王 艷,田榮華

(湖北省孝感市中心醫(yī)院磁共振室 432000)

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·論 著·

TACE和RFA治療肝細(xì)胞肝癌對機(jī)體細(xì)胞免疫功能的影響

王 艷,田榮華△

(湖北省孝感市中心醫(yī)院磁共振室 432000)

目的 探討肝動脈栓塞化療(TACE)和經(jīng)皮肝臟射頻消融術(shù)(RFA)治療肝細(xì)胞肝癌對機(jī)體細(xì)胞免疫功能的影響。方法 選取84例乙肝相關(guān)肝細(xì)胞肝癌患者，根據(jù)介入治療方式分為TACE組(n=52)和RFA組(n=32)，其中TACE組大肝癌患者18例(直徑大于5 cm)，小肝癌患者34例(直徑小于或等于5 cm)；RFA組大肝癌患者15例，小肝癌患者17例。分別于患者術(shù)前、術(shù)后24 h及術(shù)后7 d采用FACS Calibur流式細(xì)胞儀對免疫細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測。結(jié)果 TACE組小肝癌患者術(shù)后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，RFA組小肝癌患者術(shù)后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前升高，但CD8+降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；TACE組大肝癌患者術(shù)后24 h時和術(shù)后7 d時CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前降低，且術(shù)后7 d時CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)后24 h時升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，RFA組大肝癌患者術(shù)后24 h時CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均較術(shù)前降低，術(shù)后7 d時CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均較術(shù)前升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；術(shù)后7 d時RFA組大小肝癌患者CD4+/CD8+高于TACE組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 無論是TACE還是RFA，均會對肝癌患者免疫功能產(chǎn)生影響，RFA對患者術(shù)后肝功影響較小，且有利于免疫功能恢復(fù)。

肝細(xì)胞肝癌； 肝動脈栓塞化療； 經(jīng)皮肝臟射頻消融術(shù)； 細(xì)胞免疫

肝細(xì)胞肝癌是位于世界常見腫瘤第5位的惡性腫瘤，我國患者約占全世界的55%，屬于高發(fā)國家，對于早期肝癌手術(shù)治療最有效[1]。肝動脈栓塞化療(TACE)和經(jīng)皮肝臟射頻消融術(shù)(RFA)是對于無法進(jìn)行手術(shù)治療患者的兩種首選非手術(shù)介入治療方法，并取得了一定臨床效果[2-3]。然而，有研究指出，對于乙肝病毒所致肝細(xì)胞肝癌患者在行介入治療后會出現(xiàn)病毒感染反彈[4]。亦有研究指出，介入微創(chuàng)治療術(shù)后機(jī)體免疫功能會發(fā)生改變[5]。目前對于介入治療是否會對機(jī)體免疫產(chǎn)生影響尚無統(tǒng)一結(jié)論。因此，本研究進(jìn)一步探討TACE和RFA治療對肝細(xì)胞肝癌患者術(shù)后機(jī)體免疫功能的影響，以期為臨床實踐提供基礎(chǔ)資料。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年3月至2013年4月在本院進(jìn)行介入治療的乙肝相關(guān)肝細(xì)胞肝癌患者84例，其中男71例，女13例，年齡31～73歲，平均(56.8±9.4)歲，所有患者均經(jīng)肝穿刺病理確證為肝細(xì)胞肝癌。Child-Pugh分級：A級69例，B級15例。治療前65例患者接受規(guī)范服用核苷類抗病毒治療3個月以上，19例未進(jìn)行治療。根據(jù)患者介入治療方式分為TACE組和RFA組，其中TACE組52例，男45例，女7例；平均年齡(57.3±9.0)歲；Child-Pugh分級：A級44例，B級8例；腫瘤直徑大于5 cm者18例，作為大肝癌組，腫瘤直徑小于或等于5 cm者 34例，作為小肝癌組；甲胎蛋白(AFP)水平(367.6±49.7)ng/mL；包膜完整37例(71.2%)，不完整15例(28.8%)；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期32例(61.5%)，Ⅲ～Ⅳ期20例(38.5%)；病理學(xué)分級：低分化17例(32.7%)，中分化18例(34.6%)，高分化17例(32.7%)。RFA組32例，男26例，女6例；平均年齡(56.2±10.2)歲；Child-Pugh分級：A級25例，B級7例；腫瘤直徑大于5 cm者15例，作為大肝癌組，腫瘤直徑小于或等于5 cm者17例，作為小肝癌組；AFP水平(373.2±53.4)ng/mL；包膜完整21例(65.6%)，不完整11例(34.4%)；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期21例(65.6%)，Ⅲ～Ⅳ期11例(34.4%)；病理學(xué)分級：低分化9例(28.1%)，中分化12例(37.5%)，高分化11例(34.4%)。TACE組和RFA組患者在年齡、性別、Child-Pugh分級、AFP水平、包膜完整性、TNM分期、病理學(xué)分級等一般情況方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 TACE組 所有患者均采取Seldinger技術(shù)，將導(dǎo)管經(jīng)皮股動脈選擇性置入肝總動脈，注入造影劑，對腫瘤部位、大小和血供情況進(jìn)行觀察，明確腫瘤血供后，將微導(dǎo)管超選擇性置入腫瘤靶供血動脈，將化療藥物(5-氟尿嘧啶500～1 000 mg+表阿霉素20～40 mg)和栓塞劑(明膠海綿1～2 mm+超液態(tài)碘油5～15 mL)經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行灌注，對靶動脈進(jìn)行封閉。

1.2.2 RFA組 所有患者術(shù)前禁飲禁食，采用Cool-tip冷循環(huán)射頻治療系統(tǒng)(購自美國Radionics公司)對患者進(jìn)行冷循環(huán)射頻消融，參數(shù)設(shè)置：電極針17 G、針尖長度3 cm，電流1～2 A，功率100～200 W，頻率480 kHz。在超聲引導(dǎo)下進(jìn)行定位，根據(jù)腫瘤形狀對電極針布放方式進(jìn)行設(shè)計，使消融覆蓋整個腫瘤，并超過腫瘤邊緣0.6～1.0 cm，每針消融12 min，術(shù)后針尖溫度超過70 ℃。治療后24～48 h進(jìn)行增強(qiáng)CT復(fù)查，對消融范圍進(jìn)行觀察，對于消融不徹底的患者，7 d后再行RFA。

1.2.3 實驗室檢測 分別于患者術(shù)前、術(shù)后24 h及術(shù)后7 d時抽取患者外周靜脈血10 mL，抗凝，采取密度梯度離心法用淋巴細(xì)胞分離液對外周血有核細(xì)胞進(jìn)行分離，并進(jìn)行標(biāo)記染色25 min，加入細(xì)胞裂解液10 mL搖晃均勻，室溫條件下孵育15 min，在233 g離心力下離心10 min，棄上清液，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗2次。采用FACS Calibur流式細(xì)胞儀(購自美國BD公司)對免疫細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測，采用Cell Quest軟件獲取細(xì)胞并進(jìn)行分析。分別于術(shù)前和術(shù)后7 d時采用日立7180型全自動生化分析儀(購自日本日立公司)對患者肝功能指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)進(jìn)行檢測。

2 結(jié) 果

2.1 4項肝功能指標(biāo)在TACE患者術(shù)前和術(shù)后結(jié)果比較 見表1。TACE組患者中小肝癌組患者ALT、AST、ALB和TBIL 術(shù)前和術(shù)后差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；大肝癌組患者ALT、AST和TBIL術(shù)后均高于術(shù)前，而ALB低于術(shù)前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 4項肝功能指標(biāo)在TACE患者術(shù)前和術(shù)后結(jié)果比較

注：與術(shù)前相比，*P<0.05。

2.2 4項肝功能指標(biāo)在RFA患者術(shù)前和術(shù)后結(jié)果比較 見表2。RFA組患者中小肝癌組患者ALT、AST、ALB和TBIL 術(shù)前和術(shù)后差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；大肝癌組患者術(shù)后ALT高于術(shù)前，而AST低于術(shù)前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 4項肝功能指標(biāo)在RFA患者術(shù)前和術(shù)后結(jié)果比較

注：與術(shù)前相比，*P<0.05。

2.3 4項免疫細(xì)胞在TACE患者術(shù)前和術(shù)后變化情況 見表3。TACE組患者小肝癌組患者術(shù)后24 h時CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，術(shù)后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；大肝癌組患者術(shù)后24 h時和術(shù)后7 d時CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且術(shù)后7 d時CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)后24 h時升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表3 4項免疫細(xì)胞在TACE患者術(shù)前和術(shù)后變化情況

注：與術(shù)前相比，*P<0.05；與術(shù)后24 h相比，#P<0.05。

表4 4項免疫細(xì)胞在RFA患者術(shù)前和術(shù)后變化情況

注：與術(shù)前相比，*P<0.05；與術(shù)后24 h相比，#P<0.05。

2.4 4項免疫細(xì)胞在RFA患者術(shù)前和術(shù)后變化情況 見表4。RFA患者小肝癌組術(shù)后24 h時CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+與術(shù)前差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，術(shù)后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前升高，但CD8+降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；大肝癌組患者術(shù)后24 h時CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均較術(shù)前降低，術(shù)后7 d時CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均較術(shù)前升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.5 TACE組和RFA組患者不同時間點CD4+/CD8+變化情況比較 TACE組小肝癌患者術(shù)后CD4+/CD8+呈下降趨勢，RFA組小肝癌患者術(shù)后CD4+/CD8+呈上升趨勢，術(shù)后7 d時RFA組高于TACE組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖1；TACE組和RFA組大肝癌患者術(shù)后CD4+/CD8+均呈先下降后上升趨勢，術(shù)后7 d時RFA組高于TACE組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。

圖1 TACE組和RFA組患者小肝癌組不同時間點CD4+/CD8+變化情況

圖2 TACE組和RFA組患者大肝癌組不同時間點CD4+/CD8+變化情況

3 討 論

近年來，隨著微創(chuàng)治療技術(shù)的普及和發(fā)展，介入治療逐漸被應(yīng)用于肝細(xì)胞肝癌的治療，其中TACE和RFA是比較常用的介入治療方式。有研究指出，在早期肝癌和小肝癌治療中TACE和RFA均可獲得較好的臨床效果[6]。肝臟作為機(jī)體最大的免疫器官，在機(jī)體免疫中發(fā)揮重要作用[7]。在肝癌發(fā)生、進(jìn)展過程中會釋放大量的腫瘤移植因子，對機(jī)體免疫功能產(chǎn)生抑制作用[8]。TACE和RFA治療方式是否會對機(jī)體免疫功能產(chǎn)生影響尚無定論。有研究指出，TACE治療中栓塞了癌組織供血動脈，導(dǎo)致癌細(xì)胞壞死，從而有效減少對免疫功能的影響[9]。也有研究指出，行介入治療的患者大多已處于中、晚期，在行栓塞治療過程中會對正常肝組織造成損傷，進(jìn)而導(dǎo)致免疫功能進(jìn)一步下降[10]。亦有研究指出，RFA有利于增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[11]。本研究中對TACE和RFA治療后患者免疫細(xì)胞變化情況進(jìn)行了分析，并比較了兩種方法對免疫功能的影響。

本研究中TACE組和RFA組患者一般情況差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，從而排除了一般情況對研究結(jié)果的影響。同時，本研究中，根據(jù)腫瘤直徑情況進(jìn)行分組分析，結(jié)果顯示，無論TACE組還是RFA組患者，小肝癌組患者ALT、AST、ALB和TBIL 手術(shù)前、后差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明對于直徑小于或等于5 cm的小肝癌，TACE和RFA治療對肝功能影響較小，效果相當(dāng)[12]。對于大肝癌患者，TACE組ALT、AST和TBIL術(shù)后均高于術(shù)前，而ALB低于術(shù)前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；RFA組患者術(shù)后ALT高于術(shù)前，而AST低于術(shù)前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明對于大肝癌患者的介入治療，TACE組和RFA組治療后都會對患者肝功能產(chǎn)生一定的影響，整體上RFA的影響要小于TACE。在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后中，機(jī)體免疫功能發(fā)揮重要作用，尤其是T細(xì)胞在抗腫瘤免疫中意義重大[13]。CD3+、CD4+和CD8+是比較重要的T細(xì)胞亞群，對維持細(xì)胞免疫穩(wěn)態(tài)具有重要作用，CD3+水平主要反映外周血成熟T細(xì)胞水平，CD4+在輔助免疫中發(fā)揮重要作用，CD8+主要發(fā)揮免疫抑制作用，CD4+/ CD8+可反映細(xì)胞免疫穩(wěn)定狀態(tài)，在判別疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后中具有重要意義[14]。本研究結(jié)果顯示，對于小肝癌患者，無論是TACE組還是RFA組，術(shù)后24 h時CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而術(shù)后7 d時，TACE組患者CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，RFA組患者CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前升高，但CD8+降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明對于小肝癌患者，RFA對患者T細(xì)胞亞群影響較小。對于大肝癌患者，TACE組患者術(shù)后24 h時和術(shù)后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)前降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且術(shù)后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術(shù)后24 h時升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明TACE和RFA治療對大肝癌患者T細(xì)胞亞群影響較大，同時，無論大肝癌還是小肝癌組，術(shù)后7 d時RFA組均高于TACE組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示RFA對肝癌患者T細(xì)胞亞群的影響整體小于TACE。分析原因：RFA治療會引發(fā)腫瘤變性壞死，有利于消除腫瘤免疫抑制因子釋放，從而緩解免疫抑制；壞死的腫瘤細(xì)胞有利于增強(qiáng)免疫源性，刺激機(jī)體免疫功能；同時，加熱的過程會導(dǎo)致非特異性炎性反應(yīng)，而高溫?zé)岑熡帜軌虼碳嵝菘说鞍桩a(chǎn)生及增加P53穩(wěn)定性，從而在加強(qiáng)特異性免疫的同時，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的凋亡[15]。

綜上所述，在單純進(jìn)行TACE或RFA治療肝癌時，RFA相對對患者肝功能的影響較小，無論是TACE還是RFA均會對患者免疫功能產(chǎn)生影響。RFA更有利于患者術(shù)后免疫功能恢復(fù)，在諸多影響因素中，腫瘤大小在介入治療對肝功能及細(xì)胞免疫的影響中意義重大。由于本研究是初步的觀察性研究，且標(biāo)本量相對較少，下一步將針對介入治療對細(xì)胞免疫影響的可能機(jī)制進(jìn)行研究，以進(jìn)一步完善介入治療方案。

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Influence of TACE and RFA on immune function in treatment of hepatocellular carcinoma

WANGYan，TIANRong-hua△

(DepartmentofMRI,XiaoganCentralHospital,Xiaogan,Hubei432000,China)

Objective To investigate the influence of transcatheter arterial chemoembolization (TACE) and radiofrequency ablation (RFA) on immune function in treatment of hepatocellular carcinoma (HCC).Methods 84 cases of patients with HBV-related HCC were divided into TACE group (n=52) and RFA group (n=32) according to interventional treatment.In TACE group,there were 18 cases of large size HCC (tumor diameter >5 cm) and 34 cases of small size HCC (tumor diameter ≤5 cm).In RFA group,there were 15 cases of large size HCC and 17 cases of small size HCC.The immune cell subsets were detected by using FACS Calibur flow cytometer respectively before surgery,24 h and 7 d after surgery.Results 7 d after surgery,CD4+and CD4+/CD8+of patients with small size HCC in TACE group significantly reduced comparing with their preoperative data (P<0.05),while CD4+and CD4+/CD8+of patiens with small size HCC in RFA group were elevated comparing with their preoperative data,but CD8+reduced,with statistical differences (P<0.05).24 h and 7 d after surgery,CD3+,CD4+and CD4+/CD8+of patients with large size HCC in TACE group significantly reduced comparing with their preoperative data,and those were significantly higher at 7 d after surgery than 24 h after surgery,with statistical differences (P<0.05).In RFA group,CD3+,CD4+and CD4+/CD8+of patients with large size HCC reduced at 24 h after surgery,and increased at 7 d after surgery,comparing with the preoperative data (P<0.05).7 d after surgery,CD4+/CD8+of large and small size HCC patients in RFA group were significantly higher than TACE group (P<0.05).Conclusion Whether TACE or RFA would affect the immune function in HCC patients.RFA had less impact on postoperative liver function and was conducive to the recovery of immune function.

hepatocellular carcinoma; TACE; RFA; cellular immunity

王艷，女，本科，主管技師，主要從事普通放射、乳腺鉬靶、介入、CT、MRI研究?！?/p>

，E-mail：tianrh9999@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.036

A

1672-9455(2015)24-3705-04

2015-05-25

2015-08-26)