黃 山，胡聯(lián)章，楊先才，戈清強，陳雪峰，李玉霞

(1．四川省石棉縣畜牧局，四川石棉625400 2．四川省石棉縣科技局，四川石棉625400)

微生物的污染是影響豬肉品質的重要因素之一，肉及肉制品被微生物污染后細菌、細菌毒素常常引起人們食物中毒［1］。菌落總數(shù)是用來判定食品被細菌污染的程度及衛(wèi)生質量的每克(或毫升)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)，可反映食品是否符合衛(wèi)生要求，菌落總數(shù)的多少在一定程度上反映著食品衛(wèi)生質量的優(yōu)劣。菌落總數(shù)越高，代表食品中細菌數(shù)量越多，食品腐敗變質的速度就越快。通過檢測菌落總數(shù)，可以了解屠宰生豬胴體被污染的程度(即肉品的清潔衛(wèi)生狀態(tài))?；诖?，筆者通過對石棉縣畜禽定點屠宰場宰殺的生豬胴體進行菌落總數(shù)檢測，以了解石棉縣畜禽定點屠宰場的衛(wèi)生質量狀況，從而為改善石棉縣生豬屠宰加工的衛(wèi)生管理和提高產(chǎn)品品質提供可借鑒的科學依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗材料

1．1．1 無菌生理鹽水。在石棉縣畜牧局實驗室內按照以下步驟配制無菌生理鹽水:稱取8．5 g NaCl溶于1 000 ml蒸餾水中，于 121 ℃下高壓滅菌 15 min［2］。

1．1．2 樣品。2014年3月、5月和7月，分3次從石棉縣畜禽定點屠宰場隨機采集屠宰生豬胴體表面擦拭樣品共計60份(每頭豬采集1份樣品)。每次采樣20份，其中胴體經(jīng)過清潔流水漂洗后的樣品4份。

1．1．3 培養(yǎng)基。平板計數(shù)瓊脂(plate count agar，PCA)，購自杭州微生物試劑有限公司。

1．1．4 儀器。超凈工作臺、高壓滅菌器、無菌棉簽、便攜式采樣箱、滅菌采樣瓶、滅菌試管、恒溫水浴鍋(46±1℃)、電熱恒溫培養(yǎng)箱(36±1℃)、電子天平(感量0．1 g)、微生物顯微鏡、可調節(jié)移液器(配槍頭)、振蕩器、無菌錐形瓶(500 ml)、滅菌培養(yǎng)皿(直徑 90 mm)、燒杯、量筒(10、50和 500 ml)、試管及試管架等。以上儀器設備均由石棉縣畜牧局實驗室提供。

1．2 試驗方法

1．2．1 采樣。用胴體體表棉拭采樣法［3］，即用滅菌棉簽蘸少量滅菌生理鹽水略濕潤后，在胴體表面約5 cm2的范圍內橫豎往返各擦拭5次，并隨之轉動棉簽，然后立即剪斷并投入盛有50 ml滅菌生理鹽水的滅菌采樣瓶中，充分搖勻，后作為樣品原液。另選胴體，如此重復60次，完成60份采樣。

1．2．2 菌落總數(shù)檢測。依照 GB 4789．2 －2010［2］標準進行菌落總數(shù)檢測。

1．2．2．1 不同稀釋度樣品勻液的制備。用量筒量取25 ml樣品原液，置于盛有225 ml生理鹽水的無菌錐形瓶，充分搖勻，制成1∶10的樣品勻液。用可調節(jié)移液器吸取1∶10的樣品勻液1 ml，沿管壁緩緩注入盛有9 ml生理鹽水的無菌試管中，充分搖勻，制成1∶100的樣品勻液。用可調節(jié)移液器吸取1∶100的樣品勻液1 ml，沿管壁緩緩注入盛有9 ml生理鹽水的無菌試管中，充分搖勻，制成1∶1 000的樣品勻液。

1．2．2．2 接種。選擇1∶100 和1∶1 000 稀釋度，每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1 ml。同時，分別吸取1 ml生理鹽水加入2個平皿作為空白對照(CK)。

及時將20 ml冷卻至46℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(PCA)傾注平皿，并且小心轉動平皿使其混合均勻。

1．2．2．3 培養(yǎng)。待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，置于(36±1)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(48±2)h。

1．2．2．4 計數(shù)。菌落計數(shù)以菌落形成單位(Colony-forming units，CFU)表示。選取菌落數(shù)在30～300 CFU、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。每個稀釋度的菌落數(shù)采用2個平板的平均值。出抗寒家系。由于家系內不同的單株間亦存在顯著差異，僅進行家系篩選是不夠的，家系間和家系內聯(lián)合進行配合選擇［17］是篩選優(yōu)良抗寒單株的最佳方法。

(2)該試驗是在一年生苗冬季假植的二年生實生苗群體中進行的評定與篩選，而進行一年生苗的假植費工費事，在生產(chǎn)中無法大規(guī)模實施。為結合北方大葉女貞的生產(chǎn)育苗，家系及單株的抗寒性篩選可在一年生苗及經(jīng)平茬后再生長的“二年生根一年生干”的苗木群體中進行。此外，大葉女貞苗木的抗寒性受環(huán)境的影響很大，田間試驗的邊緣效應十分明顯，試驗中應盡可能地保持環(huán)境條件的一致性，才能得到可靠的結果。

(3)由于苗木的抗寒性和生長量不存在相關性，所以抗寒性的篩選必須在經(jīng)過冬天后春季進行，一年生苗時的早期篩選沒有意義。而在生產(chǎn)實踐中，通常是抗寒性強且生長量大的單株更具有應用價值，所以生長量的選擇應在抗寒單株的基礎上進行。

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