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摘要：采用超高壓方法和微波輔助方法優(yōu)化了朝鮮淫羊藿（Epimedium koreanum Nakai.）多糖的提取工藝。通過試驗確定了超高壓提取朝鮮淫羊藿多糖的最佳工藝為體積分數(shù)30%乙醇溶液、300 MPa、提取30 s、固液比1∶50 （g：mL）；微波輔助提取朝鮮淫羊藿多糖的最佳工藝為體積分數(shù)30%乙醇溶液、700 W、提取60 s、固液比1∶50 （g：mL）。通過對比2種提取方法可知，超高壓提取的多糖溶液在外觀上澄清透明，優(yōu)于微波提取，但在多糖提取率上2種方法沒有明顯差別。

關(guān)鍵詞：朝鮮淫羊藿（Epimedium koreanum Nakai.）；多糖；超高壓；微波

中圖分類號：R282 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）01-0145-03

淫羊藿（Epimedium koreanum Nakai.）多糖是一種含有多種單糖的雜多糖[1]。目前，研究表明朝鮮淫羊藿多糖具有抗腫瘤、抗氧化、抗輻射、提高免疫力等多種功效[2]。近年來，更有研究表明其可以作為免疫佐劑增強小鼠對甲型流感的免疫作用[3]。

目前，已有多種提取分離朝鮮淫羊藿多糖的方法，包括熱回流提取[4，5]、柱分離[6]以及超濾膜等工藝[7]。為了進一步研究淫羊藿多糖的提取分離，本試驗將超高壓提取和微波輔助提取技術(shù)應(yīng)用于朝鮮淫羊藿多糖的提取，并且改進了傳統(tǒng)的微波輔助提取技術(shù)，以尋求最適用于朝鮮淫羊藿多糖的提取方法。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

試驗材料，購于吉林省白山市長白朝鮮族自治縣，經(jīng)鑒定為朝鮮淫羊藿；3，5-二硝基水楊酸（DNS），國藥集團化學(xué)試劑有限公司；蒽酮，中國醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑公司；濃硫酸、丙三醇均為分析純，北京化工廠；去離子水，實驗室自制。

DL700-0.55×1.5型超高壓提取設(shè)備，上海大隆機器廠；UV-2550型紫外可見分光光度計，日本島津國際貿(mào)易（上海）有限公司；微波提取裝置，實驗室自制。

1.2 試驗方法

多糖的測定方法：參照文獻[8，9]的方法分別測定總糖和還原糖的含量，計算得出多糖的含量。

超高壓提取方法：精確稱取一定量的樣品與溶劑按一定比例混合后，用塑料袋封好，放入超高壓提取設(shè)備內(nèi)，在常溫、適當(dāng)壓力下保持一定時間后卸壓取出，離心，取上清液備用。

微波輔助提取法：精確稱取一定量的樣品與溶劑按一定比例混合后，放置于自制的微波提取裝置內(nèi)，設(shè)置時間，加熱提取，結(jié)束后離心，取上清液備用。

1.3 超高壓提取方法單因素試驗

1）乙醇體積分數(shù)對多糖提取率的影響。分別精確稱取6份（每份1.0 g）朝鮮淫羊藿干燥粉末于干凈的塑料袋中，分別加入30 mL體積分數(shù)為0、10%、20%、30%、40%、50%的乙醇溶液，塑封好，放入超高壓提取容器內(nèi)，在100 MPa壓力下，保壓2.0 min后瞬間卸掉壓力，取出樣品，離心，取上清液，按照“1.2”中的方法測定多糖含量。

2）提取壓力對多糖提取率的影響。分別精確稱取6份（每份1.0 g）朝鮮淫羊藿干燥粉末于塑料袋中，分別加入30 mL 30%乙醇溶液，塑封好，分別放入超高壓提取容器內(nèi)，在不同的壓力下（50、100、200、300、400、500 MPa）下保壓2.0 min后瞬間卸壓，然后取出樣品，離心，取上清液測定多糖含量。

3）溶劑用量對多糖提取的影響。分別精確稱取7份（每份1.0 g）朝鮮淫羊藿干燥粉末于塑料袋中，分別加入不同體積（10、20、30、40、50、60、70 mL）30%的乙醇溶液，塑封好，放入超高壓提取容器內(nèi)，分別在100 MPa下保壓2.0 min后瞬間卸壓，取出樣品，離心，取上清液測定多糖含量。

4）提取時間對多糖提取的影響。精確稱取6份（每份1.0 g）朝鮮淫羊藿干燥粉末于塑料袋中，分別加入30 mL 30%乙醇溶液，塑封好，放入超高壓提取容器內(nèi)，在100 MPa壓力下分別保壓不同時間（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 min）后瞬間卸壓，取出樣品，離心，取上清液測定多糖含量。

1.4 微波輔助提取方法單因素試驗

1）提取時間。精確稱取朝鮮淫羊藿干燥粉末4份（每份2.0 g）置于圓底燒瓶中，每只圓底燒瓶中加入60 mL 30%乙醇溶液，放置在微波提取裝置中，分別設(shè)不同的提取時間（10、20、40、60 s）后取出，離心，取上清液，按照“1.2”中方法測定多糖含量。

2）固液比。精確稱取朝鮮淫羊藿干燥粉末1.2、2.0、6.0 g置于圓底燒瓶中，分別加入60 mL 30%乙醇溶液，配制成固液比為1∶50、1∶30、1∶10（g∶mL，下同）的提取液放置在微波提取裝置中，加熱20 s后取出，離心，取上清液測定多糖含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 超高壓提取朝鮮淫羊藿多糖最佳工藝的確定

2.1.1 乙醇體積分數(shù)對多糖提取率的影響 從圖1可以看出，當(dāng)乙醇體積分數(shù)在0～30%范圍內(nèi)，隨著乙醇體積分數(shù)的升高，朝鮮淫羊藿多糖提取率隨之提高；當(dāng)乙醇體積分數(shù)超過30%時，多糖的提取率隨著乙醇體積分數(shù)的增加而降低，可能是因為朝鮮淫羊藿中多糖的極性剛好與30%乙醇溶液相當(dāng)。因此，選擇體積分數(shù)30%的乙醇溶液作為最佳溶劑。

2.1.2 提取壓力對多糖提取率的影響 從圖2可以看出，朝鮮淫羊藿多糖提取率隨著提取壓力的增大而不斷升高。方差分析表明，提取壓力對于多糖提取率的影響比較明顯。從機器損耗、能源消耗等多方面考慮，選擇300 MPa作為最適宜提取壓力。

2.1.3 溶劑用量對多糖提取率的影響 從圖3可以看出，隨著溶劑用量的增大，朝鮮淫羊藿多糖的提取率隨之升高，因為溶劑用量越多提取的多糖越徹底，溶出量也越大，然而大量的溶劑也會造成浪費，所以從經(jīng)濟等方面綜合考慮，確定每1.0 g樣品中加入50 mL乙醇溶液作為最適宜的溶劑用量。endprint

2.1.4 提取時間對多糖提取率的影響 從圖4可以看出，隨提取時間的延長，朝鮮淫羊藿多糖的提取率并未增加，說明多糖的提取是在瞬時完成的。因此，為了提高效率，節(jié)省能源，選擇0.5 min作為最適宜的提取時間。

2.2 微波輔助提取朝鮮淫羊藿多糖最佳工藝的確定

微波提取功率，選用微波最大輸出功率700 W，溶劑選用與超高壓提取一致的30%乙醇溶液，其他條件由試驗進行確定。

2.2.1 提取時間對多糖提取率的影響 由圖5可以看出，隨著提取時間的延長，朝鮮淫羊藿多糖的提取率也隨之增加，說明雖然微波的穿透能力很強，可以快速加熱，但是短時間內(nèi)微波提取不能將多糖全部溶出。因此，選擇60 s作為最適宜的提取時間。

2.2.2 固液比對多糖提取率的影響 從圖6可以看出，隨著固液比的提高，朝鮮淫羊藿多糖的提取率隨之提高，因為溶劑用量越多多糖溶出的越徹底，溶出量也越多，然而大量的溶劑也造成了浪費。綜合考慮，確定每1.0 g樣品中加入50 mL乙醇溶液作為最適宜的固液比。

2.3 提取方法比較

通過單因素試驗得出2種方法提取朝鮮淫羊藿多糖的最佳提取工藝，根據(jù)2種方法的最佳工藝提取朝鮮淫羊藿中的多糖，并得出不同方法多糖的提取率，結(jié)果見表1。從表1可以看出，2種提取方法所用溶劑用量一致，超高壓的提取時間較短。超高壓提取在常溫下進行，不需要加熱，可以在某種程度上更好地保留提取物的活性。微波輔助提取的總糖和還原糖的提取率高于超高壓提取，這可能是因為微波提取的加熱溫度較高，有利于有效成分的溶出。但是從多糖的提取率上來看，2種提取方法差異不明顯。

從2種方法所得提取液的顏色和狀態(tài)來看，微波輔助提取可能由于溫度較高的原因，大量的雜質(zhì)在高溫下溶出，提取液比較渾濁，澄清度較差，顏色較深，呈深褐色，而超高壓提取的提取液外觀較好，呈淺黃色，澄清透明狀，雜質(zhì)較少。因此，超高壓提取較微波輔助提取更適用于朝鮮淫羊藿中多糖的提取，實現(xiàn)了朝鮮淫羊藿多糖常溫提取的可能。

3 小結(jié)

通過試驗確定了超高壓提取朝鮮淫羊藿多糖的最佳提取工藝為體積分數(shù)30%乙醇溶液、300 MPa、提取30 s、固液比1∶50（g∶mL）；微波輔助提取朝鮮淫羊藿多糖的最佳工藝為體積分數(shù)30%乙醇溶液、700 W、提取60 s、固液比1∶50 （g∶mL）。通過對比兩種提取方法可知，超高壓提取的多糖溶液在外觀上澄清透明，優(yōu)于微波輔助提取，但在多糖提取率上2種方法沒有明顯差別。

參考文獻：

[1] 饒金華，劉文英，江佳峪.柱前衍生化高效液相色譜法分析淫羊藿多糖中單糖的組成[J].時珍國醫(yī)國藥，2007，18（2）：366-367.

[2] 徐 娟，李 飛.淫羊藿多糖的研究進展[A].中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥炮制分會2009年學(xué)術(shù)研討會論文集[C].武漢：中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥炮制分會，2009.

[3] 董 娜，李 倩，張貴強，等.淫羊藿多糖對甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐劑作用[J].國際藥學(xué)研究雜志，2013，40（1）：63-68.

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