血管袢將絕大部分氧氣及營養(yǎng)物質(zhì)輸送至軟骨終板、椎間盤基質(zhì)，最終到達(dá)內(nèi)部的椎間盤細(xì)胞，此即終板途徑；②少部分營養(yǎng)來源于纖維環(huán)外圍的血管網(wǎng)，向內(nèi)層滲透，傳遞營養(yǎng)，即纖維環(huán)途徑［13，14］。任何一個(gè)環(huán)節(jié)中的相關(guān)基因表達(dá)出現(xiàn)問題都可能導(dǎo)致椎間盤發(fā)生退變。

（一）生長合成相關(guān)基因

椎間盤生長合成相關(guān)基因主要包括LIM 礦化蛋白－1（LIM mineralization protein－1，LMP－1）、Y染色體性別決定結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子9（Sox9）基因、轉(zhuǎn)化生長因子－β（transforming growth factor－β，TGF－β）、類胰島素樣生長因子（insulin－like growth factor，IGF）和骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）的基因。

1．LIM 礦化蛋白－1（LMP－1）基因 LMP－1是一種主要在骨骼中表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)非分泌性骨誘導(dǎo)蛋白，能促進(jìn)成骨細(xì)胞骨鈣素的分泌及骨結(jié)節(jié)的形成，主要在骨的鈣化階段發(fā)揮作用，并在成骨細(xì)胞分化過程中起正調(diào)節(jié)作用［15］。LMP－1通過增加椎間盤細(xì)胞的透明樣基質(zhì)來維持椎間盤軟骨。通過BMP介導(dǎo)LMP－1含量的上調(diào)，能夠提高椎間盤內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白及蛋白多糖的含量，從而減緩椎間盤的退變。同時(shí)，LMP－1能上調(diào)BMP－2和BMP－7的表達(dá)，并增強(qiáng)其協(xié)同成骨作用。

2．Y 染色體性別決定結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子9（Sox9）基因 Sox9是合成Ⅱ型膠原蛋白的重要轉(zhuǎn)錄因子之一，能促使Ⅱ型膠原及軟骨的發(fā)育，而Ⅱ型膠原是椎間盤基質(zhì)內(nèi)保持椎間盤結(jié)構(gòu)、功能的重要物質(zhì)。Sowa等［16］研究發(fā)現(xiàn)，Sox9在椎間盤退變患者內(nèi)的表達(dá)明顯低于對照組，且Ⅱ型膠原蛋白的含量亦低于對照組。

3．轉(zhuǎn)化生長因子－β（TGF－β）基因 TGF－β是一類具有生長潛能的因子，可促進(jìn)椎間盤的蛋白多糖合成以及Ⅱ型膠原的產(chǎn)生，從而穩(wěn)定椎間盤結(jié)構(gòu)。最新研究表明TGF－β超家族能夠雙向調(diào)節(jié)椎間盤，早期促進(jìn)椎間盤的蛋白多糖合成以及Ⅱ型膠原的產(chǎn)生，晚期TGF－β1產(chǎn)生大量Ⅰ型膠原及Ⅲ型膠原，加重椎間盤的纖維化［17］。因此，早期TGF－β為椎間盤修復(fù)性基因，其中TGF－β1的作用最大，晚期則成為椎間盤退變的可能原因之一。

4．類胰島素樣生長因子（IGF）基因 IGF 亦稱為生長激素介質(zhì)，是生長激素產(chǎn)生生理作用過程中必需的一種活性蛋白多肽，包括IGF－1和IGF－2。其中IGF－1在椎間盤的生長中發(fā)揮重要作用。Urano等［18］研究表明，IGF－1的位點(diǎn)突變與脊柱退行性病變相關(guān)。該基因可促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，促進(jìn)軟骨發(fā)育，對軟骨的穩(wěn)定與營養(yǎng)都起著重要作用。

5．骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）基因 BMP 是促使多組織發(fā)生重構(gòu)的超家族生長因子，與椎間盤相關(guān)的有BMP－2、BMP－7等。有研究顯示BMP－2 可正向調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，從而促使椎間盤蛋白多糖及膠原的表達(dá)。BMP－7 可促使椎間盤中的髓核細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，產(chǎn)生Ⅱ型膠原與黏多糖。Wei等［19］研究顯示，在細(xì)胞凋亡的外環(huán)境中上調(diào)BMP－7，可使椎間盤內(nèi)膠原及蛋白多糖含量相對穩(wěn)定。

（二）椎間盤分解代謝相關(guān)基因

椎間盤分解代謝相關(guān)基因主要包括：程序化死亡5（programmed cell death 5，PDCD5）基因、基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）家族、金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP）家族、含血小板結(jié)合蛋白基序（TSP）的解聚蛋白樣金屬蛋白酶（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs，ADAMTS）家族等。

1．程序化死亡5（PDCD5）基因 PDCD5是一個(gè)表達(dá)廣泛的促凋亡分子，能夠促進(jìn)多種細(xì)胞的凋亡。蔡利軍等［9］研究發(fā)現(xiàn)PDCD5在病變組中表達(dá)明顯高于對照組。有研究表明PDCD5明顯上調(diào)能夠?qū)е鹿切躁P(guān)節(jié)炎軟骨的凋亡退變，軟骨基質(zhì)丟失伴隨軟骨下骨增生，參與骨關(guān)節(jié)炎病理過程。與此同時(shí)，PDCD5協(xié)同F(xiàn)AS基因，參與細(xì)胞凋亡，也是導(dǎo)致椎間盤退變的可能機(jī)制之一［20］。

2．基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）家族 MMP超家族有多種亞型，其中最重要的為1～3亞型，主要作用為降解間盤內(nèi)的Ⅱ型膠原蛋白和蛋白多糖。而膠原的喪失是導(dǎo)致椎間盤退變的直接原因之一。MMP1 基因能夠影響SNP 位點(diǎn)第1607鳥苷酸的序列，繼而改變啟動子活性，影響轉(zhuǎn)錄水平。與此同時(shí)，MMP1亦能降解蛋白黏多糖，使得椎間盤穩(wěn)定性下降，引發(fā)退變。

3．金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）家族 TIMP 家族有3種亞型，其中椎間盤中可見前2種亞型表達(dá)。TIMP可與MMP等比結(jié)合形成非共價(jià)鍵，進(jìn)而抑制MMP對細(xì)胞外基質(zhì)的降解作用。肖斌等［21］研究發(fā)現(xiàn)，攜帶TIMP 等位基因TT 類型的人群患腰椎間盤退變的概率明顯升高，TIMP－1的基因多態(tài)性與腰椎間盤退變發(fā)生明顯相關(guān)。

4．含血小板結(jié)合蛋白基序（TSP）的解聚蛋白樣金屬蛋白酶（ADAMTS）家族 ADAMTS家族是一類具有降解蛋白多糖能力的超家族蛋白酶，在正常組織中含量較少，主要參與機(jī)體的發(fā)育、老化、炎癥等，其中ADAMTS－4、ADAMTS－5在椎間盤退變中起到重要的作用。ADAMTS－4可直接作用于親水性氨基葡萄糖聚糖蛋白多糖，使其降解，而親水性氨基葡萄糖聚糖蛋白多糖的降解被認(rèn)為是椎間盤早期退變的標(biāo)志。ADAMTS－5 功能與作用機(jī)制類似于ADAMTS－4，但與其他亞型不同的是具有C 段的凝血酶敏感蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)，這一特殊結(jié)構(gòu)能夠使其定位于某些特殊組織的特定位置。

（三）骨質(zhì)疏松相關(guān)基因

骨質(zhì)疏松相關(guān)基因的代表為維生素D 受體（vitamin D receptor，VDR）基因。維生素D 是一種類固醇激素，與骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎等疾病的發(fā)生有著千絲萬縷的聯(lián)系。VDR有4個(gè)基因的位點(diǎn)，其多態(tài)性的基因位點(diǎn)分別對應(yīng)限制性內(nèi)切酶BsmⅠ、ApaⅠ、TaqⅠ、FokⅠ的酶切位點(diǎn)［22］。Videman等［23］發(fā)現(xiàn)，在椎間盤組織中，后兩個(gè)酶切位點(diǎn)（即FokⅠ、TaqⅠ）等維生素D 受體基因的表達(dá)與椎間盤退變相關(guān)，體現(xiàn)為椎間盤在磁共振T2加權(quán)像成低信號。

（四）結(jié)構(gòu)相關(guān)基因

1．膠原基因 椎間盤纖維環(huán)膠原蛋白能夠維持椎間盤的穩(wěn)定性及韌性，膠原原因（collagen gene）主要包括Ⅰ型膠原（COL1A1）基 因、Ⅱ型膠原（COL2）基因、Ⅸ型膠原（COL9A1、COL9A2、COL9A3）基因以及Ⅺ型膠原（COL11A1、COL11A2）基因。

（1）Ⅰ型膠原（COL1A1）基因 Ⅰ型膠原廣泛存在于椎間盤纖維環(huán)組織，在退變的髓核中也可發(fā)現(xiàn)。Kellgren－Lawrence評分法顯示COL1A1基因TT 表型者椎間盤退變的發(fā)病率最高，屬高?；颉?/p>

（2）Ⅱ型膠原（COL2）基因 Ⅱ型膠原占椎間盤軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的近一半含量，是椎間盤穩(wěn)定的關(guān)鍵性膠原，其含量的減少直接導(dǎo)致Ⅰ、Ⅱ型膠原比例的失調(diào)，造成椎間盤穩(wěn)定性下降。

（3）Ⅸ型膠原（COL9A1、COL9A2、COL9A3）基因 三者共同編碼Ⅸ型膠原，參與纖維環(huán)間膠原的橋接。其中COL9A2在椎間盤退變中起著重要的角色。Trp2等位基因（色氨酸的密碼子）取代COL9A2基因上編碼精氨酸的密碼子后，Ⅸ型膠原蛋白的多肽鏈的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，其相應(yīng)的連接作用下降，導(dǎo)致椎間盤的承重及彈性下降，從而引發(fā)椎間盤退變。

（4）Ⅺ膠原基因（COL11A1、COL11A2） Ⅺ膠原含量較少，部分存在于髓核與纖維環(huán)中，且隨著年齡的增加含量遞減。Ⅺ膠原基因發(fā)生異常會增加椎間盤膨出的危險(xiǎn)度［24］。

2．聚集蛋白多糖 聚集蛋白多糖（aggrecan，AGC）廣泛存在于椎間盤基質(zhì)中，對間盤結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性有著重要作用［25］。有研究顯示AGC 基因存在可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)片段的多態(tài)性，其多態(tài)性與椎間盤退變的嚴(yán)重程度以及多節(jié)段椎問盤退變相關(guān)［26］。

（五）炎癥因子類基因

在椎間盤退變的過程中，始終存在著慢性炎癥，各種炎癥因子中以白細(xì)胞介素－1β（interleukin－1β，IL－1β）及腫瘤壞死因子－α（tumor necrosis factor－alpha，TNF－α）最為熱門。胡寶山等［27］研究顯示IL－1β可上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生，從而降解蛋白多糖，同時(shí)IL－1β可直接降低人體痛閾，繼而產(chǎn)生癥狀。TNF－α主要由單核－巨噬細(xì)胞分泌，其主要作用為抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞溶解。在退變的椎間盤中，TNF－α可促使炎癥細(xì)胞釋放溶解酶，產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，同時(shí)促使成纖維細(xì)胞增殖，形成瘢痕。

四、存在的問題

椎間盤退變性疾病基因方面研究已成為近年來的研究熱點(diǎn)，國內(nèi)外對椎間盤退變性疾病的易感因素、可能機(jī)制、有效的早期生物學(xué)預(yù)防或治療方面作了多方面的研究，有一部分研究也通過轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)應(yīng)用于臨床。然而仍有許多問題有待解決，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。

（一）椎間盤退變機(jī)制尚未明確

雖然國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)在椎間盤方面作了許多研究，但仍沒有一個(gè)達(dá)成共識的椎間盤退變機(jī)制。對椎間盤退變機(jī)制的探索始終是一個(gè)復(fù)雜而艱辛的過程，對其形成、營養(yǎng)、代謝的相關(guān)基因、細(xì)胞因子、環(huán)境都只有一個(gè)粗略的研究。各基因間的相互聯(lián)系，椎間盤內(nèi)滲透壓環(huán)境的改變對細(xì)胞、結(jié)構(gòu)有無影響以及各蛋白之間相互作用的途徑都是未來研究的熱點(diǎn)［3，28］。

（二）正常椎間盤標(biāo)本無法有效獲取

因倫理問題，正常的椎間盤標(biāo)本往往無法有效獲取。因此，正常對照組的缺乏對實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性、有效性提出了挑戰(zhàn)。代替對照組標(biāo)本的多為爆裂骨折后患者術(shù)前影像學(xué)椎間盤信號未改變的椎間盤，然而急性應(yīng)激狀態(tài)，這些“正常”椎間盤的環(huán)境、蛋白、細(xì)胞炎癥因子并不能確認(rèn)是否發(fā)生了亞急性的改變或是否與正常椎間盤相類似。且良好的動物模型始終未能很好的建立，動物模型的椎間盤與正常人類椎間盤有著不小的差異，不具備很好的代表性。因此，良好的對照標(biāo)本、適宜的模型都是未來值得深思和探索的方向。

（三）基因等生物治療轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)方面的困難

對于椎間盤退變性疾病的基因?qū)W治療也是近年來的熱點(diǎn)課題。基因治療是通過將靶向基因通過直接注入或間接分離培養(yǎng)修飾后重新植入靶向器官來達(dá)到預(yù)防、治療相關(guān)疾病。利用基因治療方法，有利于早期從源頭預(yù)防及控制疾病的發(fā)生，避免了嚴(yán)重的后果及并發(fā)癥。目前有研究顯示LMP－1基因重組蛋白在體內(nèi)無明顯活性，在應(yīng)用LMP－1基因治療時(shí)，需向靶細(xì)胞轉(zhuǎn)染LMP－1 基因，從而刺激活性蛋白［29］。但基因治療目前只屬于理論及實(shí)驗(yàn)階段，并未大規(guī)模臨床應(yīng)用，對于基因生物治療其療效如何，如何利用病毒載體攜帶目的基因，如何進(jìn)行靶基因的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后如何判斷是否產(chǎn)生具有活性蛋白，及是否會因基因改變而導(dǎo)致其他意想不到的并發(fā)癥，這些都是目前基因在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)方面面臨的挑戰(zhàn)，也是今后發(fā)展的領(lǐng)域。

總之，目前椎間盤退變的基因?qū)W研究尚處在一個(gè)起始階段，基因與環(huán)境共同影響著椎間盤的退變，如何探索好、利用好基因這一利器，更好的做到個(gè)體化治療，仍是任重而道遠(yuǎn)。

［1］Hegewald AA，Ringe J，Sittinger M，et al．Regenerative treatment strategies in spinal surgery［J］．Front Biosci，2008，13：1507－1525．

［2］Dagenais S，Caro J，Haldeman S．A systematic review of low back pain cost of illness studies in the United States and internationaly［J］．Spine J，2008，8（1）：8－20．

［3］Lapointe JM，Summers BA．Intervertebral disk disease with spinal cord penetration in a Yucatan pig［J］．Vet Pathol，2012，49（6）：1054－1056．

［4］白躍宏，俞紅．腰椎間盤退變分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展與轉(zhuǎn)換醫(yī)學(xué)應(yīng)用［J］．轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志，2012，1（2）：104－110．

［5］李高峰，張紹昆，付長峰，等．細(xì)胞因子及基因治療椎間盤退行性變的研究動態(tài)［J］．中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13（2）：359－362．

［6］劉進(jìn)．RNA 干擾技術(shù)及其在椎間盤退變研究中的應(yīng)用［J］．四川醫(yī)學(xué)，2009，30（9）：1477－1479．

［7］胡明，馬遠(yuǎn)征，李大偉，等．上皮膜蛋白－1在人椎間盤髓核細(xì)胞中的表達(dá)［J］．實(shí)用骨科雜志，2012，18（3）：227－230．

［8］Zhao B，Yu Q，Li H，et al．Characterization of microRNA expression profiles in patients with intervertebral disc degeneration［J］．Int J Mol Med，2014，33（1）：43－50．

［9］蔡利軍，吳軍，師志云，等．PDCD5在退變椎間盤組織中的表達(dá)及臨床意義［J］．寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2012，34（5）：398－400．

［10］Bertram H，Nerlich A，Omlor G，et al．Expression of TRAIL and the death receptors DR4 and DR5 correlates with progression of degeneration in human intervertebral disks［J］．Mod Pathol，2009，22（7）：895－905．

［11］Chen K，Wu D，Zhu X，et al．Gene expression profile analysis of human intervertebral disc degeneration［J］．Genet Mol Biol，2013，36（3）：448－454．

［12］Zhang W，Li X，Shang X，et al．Gene expression analysis in response to osmotic stimuli in the interver－tebral disc with DNA microarray［J］．Eur J Med Res，2013，18：62．

［13］Grunhagen T，Shirazi－Adl A，F(xiàn)airbank JC，et al．Intervertebral disk nutrition：a review of factors influencing concentrations of nutrients and metabolites［J］．Orthop Clin North Am，2011，42（4）：465－477．

［14］Urban JP，Smith S，F(xiàn)airbank JC．Nutrition of the intervertebral disc［J］．Spine（Phila Pa 1976），2004，29（23）：2700－2709．

［15］張寧，陳維善．LMP－1基因與椎間盤退變［J］．國際骨科學(xué)雜志，2008，29（4）：270－271．

［16］Sowa G，VadalàG，Studer R，et al．Characterization of intervertebral disc aging：longitudinal analysis of a rabbit model by magnetic resonance imaging，histology，and gene expression［J］．Spine（Phila Pa 1976），2008，33（17）：1821－1828．

［17］Singh K，Masuda K，Thonar EJ，et al．Age－related changes in the extracellular matrix of nucleus pulposus and anulus fibrosus of human intervertebral disc［J］．Spine（Phila Pa 1976），2009，34（1）：10－16．

［18］Urano T，Narusawa K，Shiraki M，et al．Association of a single nucleotide polymorphism in the insulin－like growth factor－1 receptor gene with spinal disc degeneration in postmenopausal Japanese women［J］．Spine（Phila Pa 1976），2008，33（11）：1256－1261．

［19］Wei A，Brisby H，Chung SA，et al．Bone morphogenetic protein－7 protects human intervertebral disc cellsinvitrofrom apoptosis［J］．Spine J，2008，8（3）：466－474．

［20］Cheng AX，Lou SQ，Zhou HW，et al．Expression of PDCD5，a novel apoptosis related protein，in human osteoarthritic cartilage［J］．Acta Pharmacol Sin，2004，25（5）：685－690．

［21］肖斌，田偉，趙丹慧，等．TIMP－1 666C＞T 單核苷酸多態(tài)性與腰椎間盤退變相關(guān)性分析［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志，2010，90（41）：2939－2942．

［22］Uitterlinden AG，F(xiàn)angY，Van Meurs JB，et al．Genetics and biology of vitamin D receptor polymorphisms［J］．Gene，2004，338（2）：143－156．

［23］Videman T，Battié MC，Ripatti S，et al．Determinants of the progression in lumbar degeneration：a 5－year follow－up study of adult male monozygotic twins［J］．Spine（Phila Pa 1976），2006，31（6）：671－678．

［24］Solovieva S，Lohiniva J，Leino Arjas P，et al．Intervertebral disc degeneration in relation to the COL9A3 and the IL－1βgene polymorphisms［J］．Eur Spine J，2006，15（5）：613－619．

［25］Roughley PJ，Alini M，Antoniou J．The role of proteoglycans in aging，degeneration and repair of the intervertebral disc［J］．Biochem Soc Trans，2002，30（6）：869－874．

［26］Cong L，Pang H，Xuan D，et al．Association between the expression of aggrecan and the distribution of aggrecan gene variable number of tandem repeats with symptomatic lumbar disc herniation in Chinese Han of Northern China［J］．Spine（Phila Pa 1976），2010，35（14）：1371－1376．

［27］胡寶山，芮鋼，楊茂偉，等．白細(xì)胞介素－1β對椎間盤蛋白多糖代謝的影響［J］．臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，7（1）：31－32．

［28］Hristova GI，Jarzem P，Ouellet JA，et al．Calcification in human intervertebral disc degeneration and scoliosis［J］．J Orthop Res，2011，29（12）：1888－1895．

［29］Boden SD．Biology of lumbar spine fusion and use of bone graft substitutes：present，future，and next generation［J］．Tissue Eng，2000，6（4）：383－399．