謝曉潔 江 杰 韓 丹 何 波 吳 莉 (昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像科，昆明 650032)

惡性胸膜間皮瘤 (Malignant pleural mesothelioma，MPM)是發(fā)生于胸膜間皮細(xì)胞的一種少見惡性腫瘤，接觸石棉是MPM 的主要致病原因，云南省大姚縣二十分之一地表覆蓋青石棉［1］，是世界上少有環(huán)境致MPM 高發(fā)區(qū)。目前認(rèn)為腫瘤的生長、發(fā)展和轉(zhuǎn)移均呈血管依賴性［2］，本研究通過免疫組織化學(xué)法評估MPM 患者腫瘤組織中微血管密度及相關(guān)血管生成因子的表達(dá)情況，進(jìn)一步揭示MPM 與血管生成之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 病例收集 收集1990 年至2013 年間經(jīng)病理確診的MPM 患者32 例，所有患者均為云南楚雄大姚籍，男女比例為2.2 ∶1，年齡范圍28～77 歲，平均(51.23±24.34)歲。

1.2 實驗方法

1.2.1 蘇木精(Hematoxylin，H)和伊紅(Eosin，E)染色 對32 例蠟塊行HE 染色后于偏光顯微鏡(Olympus，BX51，Japan)下觀片，按組織病理學(xué)分為上皮、纖維肉瘤及混合型。

1.2.2 免疫組織化學(xué)測定 鼠抗人CD34 及血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)單克隆抗體工作液均購自福州邁新生物技術(shù)公司，兔抗人αvβ3 單克隆抗體濃縮液購自英國Abcam 公司，稀釋濃度為1 ∶100，二抗檢測試劑盒(K500711)購于DAKO 公司，標(biāo)記物為辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)，DAB 顯色。采用免疫組化S-P 法測定32 例蠟塊。

1.3 免疫組化染色陽性結(jié)果判定 CD34:表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，顯示小血管輪廓，陽性部位呈棕黃色。腫瘤內(nèi)微血管密度(Microvessel density，MVD)判定方法:以CD34 標(biāo)記MVD，參照Weidner［3］方法:先在低倍鏡下(×100)確定腫瘤血管密度最高處，再在高倍鏡下(×400)計數(shù)5 個視野內(nèi)的血管數(shù)，求平均值作為MVD。VGEF:免疫反應(yīng)陽性物主要位于腫瘤細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色。整合素αvβ3:免疫組化反應(yīng)受體在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈棕褐色。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS17.0 軟件，不同病理類型MVD 組間比較用單因素方差分析;CD34、VEGF、αvβ3 陽性率組間比較采用χ2檢驗;VEGF 與αvβ3 表達(dá)的一致性采用Kappa 檢驗，VEGF 表達(dá)與腫瘤MVD 的相關(guān)性分析采用Spearman 等級相關(guān)分析。P＜0.05 有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 組織病理學(xué)分型 以上皮型居多，占40.63%(13/32)，纖維肉瘤型(28.13%)和混合型(31.25%)所占比例相當(dāng)。

2.2 CD34 及MVD 值測定 32 例MPM 患者中CD34 陽性27 例，陽性率為84.38%。三種病理類型比較，CD34 在混合型中表達(dá)最高，為90% (9/10)，其次為纖維肉瘤型88.89% (8/9)及上皮型76.92%(10/13)，三者表達(dá)情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值=0.927，P=0.629 ＞0.05)。以CD34 標(biāo)記MVD，MVD 值:上皮細(xì)胞型20.94，肉瘤樣型22.02，混合型28.40，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.328，P=0.723＞0.05)。見圖1。

2.3 VEGF 測定 VEGF 免疫組化染色陽性表達(dá)率為53.13%(17/32)，其在纖維肉瘤型中表達(dá)最高，為66.67%(6/9)，其次為混合型60.00%(6/10)及上皮型38.46%(5/13)，三者表達(dá)情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.975，P=0.373 ＞0.05)。見圖2。

2.4 整合素αvβ3 測定 其免疫組化染色陽性表達(dá)率為28.13%(9/32)，以纖維肉瘤型中表達(dá)最高，為44.44%(4/9)，其次為混合型30.00%(3/10)及上皮型15.38%(2/13)，三者表達(dá)情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.247，P=0.325 ＞0.05)。見圖3。

2.5 VEGF 與αvβ3 表達(dá)的一 致性和VEGF 及αvβ3 表達(dá)與腫瘤MVD 的相關(guān)性分析 MPM 中VEGF 與αvβ3 表達(dá)兩者呈中度一致性，Kappa 值=0.513，P=0.001＜0.05。VEGF 表達(dá)與腫瘤MVD 相關(guān)性分析表明兩者呈中度正相關(guān)(P=0.003，r=0.490)。αvβ3 表達(dá)與腫瘤MVD 相關(guān)性分析表明兩者呈中度正相關(guān)(P=0.008，r=0.559)。

圖1 CD34 陽性表達(dá)(×400)Fig.1 CD34 positive expression(×400)

圖2 VEGF 陽性表達(dá)(×400)Fig.2 VEGF positive expression(×400)

圖3 αvβ3 陽性表達(dá)(×400)Fig.3 αvβ3 positive expression(×400)

3 討論

CD34 主要標(biāo)記造血干細(xì)胞髓樣細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，可以識別內(nèi)皮細(xì)胞分化，但識別血管的敏感性與腫瘤分級無關(guān)。本組CD34 陽性表達(dá)率為84.38%，雖略低于高杰［4］報道的表達(dá)率(100%)，但均表明MPM 在各種病理類型中均存在較豐富的新生腫瘤血管。本組MVD 值測定結(jié)果與趙鶯［5］及Kaira［6］的研究結(jié)果相似，進(jìn)一步證實了CD34 抗原廣泛表達(dá)于組織血管內(nèi)皮細(xì)胞中。

腫瘤血管生成受多種因素的影響，其中功能最強、作用最直接的是VEGF［7］。本研究結(jié)果顯示VEGF 陽性表達(dá)率為53.13%，與國內(nèi)新近研究［4］55.7%類似(44/ 79)，低于國外［8］報道75.9%(41/54)。本組中VEGF 表達(dá)與腫瘤MVD 兩者呈中度正相關(guān)，說明VEGF 的陽性表達(dá)與MVD 關(guān)系密切，VEGF 對腫瘤新生血管的生成起著重要作用。

在新生血管形成過程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞必須在整合素的介導(dǎo)下互相黏附并與細(xì)胞外基質(zhì)黏附以形成新的血管團(tuán)，其中整合素αVβ3 的作用尤為重要［9］。但其在MPM 組織中是否表達(dá)尚未見報道，本研究得到整合素αvβ3 在MPM 中的陽性表達(dá)率為28.13%，與VEGF 的表達(dá)呈中度一致性，與腫瘤MVD 呈中度正相關(guān)。表明αvβ3 與CD34 及VEGF一起，可作為反映MPM 腫瘤血管生成的指標(biāo)，但其陽性表達(dá)率本組較低，需在今后的實驗中收集新鮮標(biāo)本，改進(jìn)實驗方法來獲得進(jìn)一步的證實。

［1］羋 靜，賈賢杰，楊林生，等.大姚縣青石棉污染區(qū)惡性腫瘤死亡27 年回顧性隊列研究［J］.腫瘤，2012，32(7):516-521.

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