韋 巍，林英輝，黃小琪(廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧 530023)

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外周血中CD4+CD25+與CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與Graves病的關(guān)系研究

韋 巍，林英輝，黃小琪(廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧 530023)

目的 分析Graves病(GD)患者外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T(Tr)細(xì)胞的變化。方法 選擇該院內(nèi)分泌科門診或住院部43例GD患者為研究對(duì)象，其中內(nèi)分泌科門診確診的19例GD患者為試驗(yàn)初發(fā)組。接受治療且甲狀腺功能恢復(fù)正常的24例GD患者為治療緩解組；選擇同期健康體檢者20例為健康對(duì)照組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)3組外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-Tr細(xì)胞水平。結(jié)果 試驗(yàn)初發(fā)組外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平為(4.56±4.14)%，明顯低于健康對(duì)照組的(8.84±4.45)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CD8+CD28-Tr細(xì)胞水平為(14.95±5.38)%，與健康對(duì)照組的(10.65±6.37)%比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療緩解組外周血中CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平為(6.99±6.35)%，與健康對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但其CD8+CD28-Tr細(xì)胞水平為(20.48±6.07)%，高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平可能與GD發(fā)病有關(guān)，CD8+CD28-Tr細(xì)胞可能與GD病程發(fā)展有關(guān)。

Graves?。?CD4+CD25+； CD8+CD28-； Tr細(xì)胞

Graves病(GD)是一種伴甲狀腺激素(TH)分泌增多的器官特異性自身免疫疾病，以高甲狀腺素血癥、彌漫性甲狀腺腫、突眼及甲狀腺自身抗體陽(yáng)性為特征。一般認(rèn)為GD以遺傳易感為背景，在感染、壓力等因素作用下誘發(fā)體內(nèi)免疫功能紊亂，是由于正常免疫耐受功能受損導(dǎo)致免疫細(xì)胞及其成分對(duì)自身組織結(jié)構(gòu)和功能的破壞，并出現(xiàn)臨床表現(xiàn)的一類自身免疫性疾病，但其導(dǎo)致自身免疫反應(yīng)的原因尚未明確。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)GD患者外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-T淋巴細(xì)胞的分析，以探索這些指標(biāo)與GD患者臨床狀態(tài)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院內(nèi)分泌科門診或住院部43例GD患者為研究對(duì)象。內(nèi)分泌科門診確診的19例GD患者為試驗(yàn)初發(fā)組，其中男3例，女16例；年齡23～48歲，平均35.6歲，診斷參照《內(nèi)科學(xué)》7版的診斷標(biāo)準(zhǔn)，均未接受抗甲狀腺藥物治療。接受抗甲狀腺藥物治療半年以上，甲狀腺功能恢復(fù)正常的24例GD患者為治療緩解組，其中男5例，女19例，年齡22～50歲，平均36.2歲。選擇在本院體檢的健康人20例為健康對(duì)照組，其中男5例，女15例；年齡24～46歲，平均34.8歲，排除甲狀腺疾病和其他慢性疾病。3組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 外周血淋巴細(xì)胞亞群分析 采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定外周血淋巴細(xì)胞，所用試劑包括抗CD4-FITC、抗CD25-PC5、抗CD8-PC5、抗CD28-FITC、IgG1-FITC、IgG1-PE，均由美國(guó)Beckman-Coulter公司生產(chǎn)。取2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝靜脈血，吸取100 μL全血于4支測(cè)定管，分別加入10 μL IgG1-FITC、IgG1-PE；CD4-FITC、CD25-PE；IgG1-FITC、CD8-PC5；CD28-FITC、CD8-PC5?；靹蚝笫覝乇芄?0 min孵育。加入溶血?jiǎng)┤芙饧t細(xì)胞后，上機(jī)進(jìn)行測(cè)定。全部數(shù)據(jù)采用流式細(xì)胞儀和軟件SYSTEM獲取和分析。

2 結(jié) 果

與健康對(duì)照組相比，試驗(yàn)初發(fā)組外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tr細(xì)胞)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.011)；但CD8+CD28-Tr細(xì)胞與健康對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.058)。治療緩解組外周血CD4+CD25+Tr細(xì)胞與健康對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.231)，但CD8+CD28-Tr細(xì)胞明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。見表1。

表1 3組外周血中CD8+CD28-及CD4+CD25+Tr 細(xì)胞測(cè)定結(jié)果

注：與健康對(duì)照組比較，aP<0.05。

3 討 論

Tr細(xì)胞是T細(xì)胞的一類亞群，此類細(xì)胞能抑制其他T細(xì)胞的活力，在自身免疫性疾病、腫瘤及移植排斥反應(yīng)等疾病的發(fā)生中起重要作用，逐漸受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注[1]。而CD4+CD25+和CD8+CD28-Tr細(xì)胞是Tr細(xì)胞的重要組成部分。在免疫抑制機(jī)制中，CD4+CD25+Tr細(xì)胞能夠抑制那些成功逃避人工誘導(dǎo)耐受機(jī)制的自身反應(yīng)性T細(xì)胞的活性和功能[2]。當(dāng)此類細(xì)胞數(shù)量減少，表面分子表達(dá)缺陷，抑制功能受損均可導(dǎo)致自身免疫病的發(fā)生。近年來(lái)已經(jīng)有研究表明，1型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無(wú)力等自身免疫性疾病患者的外周血中，CD4+CD25+Tr細(xì)胞表達(dá)水平均明顯下降[3-5]。CD8+CD28-Tr細(xì)胞可通過(guò)細(xì)胞間的直接接觸、分泌可溶性的細(xì)胞因子和阻止樹突狀細(xì)胞的成熟來(lái)抑制細(xì)胞毒性效應(yīng)，故CD8+CD28-Tr細(xì)胞在免疫系統(tǒng)的自穩(wěn)調(diào)節(jié)、自身免疫性疾病和器官移植免疫耐受中發(fā)揮著重要作用。CD8+CD28-Tr細(xì)胞在一些自身免疫性疾病中，如強(qiáng)直性脊柱炎、多發(fā)性肌炎、皮肌炎，均可發(fā)現(xiàn)其數(shù)量表現(xiàn)異常[6-8]。

Graves病的發(fā)生是由于對(duì)自己或非己識(shí)別的控制機(jī)制出現(xiàn)了問(wèn)題，一些自身反應(yīng)性T細(xì)胞能夠逃避克隆清除，識(shí)別外周組織抗原并且引起自身免疫反應(yīng)[9]。在本試驗(yàn)結(jié)果顯示，GD初發(fā)患者CD4+CD25+Tr細(xì)胞水平比健康人低，說(shuō)明在GD發(fā)病過(guò)程中存在CD4+CD25+Tr細(xì)胞的缺乏，由于這類細(xì)胞減少可導(dǎo)致T細(xì)胞增殖、機(jī)體維持免疫穩(wěn)定基本過(guò)程失調(diào)。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間藥物治療后，治療緩解組的CD4+CD25+Tr細(xì)胞比試驗(yàn)初發(fā)組稍增高，但較健康對(duì)照組仍偏低，說(shuō)明雖然GD病患者甲狀腺功能恢復(fù)正常，但機(jī)體的免疫系統(tǒng)尚未完全恢復(fù)；GD初發(fā)患者外周血中CD8+CD28-Tr細(xì)胞水平較健康對(duì)照組稍升高，治療緩解組患者升高尤為明顯，提示GD病患者體內(nèi)存在一定比例上升的CD8+CD28-Tr細(xì)胞，但處于疾病初發(fā)期時(shí)該細(xì)胞群可能存在功能缺陷，無(wú)法發(fā)揮正常的抑制功能。治療緩解組患者CD8+CD28-Tr細(xì)胞數(shù)明顯上升，可抑制體內(nèi)異?；罨腡細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞的功能，減輕免疫損傷。

綜上所述，外周血CD8+CD28-和CD4+CD25+Tr細(xì)胞與GD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。進(jìn)一步研究Tr細(xì)胞生物學(xué)特性及其在GD中的致病機(jī)制，將有助于GD的免疫治療及防治。

[1]Ha TY.The role of MicroRNAs in regulatory T cell and in the immune response[J].Immune Network，2011，11(1):11-41.

[2]Miyara M，Amoura Z，Parizot C，et al.Global natural regulatory T cell depletion in active systemic lupus erythematosus[J].J Immunol，2005，175(12):8392-9400.

[3]Tang QZ，Henriksen KJ，Bi MY，et al.In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes[J].J Experi Med，2004，199(11):1455-1465.

[4]趙宏麗，趙俊芳，李孟娟，等．系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其細(xì)胞因子的改變[J]．中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2012，26(7)：581-583．

[5]Balandina A，Lecart S，Dartevelle P，et al.Functional defect of regulatory CD4+CD25+T cells in the thymus of patients with autoimmune myasthenia gravis[J].Blood，2005，105(2):735-741.

[6]Schirmer M，Goldberger C，Würzner R，et al.Circulating cytotoxic CD8+CD28+T cells in ankylosing spondylitis[J] Arthritis Res，2002，32(4):71-76.

[7]Fasth AE，Dastmalchi M，Rahbar A，et al.T cell infiltrates in the muscles of patients with dermatomyositis and polymyositis are dominated by CD28null T cells[J].Immunol，2009，18(3):4792-4799.

[8]Pedroza-Seres M，Linares M，Voorduin S，et al.Pars planitis is associated with an increased frequency of effector-memory CD57+T cells[J].Br Ophthalmol，2007，35(91)：1393-1398.

[9]Shevach E.Regulatory T cells in autoimmunity[J].Annu Rev Immullol，2000，19(18):423-449.

Study on the relationship between regulatory T cell CD4+CD25+and CD8+CD28-in the peripheral blood between graves disease

WEIWei,LINYing-hui,HUANGXiao-qi

(theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiChineseMedicineUniversity,Nanning,Guangxi530023,China)

Objective To analyze the changes of the levels of CD4+CD25+and CD8+CD28-T cells in the peripheral blood in patients with graves disease(GD).Methods A total of 43 patients with GD were selected as objects in this study,19 cases who were diagnosis in outpatient department were selected into incipience group,24 cases who were treated and the thyroid function return to normal status were selected into alleviation group,meanwhile 20 healthy persons were recruited into control group.The levels of CD4+CD25+and CD8+CD28-regulator T cells in the peripheral blood were detected by flow cytometry.Results The CD4+CD25+regulatory T cell levels in incipience group were (4.56±4.14)%,which was significant lower than(8.84±4.45)% in the control group (P<0.05).The CD8+CD28-regulatory T cell levels in incipience group and control gruop were(14.95±5.38)%,(10.65±6.37)respectively，the difference had no significant difference (P>0.05)，the CD4+CD25+regulatory T cell level in the alleviation group was(6.99±6.35)%,which had no significant difference with the control group (P>0.05)，CD8+CD28-regulatory T cell level in the alleviation group was(20.48±6.07)%,which was significant higher than that in the control group (P<0.05).Conclusion The level of CD4+CD25+regulatory T cell in GD patients indicate that they might play an essential role in the pathogenesis of GD.CD8+CD28-regulatory T cell plays important roles during the development of the disease in patients with GD.

graves disease； CD4+CD25+； CD8+CD28-； regulatory T cell

韋巍，女，碩士，主管技師，主要從事臨床血液檢驗(yàn)方面研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.10.016

A

1672-9455(2015)10-1376-02

2014-10-08

2015-01-12)