張晴 杜守穎 陸洋 白潔 李鵬躍 滕會會 杜秋

不同血塞通膠囊的人參皂及三七皂苷溶出度對比研究

張晴 杜守穎 陸洋 白潔 李鵬躍 滕會會 杜秋

目的 建立測定血塞通膠囊中人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd及三七皂苷R1溶出度的檢測方法,并比較3種不同血塞通膠囊溶出度情況,為劑型改進(jìn)提供依據(jù)。方法 采用HPLC法檢測5種皂苷的體外溶出度,計算并繪制累積溶出曲線,通過相似因子(f2)分別比較不同血塞通膠囊間5種皂苷溶出度的差異及每種膠囊中各皂苷間的溶出度差異,并采用質(zhì)量權(quán)重系數(shù)法將血塞通膠囊中三七總皂苷組分的溶出曲線進(jìn)行整合。結(jié)果 維和硬膠囊和絡(luò)泰軟膠囊中5種皂苷在30分鐘內(nèi)累積溶出率均達(dá)到60%以上,12小時內(nèi)均達(dá)到85%以上,而理洫王軟膠囊各成分成分30分鐘累積溶出率僅為3%,12小時內(nèi)達(dá)到40%,3種血塞通膠囊間溶出曲線f2均小于50,各膠囊中5種皂苷間f2均大于50。3種血塞通膠囊的溶出過程存在顯著性差異,以油相為內(nèi)容物基質(zhì)的理洫王軟膠囊相對于維和硬膠囊及絡(luò)泰軟膠囊顯示出緩釋作用,5種皂苷間溶出行為無顯著性差異,呈現(xiàn)出同步性,與整合結(jié)果趨勢相同。結(jié)論 膠囊殼及內(nèi)容物基質(zhì)的不同對膠囊的溶出過程存在一定的影響,油相基質(zhì)具有緩釋作用,血塞通膠囊中5種皂苷的溶出具有同步性。

血塞通膠囊; 緩釋; 多成分; 質(zhì)量權(quán)重系數(shù)法

血塞通膠囊是以三七總皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)為有效成分的中成藥制劑,用于腦路瘀阻、中風(fēng)偏癱、胸痹心痛等。三七總皂苷可抑制心肌細(xì)胞凋零[1],保護神經(jīng)細(xì)胞缺血損傷[2],促進(jìn)缺血再灌注后血管新生[3],提高免疫力[4]等。藥物的劑型不同會直接影響有效成分溶出、吸收及臨床療效。本實驗通過比較3種不同血塞通膠囊的溶出曲線,分析了血塞通膠囊劑型因素(膠囊殼、內(nèi)容物基質(zhì))對藥物溶出情況的影響,為工藝改進(jìn)、指導(dǎo)臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

血塞通膠囊(維和,云南維和藥業(yè)股份有限公司,批號120917);血塞通軟膠囊(理洫王,昆明圣火藥業(yè),批號20121017);血塞通軟膠囊(絡(luò)泰,昆明制藥集團股份有限公司,批號131009-10);三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號分別為110745-200617、110703-201128、110754-201123、110704-201223、111818-201001);乙腈(色譜純,美國Fisher公司),甲醇(分析純,北京化工廠,批號20110114),水為娃哈哈純凈水。

1.2 儀器

Agilent1260高效液相色譜儀;RCZ-8M溶出試驗儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司);KQ 5200 DA型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);賽多利斯BSA 224S型電子分析天平(北京賽多利斯公司)。

1.3 色譜條件

色譜柱:Agilent Extend-C18色譜柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),WATCH預(yù)柱(柱芯型號WATCH Y164);流動相乙腈(A)-水(B),梯度洗脫,0～25分鐘,19%A;25～50分鐘,19～45%A;50～55分鐘,45～55%A;55～65分鐘,55～60%A。柱溫30℃;檢測波長203 nm;流速1.5 mL/min。對照品溶液及溶出供試品溶液的色譜圖見圖1。

1.4 對照品溶液的制備

取對照品三七皂苷 R14 mg、人參皂苷 Rg122 mg、人參皂苷Re 3 mg、人參皂苷Rb117 mg、人參皂苷Rd 6 mg,精密稱定,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,即得。

1.5 供試品溶液的制備

取血塞通膠囊1粒,采用溶出度測定法小杯法(《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄XC溶出度測定第三法)裝置,以200 mL水為溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出實驗,溫度37℃,轉(zhuǎn)速為50 rmp。每個時間點取樣1 mL,補液1 mL。取樣時間為2、5、10、15、30、60、90分鐘、2、4、6、12小時。精密移取溶出液和甲醇各0.5 mL,混勻,即為供試液,測定各成分含量。

1.6 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品儲備液,依次稀釋得到6個不同濃度的對照品溶液,按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo)(Y),濃度為橫坐標(biāo)(X),進(jìn)行線性回歸,三七皂苷R1回歸方程為Y=4.435X-9.652,r=0.9999;人參皂苷Rg1回歸方程為Y=4.597X+32.934,r=0.9999;人參皂苷Re回歸方程為Y=5.511X-17.918,r=0.9999;人參皂苷Rb1回歸方程為Y=4.531X+12.221,r=0.9999;人參皂苷 Rd回歸方程為 Y=5.429X+8.167, r=0.9999。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷 Rb1、人參皂苷 Rd分別在22.28～544.00μg/mL、73.06～1783.60μg/mL、32.33～789.43μg/mL、51.38～1254.40μg/mL、15.62～381.38μg/mL與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度實驗:取“1.5”項下溶出度供試品溶液(60分鐘溶出液),重復(fù)進(jìn)樣檢測6次,結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd及三七皂苷R1的6次進(jìn)樣峰面積積分值RSD分別為0.96%、2.01%、0.72%、0.60%和1.53%,表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性實驗:取“1.5”項下溶出度供試品溶液(60分鐘溶出液)于0、2、4、8、12、24小時進(jìn)行測定,計算各成分在各時間點峰面積RSD值。結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd及三七皂苷R1這5種皂苷峰面積RSD均低于3.0%,表明樣品溶液24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性實驗:按“1.5”項下溶出度供試品溶液(60分鐘溶出液)制備方法及樣品處理方法重復(fù)制備6份樣品,檢測并計算各成分峰面積RSD值。結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd及三七皂苷R1這5種皂苷峰面積RSD均低于3.0%,表明該方法的重復(fù)性良好。

1.7 3種血塞通膠囊溶出曲線相似因子擬合

1.8 采用質(zhì)量權(quán)重系數(shù)法整合血塞通膠囊中5種皂苷的溶出曲線

通過質(zhì)量權(quán)重系數(shù)法分別將血塞通膠囊中PNS組分的溶出曲線進(jìn)行整合,可以將多組分制劑的溶出過程簡化為一個整體行為[5]。以組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為整體單位計算各成分質(zhì)量權(quán)重系數(shù),根據(jù)權(quán)重系數(shù)公式:

φR1=(933.13/4737.72)×100%=19.70%;

φRg1=(801.01/4737.72)×100%=16.91%;

φRe=(947.14/4737.72)×100%=19.99%;

φRb1=(1109.29/4737.72)×100%=23.41%;

φRd=(947.15/4737.72)×100%=19.99%

羅恬被帶到了護城河邊，一輛汽車被吊車從河里拖了出來，四個門都被鐵鏈鎖住了。羅恬遠(yuǎn)遠(yuǎn)就看見了那是趙炎的車子，可是直到警察推著她去認(rèn)尸，她才膽怯地走上前。趙炎半仰在座位上，全身都已經(jīng)腐爛了。

進(jìn)一步整合血塞通膠囊溶出曲線。

2 結(jié)果

2.1 溶出實驗結(jié)果

取3種血塞通膠囊的溶出度供試品溶液,分別按照“1.2.1”項下色譜條件進(jìn)行檢測,計算5種皂苷在各時間點的累積溶出率,繪制溶出曲線,結(jié)果見圖2。

2.2 3種血塞通膠囊溶出曲線相似因子擬合結(jié)果

采用相似因子(f2)法比較三七皂苷R1及人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd在3種血塞通膠囊間溶出的差異,并分別比較每種膠囊中5種皂苷之間的溶出差異,分析結(jié)果見表1～4。對于5種皂苷的溶出,維和硬膠囊與絡(luò)泰軟膠囊f2均在40～45,理洫王軟膠囊與其他2種膠囊f2均小于20。各血塞通膠囊中5種皂苷間的f2均大于50,因此可以判斷3種血塞通膠囊的溶出行為存在顯著性差異。而各血塞通膠囊中5種皂苷之間溶出過程呈現(xiàn)同步性,無顯著性差異。

2.3 采用質(zhì)量權(quán)重系數(shù)法整合血塞通膠囊中5種皂苷的溶出曲線結(jié)果

進(jìn)一步整合血塞通膠囊溶出曲線,結(jié)果見圖3,維和硬膠囊及絡(luò)泰軟膠囊中PNS組分在60分鐘內(nèi)累計溶出率達(dá)到60%,12小時內(nèi)達(dá)到90%。理洫王軟膠囊中PNS組分在60分鐘內(nèi)累計溶出率僅為13%,12小時內(nèi)達(dá)到45%。

3 結(jié)論與討論

從圖2溶出曲線可知,維和硬膠囊和絡(luò)泰軟膠囊中5種皂苷在30分鐘內(nèi)累積溶出率均達(dá)到60%以上,12小時內(nèi)均達(dá)到85%以上,而理洫王軟膠囊各成分30分鐘累積溶出率僅為3%,12小時內(nèi)達(dá)到40%。擬合結(jié)果顯示3種血塞通膠囊的溶出曲線f2均小于50,可知三者的溶出過程存在顯著性差異,理洫王軟膠囊存在緩釋現(xiàn)象。各膠囊中5種皂苷成分間f2均大于50,5種皂苷的溶出行為無顯著性差異,呈現(xiàn)出同步性。

采用質(zhì)量權(quán)重系數(shù)法,分別對不同血塞通膠囊中PNS組分釋藥系統(tǒng)的溶出曲線進(jìn)行整合,結(jié)果同樣表明理洫王軟膠囊具有緩釋作用。此方法便于評價復(fù)雜的中藥組分的整體溶出行為,充分體現(xiàn)中藥整體觀的理念,為中藥多組分制劑的溶出評價提供新的思路。

3種膠囊溶出過程的差異,可能跟膠囊殼和膠囊內(nèi)容物的不同有關(guān)。經(jīng)觀察硬膠囊在水中2～3分鐘即崩解,三七總皂苷在水中迅速溶出。軟膠囊在7～8分鐘開始崩解,故前30分鐘軟、硬膠囊的累積溶出率差異較大。絡(luò)泰軟膠囊內(nèi)容物基質(zhì)為PEG,具有良好的水溶性,膠囊崩解后5種皂苷能夠在介質(zhì)中充分溶解,其崩解后溶出曲線和維和硬膠囊相似。理洫王軟膠囊因其油性基質(zhì)的存在,內(nèi)容物漂浮于水面,三七總皂苷從中緩慢釋放,故溶出緩慢,溶出曲線較平緩。可見由于選用的劑型、輔料及生產(chǎn)工藝等的不同,可能導(dǎo)致血塞通有效成分體外溶出過程存在較大差異。5種皂苷成分的溶出過程無顯著性差異,從表2～4中可以看出,人參皂苷Rb1與Rd、Rg1與Re間溶出行為更接近,推測是由于其結(jié)構(gòu)相似,前兩者屬于人參二醇型皂苷,后者屬于人參三醇型皂苷。

三七總皂苷口服給藥后吸收不完全,生物利用度較低[6],一天需服用多次,因此有必要設(shè)計一種三七總皂苷的緩釋制劑以提高生物利用度及患者順應(yīng)性。馮亮等[7]通過制備三七總皂苷的骨架型凝膠緩釋片后顯著改善制劑的生物利用度。馮亮等[8]發(fā)現(xiàn)三七總皂苷緩釋片與普通片相比,在Beagle犬體內(nèi)的達(dá)峰時間延長,峰濃度降低,平均滯留時間延長。本研究結(jié)果可知,理洫王軟膠囊以油相為內(nèi)容物基質(zhì)同樣可以起到緩釋的作用,這會進(jìn)一步影響藥物體內(nèi)吸收,提高藥物在胃腸道的滯留時間,改善藥物的生物利用度從而影響療效,值得進(jìn)一步深入研究,為藥物劑型改進(jìn)及指導(dǎo)臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。

[1] 華新宇,王曉蘭,康美清,等.三七總皂苷對慢性心力衰竭患者心功能及血漿細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的影響[J].中國中醫(yī)急癥, 2014,23(12):2368-2370.

[2] 蔣會慧,王園園,胡東華,等.三七總皂苷對大鼠大腦缺血再灌注VEGF表達(dá)的影響[J].長江大學(xué)學(xué)報(自科版),2015,12 (12):1-5.

[3] 劉英吉.三七總皂苷對缺血損傷神經(jīng)細(xì)胞的保護作用研究[D].長春:吉林大學(xué),2013.

[4] 彭芝萍.三七總皂苷緩釋片制備工藝及體內(nèi)外釋藥研究[D].武漢:湖北中醫(yī)藥大學(xué),2012.

[5] 商宇.三七總皂苷調(diào)節(jié)小鼠上呼吸道菌群及局部免疫的實驗研究[D].昆明:云南中醫(yī)學(xué)院,2012.

[6] 郁丹紅,賈曉斌.基于生物藥劑學(xué)性質(zhì)的中藥組分相似性分析方法的建立[J].中國中藥雜志,2013,38(12):1847-1850.

[7] 馮亮,蔣學(xué)華.三七總皂苷在大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)研究[J].華西藥學(xué)雜志,2010,25(1):46-49.

[8] 馮亮,蔣學(xué)華,王凌.三七總皂苷緩釋片的釋放性能及體內(nèi)外相關(guān)性研究[J].中國藥業(yè),2009,18(21):18-20.

Comparison of dissolution of ginsenoside and notoginsenoside form different Xuesaitong capsules

ZHANGQing,DU Shou-ying,LU Yang,et al.School of Chinese Medicin,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China.

DU Shou-Ying,E-mail:dushouying@263.net;Lu Yang,E-mail:Landocean28@ 163.com

Objective To establish the methods for determining the dissolution of ginsenoside Rg1,Re,Rb1,Rd and notoginsenoside R1in Xuesaitong capsuls,and study the dissolution condition of the three capsules,which can provide a basis for the improvement of dosage form.Methods HPLC and UV were used to detect the in vitro dissolution in the three capsules,respectively,cumulative dissolution curves were drawn and similar factors of the curves were compared.Furthermore,the multicomponernt drug release curves were integrated by using Weight coeffieientmethod.Results The dissolution of the fivesaponins in Weihe hard capsule and Luotai soft capsule were all over 60%within 30 minutes,and over 85%within 12 hours.While the dissolution of the five saponins in Lixuwang soft capsule in were all over 3%within 30 minutes,and over40%within 12 hours.The similarity factor(f2)values of the dissolution of different capsules were all less than 50 and that of the five saponinswere allmore than 50.The dissolution of different Xuesaitong capsules has significant differences.The Lixuwang soft capsule which had oily contents showed sustained release effect compared with the other two capsules.Conclusion Different shells and contents have a certain influence on the dissolution of Xuesaitong capsules.The oily contents shows sustained release effect.The five saponins could release from the capsule synchronously.

Xuesaitong capsule; Sustained-release; Multi-component; Quality weight coefficientmethod

R286

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2015.11.022

2015-06-16)

(本文編輯:蒲曉田)

國家科技重大專項(2014ZX09301306-009);北京市科技新星計劃(xx2015A048)

100102 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院[張晴(碩士研究生)、杜守穎、陸洋、白潔、李鵬躍、滕會會(碩士研究生)、杜秋(碩士研究生)]

張晴(1991-),女,2013級在讀碩士研究生。研究方向:中藥新劑型與新技術(shù)研究。E-mail: zhangqing811@163.com

杜守穎(1960-),博士,教授,博士生導(dǎo)師。研究方向:中藥新劑型與制劑關(guān)鍵技術(shù)研究。E-mail: dushouying@263.net;陸洋(1981-),博士,副教授,碩士生導(dǎo)師。研究方向:中藥新劑型與制劑關(guān)鍵技術(shù)研究。E-mail:landocean28@163.com。杜守穎與陸洋并列為本文通訊作者