吳志奇，黃慧青，陳 丹，劉雁雁，倪 芳，宋為娟，謝而付，徐華國(guó)△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)學(xué)部 210029；2.江蘇省連云港市東方醫(yī)院檢驗(yàn)科 222042 )

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·臨床探討·

第三代HIV ELISA診斷試劑初篩試驗(yàn)假陽(yáng)性原因分析*

吳志奇1，黃慧青2，陳 丹1，劉雁雁1，倪 芳1，宋為娟1，謝而付1，徐華國(guó)1△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)學(xué)部 210029；2.江蘇省連云港市東方醫(yī)院檢驗(yàn)科 222042 )

目的 探討第三代HIV ELISA診斷試劑檢測(cè)HIV抗體假陽(yáng)性的原因。方法 對(duì)HIV抗體初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性而確證試驗(yàn)為陰性的90例患者(HIV抗體假陽(yáng)性組)的臨床資料進(jìn)行分析，與90例健康體檢者(健康對(duì)照組)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行比較，分析HIV抗體假陽(yáng)性結(jié)果產(chǎn)生的原因。 結(jié)果 HIV假陽(yáng)性組白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、乳酸脫氫酶(LDT)、α-羥丁酸脫氫酶(HBDH)水平均顯著高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平明顯低于健康對(duì)照組，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 WBC、LDH和HBDH的異常升高及HDL-C的明顯降低與第三代HIV ELISA試劑初篩試驗(yàn)假陽(yáng)性密切相關(guān)。

人類免疫缺陷病毒抗體； 篩查試驗(yàn)； 確證試驗(yàn)； 假陽(yáng)性

獲得性免疫缺陷綜合征即艾滋病(AIDS)，由HIV感染所致，已成為21世紀(jì)危害人類健康的主要疾病之一。為了能夠早期診斷HIV感染，篩查試驗(yàn)極為重要[1]。但現(xiàn)有的篩查技術(shù)，依然難以避免假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，這給實(shí)驗(yàn)室工作帶來(lái)諸多不便，也給臨床診斷帶來(lái)困擾。收集并分析了2010年1月至2014年4月在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的90例門診及住院患者的臨床資料，其HIV抗體初篩為陽(yáng)性，經(jīng)南京市疾病預(yù)防控制中心確證為陰性，以期明確假陽(yáng)性結(jié)果的具體原因，為早期、快速、準(zhǔn)確診斷HIV感染提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 HIV抗體假陽(yáng)性組為2010年1月至2014年4月在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院及門診的HIV抗體初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性而確證試驗(yàn)為陰性的資料完整的90例患者(HIV抗體假陽(yáng)性組)，其中男42例，女48例，年齡20～98歲，平均(51.52±18.25)歲。健康對(duì)照組為該院健康體檢者90例，其中男42例，女48例，年齡24～86歲，平均(51.89±17.84)歲。研究對(duì)象均排除肝臟、血液系統(tǒng)和心腦血管疾病及惡性腫瘤。兩組研究對(duì)象年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.136，P=0.892)。

1.2 方法

1.2.1 HIV抗體檢測(cè) 初篩HIV抗體采用ELISA法，試劑為第三代診斷試劑，由上?？迫A生物工程股份有限公司提供，儀器為全自動(dòng)酶聯(lián)免疫系統(tǒng)，包括MICROLAB STAR VENUS加樣系統(tǒng)和MICROLAB FAME分析系統(tǒng)。對(duì)初篩試驗(yàn)陽(yáng)性的標(biāo)本，使用原試劑和膠體金試劑復(fù)檢。膠體金試劑由英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司提供。篩查陽(yáng)性標(biāo)本送南京市疾病預(yù)防控制中心做確證試驗(yàn)。

1.2.2 其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè) 生化指標(biāo)檢測(cè)標(biāo)本為早上空腹采集靜脈血3～4 mL，3 000 r/min離心5 min后分離血清于2 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。所有生化指標(biāo)均采用Olympus AU5400全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定，分析試劑由上海科華東菱診斷用品有限公司提供。血常規(guī)檢測(cè)使用EDTA-K2抗凝靜脈血，采用Sysmex EX2100血細(xì)胞分析儀及其配套試劑檢測(cè)。檢測(cè)指標(biāo)包括：白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(HBDH)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、脂蛋白a[LP(a)]。

2 結(jié) 果

從90例HIV抗體假陽(yáng)性組標(biāo)本ELISA法檢測(cè)S/CO值分布可見(jiàn)，S/CO≤6的標(biāo)本占97.78%(88/90)，見(jiàn)表1。HIV抗體假陽(yáng)性組WBC、AST、LDH、HBDH、HDL-C、LDL-C水平與健康對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。Spearman相關(guān)分析顯示，WBC、LDH、HBDH、HDL-C與ELISA法假陽(yáng)性率的相關(guān)系數(shù)r分別為：0.308、0.446、0.549、-0.561，在置信度為0.01時(shí)，相關(guān)性是顯著的。Logistic回歸分析各檢測(cè)指標(biāo)與假陽(yáng)性結(jié)果的關(guān)系，見(jiàn)表3。

表1 90例HIV抗體假陽(yáng)性標(biāo)本ELISA法及膠體金法檢測(cè)結(jié)果比較(n)

表2 兩組生化指標(biāo)及血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果比較

續(xù)表2 兩組生化指標(biāo)及血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果比較

表3 假陽(yáng)性標(biāo)本檢測(cè)指標(biāo)的Logistic回歸分析

3 討 論

目前，絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用ELISA法作為HIV抗體篩查試驗(yàn)，假陽(yáng)性結(jié)果不可避免。考慮到本院已經(jīng)采用全自動(dòng)酶聯(lián)免疫系統(tǒng)進(jìn)行HIV檢測(cè)，檢測(cè)步驟相比手工操作更加標(biāo)準(zhǔn)化，重復(fù)性好，人為因素的干擾明顯減少。同時(shí)，初篩試驗(yàn)為陽(yáng)性或有疑問(wèn)時(shí)，會(huì)要求患者抽第2份標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，也大大地減少了隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差的影響。因此在分析HIV抗體假陽(yáng)性標(biāo)本的結(jié)果時(shí)不需要過(guò)多地考慮人為因素。

ELISA法檢測(cè)HIV抗體為陽(yáng)性的標(biāo)本再采用膠體金法進(jìn)行復(fù)檢。膠體金法依靠肉眼判斷結(jié)果，容易受主觀因素影響。為避免漏檢，凡肉眼可見(jiàn)的弱反應(yīng)都判定為陽(yáng)性，本文90例假陽(yáng)性標(biāo)本中，膠體金法檢測(cè)HIV陽(yáng)性8例。S/CO為客觀指標(biāo)，以S/CO≥1為陽(yáng)性。本文90例HIV抗體確證陰性標(biāo)本在用第三代ELISA試劑篩查時(shí)，S/CO為1.0～6.0的標(biāo)本有88例，S/CO>6的標(biāo)本有2例?？梢?jiàn)隨著S/CO值的升高，假陽(yáng)性例數(shù)明顯減少[2]。

為了找到疾病與假陽(yáng)性之間的關(guān)系，本文對(duì)患者的其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)在90例HIV抗體假陽(yáng)性標(biāo)本所屬的患者中，有10例進(jìn)行過(guò)自身抗體檢測(cè)，其中6例自身抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，分別為風(fēng)濕科2例，腎科、呼吸科、消化科和感染科各1例，提示自身免疫性疾病產(chǎn)生的自身抗體可能導(dǎo)致HIV抗體假陽(yáng)性，與之前的報(bào)道結(jié)論相近[3-4]。

90例HIV抗體假陽(yáng)性標(biāo)本中，WBC顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)，可能是因?yàn)?0例患者中有36例來(lái)自血液科，占40%(36/90)。由于WBC升高伴巨脾癥可考慮腫瘤性疾病[5]，提示血液病患者自身或接受治療的情況可能對(duì)HIV抗體的檢測(cè)有影響。有研究表明，LDH可能與血液系統(tǒng)腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[6]。LDH水平與急性T細(xì)胞白血病患者骨髓血管增生程度呈正相關(guān)，且與腫瘤侵襲性及耐藥相關(guān)[7]。LDH存在于心肌、肝臟、骨骼肌、紅細(xì)胞等組織細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和線粒體中，在惡性腫瘤發(fā)生時(shí)，LDH和HBDH活力就會(huì)明顯增高，血清中LDH和HBDH水平可以反映出細(xì)胞增殖和代謝等生物學(xué)性狀。由于白血病患者腫瘤細(xì)胞富含LDH和HBDH，而且具有較強(qiáng)的代謝性和增殖性，因此白血病患者血清LDH和HBDH水平顯著升高。本研究發(fā)現(xiàn)，HIV抗體假陽(yáng)性標(biāo)本的LDH和HBDH水平也明顯高于健康對(duì)照組(P<0.05)，提示腫瘤性疾病可能是導(dǎo)致HIV抗體假陽(yáng)性的原因之一。AST、HBDH和LDH是心肌酶譜中的一部分，在心肌梗死的診斷中具有良好的臨床價(jià)值[8]。本研究中，HIV抗體假陽(yáng)性組的AST、HBDH和LDH顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，提示心肌梗死可能是引起HIV抗體假陽(yáng)性的原因之一。

非高密度脂蛋白膽固醇是指除HDL-C以外其他脂蛋白中含有膽固醇的總和。即非高密度脂蛋白膽固醇等于TC減去HDL-C?？梢?jiàn)非高密度脂蛋白膽固醇與HDL-C呈負(fù)相關(guān)，即TC一定，HDL-C降低，則非高密度脂蛋白膽固醇增加。有研究發(fā)現(xiàn)，隨著非高密度脂蛋白膽固醇水平的升高，冠心病、心肌梗死、缺血性卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)增加[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，HIV抗體假陽(yáng)性標(biāo)本的TC水平與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而HDL-C水平明顯低于健康對(duì)照組(P<0.05)，并且這90例標(biāo)本中，HDL-C≤1 mmol/L的標(biāo)本有56例，占62.22%(56/90)，這56例標(biāo)本所屬的患者中，年齡≥50歲者占50%(28/56)，提示老年冠心病、心肌梗死、腦血管病及缺血性卒中等疾病可能是HIV抗體產(chǎn)生假陽(yáng)性的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。Logistic回歸結(jié)果也表明WBC、LDH和HBDH的異常增高及HDL-C的明顯降低與第三代HIV ELISA初篩試驗(yàn)假陽(yáng)性密切相關(guān)。

本研究結(jié)果將為HIV檢測(cè)結(jié)果提供更加科學(xué)的解釋，為早期、快速并準(zhǔn)確診斷HIV感染提供科學(xué)依據(jù)。

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國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81302531)；江蘇省自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(BK20131018)；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.051

A

1672-9455(2015)19-2937-03

2015-01-26

2015-04-12)

△通訊作者，E-mail：huaguoxu@njmu.edu.cn。