張春陽(yáng),黃 山，劉志琴

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)研究生院，貴陽(yáng) 550001；2.貴州省人民醫(yī)院,貴陽(yáng) 550001)

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·論 著·

結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄相關(guān)性研究*

張春陽(yáng)1,黃 山2△，劉志琴2

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)研究生院，貴陽(yáng) 550001；2.貴州省人民醫(yī)院,貴陽(yáng) 550001)

目的 探討結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄相關(guān)性及其臨床診斷價(jià)值。方法將197例行冠狀動(dòng)脈造影的患者按造影結(jié)果分為冠心病狹窄組86例，非冠心病狹窄組64例,冠狀動(dòng)脈正常對(duì)照組47例。采用單因素方差分析探討各組與對(duì)照組間臨床基線資料和CTGF、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的差異，采用Spearman分析冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄程度(Gensini積分與CTGF的相關(guān)性，并繪制CTGF的ROC曲線，評(píng)價(jià)其臨床診斷價(jià)值)。結(jié)果 對(duì)照組、冠心病與非冠心病冠狀動(dòng)脈狹窄組在吸煙、年齡、性別、高密度脂蛋白膽固醇及細(xì)胞因子CTGF、TGF-β1組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；血清CTGF與Gensini積分相關(guān)(r=0.713,P=0.000),通過(guò)分析CTGF診斷冠狀動(dòng)脈狹窄的ROC曲線：診斷臨界值、曲線下面積、敏感度、特異度分別為：503.65 pg/mL、0.973、92%、94%。結(jié)論 CTGF與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄相關(guān)，血清CTGF水平可作為評(píng)估冠狀動(dòng)脈狹窄及嚴(yán)重程度的指標(biāo)。

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄； 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子； 相關(guān)性

近年來(lái)，我國(guó)心血管疾病發(fā)病率和病死率穩(wěn)居疾病譜的首位，動(dòng)脈粥樣硬化是最重要的致病基礎(chǔ)[1]。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)是一種生物學(xué)作用廣泛的富含半胱氨酸的分泌性多肽。正常生理情況下多種組織中均有CTGF表達(dá)，它參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增生、分化、胚胎發(fā)育及傷口愈合。在病理情況下，其過(guò)度表達(dá)與某些增生性或纖維化疾病的發(fā)生和發(fā)展高度相關(guān)[2]。大量的研究集中在CTGF致纖維化、硬化性疾病方面，但是在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性疾病方面的系統(tǒng)性研究較少。本研究的目的就是探討CTGF與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的關(guān)系，及其在狹窄診斷中的臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取貴州省人民醫(yī)院2014年5月至2015年1月在心內(nèi)科病區(qū)行冠狀動(dòng)脈造影檢查的住院患者197例。納入標(biāo)準(zhǔn)：左冠狀動(dòng)脈主干、左前降支、左旋支和右主干至少一支狹窄的成年人。按照冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]將冠狀動(dòng)脈狹窄者分為冠心病狹窄組86例,男66例，女20例；吸煙42例，不吸煙44例。非冠心病狹窄組64例，男31例，女33例；吸煙19例，不吸煙45例。冠狀動(dòng)脈造影及體檢正常設(shè)為冠狀動(dòng)脈正常對(duì)照組47例，男17例，女30例，吸煙8例，不吸煙39例。依據(jù)Gensini積分[4]分為輕度狹窄組(0～12分，64例)、中度狹窄組(>12～34分，54例)重度狹窄組(>34分，32例)和冠狀動(dòng)脈正常對(duì)照組(47例)。排除標(biāo)準(zhǔn)：先天性冠狀動(dòng)脈狹窄及畸形，急性心肌梗死，陳舊性心肌梗死病程少于3個(gè)月，心功能不全(左室射血分?jǐn)?shù)少于30%)，急、慢性炎性反應(yīng)期患者，自身免疫性疾病，出血性疾病，痛風(fēng)，肝功能不全(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶分別高于正常參考值上限的2倍)、腎功能不全(血肌酐大于180 μmol/L和腎小球?yàn)V過(guò)率小于90 mL/min)，血液透析患者，冠狀動(dòng)脈支架植入后，以及腫瘤患者。對(duì)所有納入研究的人員履行告知義務(wù)并簽署知情同意書，該研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 行冠狀動(dòng)脈造影檢查術(shù)前當(dāng)天清晨空腹無(wú)菌采集肘靜脈血，分離血清。

1.2.2 檢驗(yàn)方法和試劑 三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、載脂蛋白A(ApoA)、載脂蛋白B(ApoB)和脂蛋白a(LPa)采用奧林巴斯AU5400自動(dòng)生化分析儀(日本)及配套試劑檢測(cè)；CTGF、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)，試劑盒購(gòu)于上海瓦蘭科技公司，嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作執(zhí)行。

1.2.3 冠狀動(dòng)脈造影 嚴(yán)格按照J(rèn)udkins法手術(shù)操作規(guī)程執(zhí)行，造影結(jié)果由2位臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)生共同分析診斷，影像診斷醫(yī)生對(duì)研究對(duì)象信息并不知曉；依據(jù)冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果參照文獻(xiàn)[4]標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算Gensini積分。

2 結(jié) 果

2.1 3組基線資料和CTGF結(jié)果比較 見表1。由表1可見,傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素：年齡、性別、吸煙組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著年齡、男性占比、吸煙率增長(zhǎng)而狹窄程度有增加的趨勢(shì)；而隨著狹窄程度的增加，高密度脂蛋白膽固醇則有下降趨勢(shì)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這是因?yàn)镠DL是動(dòng)脈粥樣硬化保護(hù)性因子；CTGF、TGF-β1冠心病組、非冠心病狹窄組與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 3組基線資料和CTGF結(jié)果比較

續(xù)表1 3組基線資料和CTGF結(jié)果比較

注：與冠狀動(dòng)脈正常對(duì)照組比較,*P<0.05；與非冠心病狹窄組比較,▲P<0.05。-表示無(wú)數(shù)據(jù)。

2.2 各組CTGF、TGF-β1結(jié)果比較 見表2。以冠狀動(dòng)脈Gensini積分，將冠狀動(dòng)脈狹窄者分為輕度狹窄組、中度狹窄組和重度狹窄組。

表2 各組CTGF、TGF-β1結(jié)果比較

注：與冠狀動(dòng)脈正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與輕度狹窄組比較，▲P<0.05；與中度狹窄組比較，#P<0.05。

圖1 CTGF的ROC曲線

2.3 CTGF和Gensini積分及TGF-β1相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)分析顯示，CTGF和Gensini積分及TGF-β1相關(guān)，Gensini和TGF-β1相關(guān)系數(shù)(r)分別為r=0.713,P=0.000;r=0.778,P=0.000。

2.4 CTGF診斷冠狀動(dòng)脈狹窄的受試者工作曲線(ROC) 見圖1。由CTGF工作曲線計(jì)算可得到曲線下面積為0.973，Cut off值為503.65 pg/mL,特異性為92%，敏感性為94%,診斷指數(shù)為0.86。

3 討 論

CTGF是一種富含半胱氨酸的分泌性多肽類生物學(xué)功能廣泛的生長(zhǎng)因子，正常生理情況下由平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌，可表現(xiàn)出有絲分裂、調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生和血管內(nèi)膜增厚、調(diào)節(jié)血管生成并參與機(jī)體組織的創(chuàng)傷修復(fù)等作用。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成發(fā)展過(guò)程中，血管平滑肌細(xì)胞作為粥樣組織的重要組成部分，在CTGF作用下血管內(nèi)膜的完整性遭到破壞，導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞加速?gòu)膭?dòng)脈中膜向內(nèi)膜遷移，繼而在清道夫膜受體介導(dǎo)下吞噬脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展[5]。CTGF過(guò)度表達(dá)增加血液中單核細(xì)胞的趨化性、增加其黏附血管內(nèi)皮的能力和促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成，CTGF的表達(dá)調(diào)控失衡在動(dòng)脈粥樣硬化等的發(fā)生和發(fā)展中有十分重要的作用[6]。在CTGF致動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中，Ponticos[6]和霍曉川等[7]從不同方面論證了CTGF在動(dòng)脈粥樣硬化形成和發(fā)展中的作用。CTGF的表達(dá)量比正常血管中高50～100倍，且在粥樣斑塊區(qū)域表達(dá)水平更高，尤其是纖維帽的肩部，這樣的分布特點(diǎn)可能與易損斑塊形成相關(guān)。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊免疫組化分析顯示，血管平滑肌細(xì)胞從動(dòng)脈中膜向內(nèi)膜遷移形成泡沫細(xì)胞是重要環(huán)節(jié)，利用CTGF干擾核糖核酸重組質(zhì)粒(CTGF-SiRNA)內(nèi)膜的速度明顯放緩，間接延緩了動(dòng)脈粥樣化的發(fā)展進(jìn)程，這也許為治療動(dòng)脈粥樣硬化提供了新靶標(biāo)。此外，CTGF結(jié)構(gòu)功能區(qū)有胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)、sMad2、a整合素Mβ2等結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)增強(qiáng)基因表達(dá)、促進(jìn)單核細(xì)胞黏附等作用,進(jìn)而與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附、遷移至內(nèi)皮下,吞噬脂質(zhì)生成單核細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞,最終形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊[8]。細(xì)胞外基質(zhì)的生成與降解失衡是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化及狹窄的重要原因，基質(zhì)金屬蛋白酶家族在細(xì)胞外基質(zhì)的平衡維持中發(fā)揮重要作用。有研究指出，CTGF可以增加基質(zhì)金屬蛋白酶的生成，抑制金屬蛋白酶抑制劑的表達(dá)，繼而影響細(xì)胞外基質(zhì)的動(dòng)態(tài)平衡，最終導(dǎo)致血管內(nèi)膜結(jié)構(gòu)和功能紊亂，引起血管重構(gòu)和管腔狹窄[9]。人基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)是一種內(nèi)切蛋白水解酶，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展及嚴(yán)重程度評(píng)估中均發(fā)揮作用。羅俊生等[10]研究指出，下調(diào)CTGF表達(dá)，可以抑制血管平滑肌細(xì)胞中MMP-9表達(dá)，延緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展過(guò)程并有望成為預(yù)防和治療的新靶點(diǎn)。細(xì)胞外基質(zhì)的動(dòng)態(tài)平衡被打破也有利于血管平滑肌細(xì)胞從中膜遷移至血管內(nèi)膜下，加速動(dòng)脈粥樣硬化的形成。本研究中經(jīng)Spearman分析發(fā)現(xiàn)，CTGF與TGF-β1密切相關(guān)(r=0.778,P=0.000),CTGF作為TGF-β1的直接下游效應(yīng)因子，其表達(dá)受TGF-β1的調(diào)節(jié)，并執(zhí)行TGF-β1介導(dǎo)的相關(guān)生物學(xué)功能，刺激細(xì)胞外基質(zhì)合成，加速血管重構(gòu)進(jìn)程，導(dǎo)致動(dòng)脈管腔狹窄[11]。

Gensini積分是較為權(quán)威和系統(tǒng)的冠狀動(dòng)脈狹窄評(píng)價(jià)體系，分析顯示，CTGF與Gensini積分密切相關(guān)(r=0.713,P=0.000)，并且在以積分為依據(jù)的分組方案中，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=60.184，P=0.000)，且隨著冠狀動(dòng)脈狹窄程度的增加，血清CTGF水平逐步增高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Ha等[12]研究認(rèn)為，血漿CTGF水平可作為評(píng)價(jià)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病發(fā)展程度的生物學(xué)標(biāo)志物，以及危險(xiǎn)分層和治療的潛在靶點(diǎn)。冠狀動(dòng)脈狹窄在冠心病的發(fā)生和發(fā)展中占極其重要的地位，所以對(duì)其進(jìn)行早期診斷十分重要。本文特別分析了CTGF的受試者工作曲線，并計(jì)算了相關(guān)參數(shù)，CTGF對(duì)診斷冠狀動(dòng)脈狹窄的意義重大，且依據(jù)血清表達(dá)水平的差異可以評(píng)估狹窄程度。

綜上所述，本文認(rèn)為，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄是一個(gè)多因素相互作用的慢性炎性反應(yīng)的疾病過(guò)程，血清CTGF水平與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄相關(guān)，檢測(cè)CTGF可以有效診斷冠狀動(dòng)脈狹窄及評(píng)估冠狀動(dòng)脈狹窄的嚴(yán)重程度。

[1]Hu SS,Kong LZ,Gao RL,et al.Outline of the report on cardiovascular disease in China,2010[J].Biom Environ Sci,2012,25(3):251-256.

[2]Muratoglu SC,Belgrave S,Hampton B,et al.LRP1 protects the vasculture by regulating levels of connective tissue growth factor and HtrA1[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2013，33(9):2137-2146.

[3]胡大一.全國(guó)?？漆t(yī)師培訓(xùn)規(guī)劃教材——心血管內(nèi)科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2009：282-336.

[4]祝小霞，丁旵東，曾勝煌，等.冠狀動(dòng)脈狹窄程度與冠心病危險(xiǎn)因素的相關(guān)性分析[J].中華老年心腦血管病雜志，2014,16(3)：267-270.

[5]Hopkins PN.Molecular biology of atherosclerosis[J].Physiol Rev，2013，93(3):1317-1542.

[6]Ponticos M.Connective tissue growth factor(CCN2)in blood vessels[J].Vascul Pharmacol，2013，58(3):189-193.

[7]霍曉川，羅俊生，孫霄云，等.結(jié)締組織生長(zhǎng)因子腺病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)血管平滑肌細(xì)胞遷移的影響[J].山東醫(yī)藥，2012，52(4)：30-35.

[8]Shi WX,Leask A,Abraham D.Regulation and function of connective tissue growth factor/CCN 2 in tissue repair,scarring and fibrosis[J].Cytokine Growth Factor Rev,2008,19(2):133-144.

[9]Hall-Glenn F，De Young RA，Huang BL，et al.CCN2/connective tissue growth factor Is essential for pericyte adhesion and endothelial basement membrane formation during angiogenesis[J].PLoS One,2012,7(2):e30562.

[10]羅俊生，馮旭，關(guān)寧，等.CTGF-siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)血管平肌細(xì)胞MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響[J].軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào),2012,33(9):960-962.

[11]Chen C,Wei L,Chen WJ,et al.Serum TGF-β1and SMAD3 levels are closely associated with coronary artery disease[J].BMC Cardiovascular Disorders,2014,14(1):1-7.

[12]Ha YM，Lee DH，Kim M，et al.High glucose induces connective tissue growth factor expression and extracellular matrix accumulation in rat aorta vascular smooth muscle cells via extracellular signal regulated kinase 1/2[J].Korean J Physiol Pharmacol,2013,17(8):307-314.

The correlation between connective tissue growth factor and coronary artery stenosis*

ZHANGChun-yang1,HUANGShan2△,LIUZhi-qin2

(1.GraduateSchoolofGuiyangMedicalUniversity,Guiyang,Guizhou550001,China;2.People′sHospitalofGuizhouProvince,Guiyang,Guizhou550001,China)

Objective To investigate the correlation between connective tissue growth factor (CTGF) and coronary artery stenosis and its clinical diagnostic significance.Methods 197 patients were divided into coronary artery stenosis group (n=86),non-coronary artery stenosis group (n=64),and normal control group (n=47),according to their coronary arteriongraphy results.The differences of clinical baseline data,CTGF,and TGF-β1among these groups were analyzed by one-way ANOVA.The degree of coronary artery stenosis was assessed by Spearman analysis (the correlation between Gensini score and CTGF).ROC curve was drawn to assess the diagnostic significance of CTGF.Results Among coronary artery stenosis group,non-coronary artery stenosis group and normal control group,there were significant differences of smoking history,ages,genders,HDL-C,CTGF and TGF-β1.Serum CTGF positively related with Gensini score (r=0.713,P=0.000).ROC curve showed that the cut-off,AUC,sensitivity and specificity of CTGF for the diagnosis of coronary artery stenosis were respectively 503.65 pg/mL，0.973，92% and 94%.Conclusion CTGF was correlated with coronary artery stenosis,which could be used as an indicator for the diagnosis of coronary artery stenosis.

coronary artery stenosis； connective tissue growth factor； correlation

貴州省省長(zhǎng)資金臨床應(yīng)用課題專項(xiàng)研究資助項(xiàng)目〔黔省專合字(2012)117號(hào)〕。

張春陽(yáng)，男，在讀碩士，主管檢驗(yàn)師，主要從事動(dòng)脈粥樣硬化及心臟標(biāo)志物檢測(cè)?！?/p>

，E-mail：huangshan263@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.009

A

1672-9455(2015)24-3634-03

2015-03-26

2015-06-29)