崔麗紅，黃蔚

（湘西民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南吉首，416000）

葉綠素是一類與光合作用有關(guān)的重要色素，其含量是植物重要的一項(xiàng)生理指標(biāo)。葉片是植物進(jìn)行光合作用的場(chǎng)所，其葉綠素含量的高低是光合作用的效率和質(zhì)量的直接反映，因此葉綠素含量可一定程度上反映植物的生長(zhǎng)發(fā)育狀況。對(duì)于大果型的西瓜而言，光合作用是西瓜產(chǎn)量形成的最重要保證。因此，西瓜葉綠素含量對(duì)西瓜生產(chǎn)至關(guān)重要。

早期被國際上廣泛采用的Arnon 法提取葉綠素，過程繁瑣、工作量大，且葉綠素易受光氧化而導(dǎo)致試驗(yàn)誤差[1]。陳福明等[2]提出的混合液浸提法，卻均由于提取時(shí)間較長(zhǎng)，提取液穩(wěn)定性較差，測(cè)定值偏低而未被廣泛采用。劉絢霞等[3]進(jìn)行了油菜葉綠素提取方法的研究，結(jié)果表明，丙酮∶乙醇為2∶1 混合液提取油菜葉綠素效果較好，操作簡(jiǎn)單、提取完全、誤差小、效率高。本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，在室溫條件下，利用不同時(shí)間、不同混合液浸提葉綠素，以期篩選出測(cè)定西瓜葉片葉綠素所需的最佳時(shí)間和最佳提取液，為西瓜田間大量樣本葉綠素含量的測(cè)定提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試品種為州職一號(hào)，2015 年3 月24 日播種，當(dāng)幼苗長(zhǎng)至4 葉1 心時(shí)，隨機(jī)抽取瓜苗，取第2～3片真葉，洗凈，吸干葉片表面水分，去除葉柄、大葉脈后剪碎混勻。

表1 不同浸提時(shí)間、不同混合液測(cè)定的葉綠素含量比較

采用752 紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，丙酮、95%乙醇、甲醇等試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為蒸餾水。

1.2 試驗(yàn)方法

提取液設(shè)5 個(gè)處理，分別為80%丙酮+20%蒸餾水；50%丙酮+50%乙醇；45%丙酮+45%乙醇+10%蒸餾水；50%丙酮+50%甲醇；45%丙酮+45%甲醇+10%蒸餾水。每份稱取0.2 g，剪碎，在室溫下放入具塞試管，10 個(gè)為一組，室溫暗室下分別加入5種混合提取液2 mL 浸提葉綠素，并不時(shí)搖動(dòng)，8 h 后每隔4 h（即8、12、16、20、24、28 h）每種混合提取液各取出2 支試管，定容至20 mL 然后在663 nm 及645 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值（以蒸餾水為空白，調(diào)整吸光度值至0），根據(jù)Lambert-Beer 定律，計(jì)算鮮樣中葉綠素a 和葉綠素b 的含量[4]。

圖1 5 種葉綠素提取液吸收的光譜

2 結(jié)果與分析

2.1 不同浸提時(shí)間、不同浸提液對(duì)測(cè)定葉綠素含量的影響

從表1 可以看出，在室溫（23℃）下浸提西瓜葉綠素，不同時(shí)間、不同混合液表現(xiàn)出相同的趨勢(shì)，即50%丙酮+50%乙醇、50%丙酮+50%甲醇的混合液提取效果比同類加蒸餾水的好，提取的葉綠素含量相對(duì)較多且時(shí)間較短；單一的80%丙酮+20%蒸餾水提取葉綠素最慢且含量最低，這與陳洪國等[5]的研究結(jié)果一致，表明混合液提取葉綠素比單一的提取液好，且時(shí)間較短。

2.2 不同時(shí)間各提取液吸收光譜的比較

從圖1 可以看出，5 種葉綠素提取液的吸收光譜中，50%丙酮+50%乙醇、50%丙酮+50%甲醇的趨勢(shì)基本一致，所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)663 nm 及645 nm 的最高值均在16 h 出現(xiàn)，其后逐步下降；45%丙酮+45%乙醇+10%蒸餾水、45%丙酮+45%甲醇+10%蒸餾水的趨勢(shì)也基本一致，但其所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)663 nm 及645 nm 的最高值均在20 h 出現(xiàn)，其后開始下降；80%丙酮+20%蒸餾水對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)663 nm 及645 nm的最高值均在24 h 出現(xiàn)，峰值出現(xiàn)時(shí)間最晚，表明此提取液提取葉綠素耗時(shí)最長(zhǎng)，所提取的葉綠素含量最少，至于具體原因有待進(jìn)一步研究。

3 討論與結(jié)論

混合液浸提法所得的葉綠素含量明顯高于單一的浸提液，且提取時(shí)間相對(duì)較短，其中以混合液50%丙酮+50%乙醇浸提所得葉綠素的含量最高。試驗(yàn)中，單一的80%丙酮+20%蒸餾水浸提所得葉綠素含量最低，且浸提時(shí)間最長(zhǎng)。這表明丙酮與乙醇混合提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng)，且等比例等摩爾混合時(shí)效果最佳，在波長(zhǎng)663 nm 及645 nm 的最高值出現(xiàn)時(shí)間最早。因此，在西瓜田間大量樣本葉綠素測(cè)定時(shí)，可采用50%丙酮+50%乙醇提取。

[1]張志良，瞿偉菁.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo).2 版[M].北京：高等教育出版社，2003，67-70.

[2]陳福明，陳順偉.混合液法測(cè)定葉綠素含量的研究[J].林業(yè)科技通訊，1984（2）：4-8.

[3]劉絢霞，董振生，劉創(chuàng)社，等.油菜葉綠素提取方法研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2004，20（4）：62-63.

[4]徐芬芬，葉利民，徐衛(wèi)紅，等.小白菜葉綠素含量的測(cè)定方法比較[J].北方園藝，2010（23）：32-34.

[5]陳洪國，姜軍權(quán).不同浸提溫度、時(shí)間及浸提劑對(duì)測(cè)定葉綠素含量的影響[J].咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，25（6）：77-78.