陳懷安，王 哲，苗文隆，張 瑛，蘇宏偉，劉 碩

（河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院泌尿外科，河北 張家口075000）

非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌（non-muscle invasive bladder cancer，NMIBC）占膀胱腫瘤患者的3／4以上，臨床治療以手術(shù)切除及術(shù)后化療為主［1］。研究發(fā)現(xiàn)NMIBC較其他癌腫的術(shù)后復(fù)發(fā)率高［2］。因此，尋找滿意的觀察指標(biāo)顯得尤為重要。本研究探討轉(zhuǎn)移抑制蛋白1（metastasis suppressor protein 1，MTSS1）及上皮鈣黏蛋白E（E-cadherin）表達(dá)與NMIBC凋亡及預(yù)后的關(guān)系，旨在為膀胱癌患者臨床治療及判斷預(yù)后提供資料。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2007年1月—2008年2月就診于我院泌尿外科的NMIBC患者63例，所有患者均在術(shù)中取膀胱肌層組織經(jīng)病理檢查確診。腫瘤直徑≤3cm 31例，＞3cm 32例。腫瘤發(fā)生部位：前壁14例，后壁9例，膀胱三角區(qū)18例，兩側(cè)壁22例。根據(jù)免疫組織化學(xué)分子細(xì)胞學(xué)檢查分成A、B、C、D 4組。A 組：E-cadherin（＋）、MTSS1（-）15例，男性8例，女性7例，年齡59～94歲，平均（68.2±4.6）歲；病程4個(gè)月～16年，平均（8.2±1.4）年。B組：E-cadherin（-）、MTSS1（＋）17例，男性10例，女性7例，年齡62～95歲，平均（68.6±4.7）歲；病程3個(gè)月～17年，平均（8.4±1.2）年。C組：E-cadherin（＋）、MTSS1（＋）15例，男性11例，女性4例，年齡61～93歲，平均（67.9±4.2）歲；病程2個(gè)月～17年，平均（8.4±1.1）年。D組：E-cadherin（-）、MTSS1（-）16例，男性8例，女性8例，年齡60～96歲，平均（68.6±4.5）歲；病程3個(gè)月～17年，平均（8.3±1.6）年。膀胱肌層標(biāo)本在10%福爾馬林液下制作標(biāo)本并封閉，備用。每個(gè)標(biāo)本均制作3份，1份進(jìn)行HE染色處理，其他2份進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色（SP法）。

1.2 手術(shù)方法 所有患者均接受膀胱腫瘤切除手術(shù)。在硬膜外麻醉下使用100mL 5%葡萄糖溶液灌注膀胱至其充盈狀態(tài)，使用膀胱鏡進(jìn)入尿道檢查腫瘤大小、數(shù)目、位置、形態(tài)等。在電視成像系統(tǒng)下電氣化切除膀胱腫瘤的瘤體和基底部，切除范圍需深達(dá)淺肌層。電切除膀胱腫瘤附近1cm處的正常黏膜組織，術(shù)中取膀胱腫瘤肌層組織送病理檢查，使用沖洗器沖洗血塊和組織碎塊。術(shù)后留置三腔導(dǎo)尿管進(jìn)行持續(xù)沖洗，每周使用50mg吡柔比星灌注膀胱。

1.3 免疫組織化學(xué)分析 采用美國(guó)SANTA CRUZ生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的MTSS1兔多克隆抗體檢測(cè)MTSS1表達(dá)，采用美國(guó)ZYMED公司生產(chǎn)的鼠抗人E-cad單克隆抗體檢測(cè)E-cadherin表達(dá)，HECD-1效價(jià)1∶10。免疫組織化學(xué)所用一抗及ELIVISON試劑盒（PV-9000）和二氨基聯(lián)苯胺酶底物顯色試劑盒均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 取患者癌腫組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析，觀察MTSS1及E-cadherin在NMIBC腫瘤組織的表達(dá)程度。每個(gè)標(biāo)本制作2份切片，切片計(jì)數(shù)3個(gè)視野（400倍），以視野內(nèi)待檢陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞100為明顯陽(yáng)性（＋＋），0～100為陽(yáng)性（＋），視野內(nèi)無(wú)陽(yáng)性待檢細(xì)胞為陰性（-）。隨訪術(shù)后1年復(fù)發(fā)率及5年存活率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；危險(xiǎn)因素采用Cox回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 術(shù)后1年復(fù)發(fā)率、5年生存率比較 C組1年復(fù)發(fā)率最低僅13.33%，5年生存率最高達(dá)93.33%；D組1年復(fù)發(fā)率最高達(dá)68.75%，5年生存率最低僅12.50%；A、B組1年復(fù)發(fā)率和5年生存率介于C、D組之間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表1。2.2 不同臨床特征間MTSS1及E-cadherin表達(dá)比較 復(fù)發(fā)者M(jìn)TSS1和E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)高于未復(fù)發(fā)者（P＜0.01）；病理分級(jí)G3期 MTSS1和E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)高于G1～G2期（P＜0.01）；不同性別、年齡、進(jìn)展情況、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目間MTSS1和E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 Cox回歸分析 以MTSS1（0=陰性，1=陽(yáng)性）及E-cadherin（0=陰性，1=陽(yáng)性）為因變量，以各臨床指標(biāo)為自變量（性別：0=男性，1=女；年齡：0=≤60歲，1=＞60歲；進(jìn)展情況：0=否，1=是；腫瘤大?。?=≤3cm，1=＞3cm；腫瘤數(shù)目：0=單發(fā)，1=多發(fā)；復(fù)發(fā)：0=否，1=是；病理分級(jí)：0=G1～G2，1=G3），進(jìn)行Cox回歸分析，結(jié)果顯示復(fù)發(fā)和病理分級(jí)是MTSS1及E-cadherin陽(yáng)性的危險(xiǎn)因素（P＜0.01），見(jiàn)表3。

表1 4組術(shù)后1年復(fù)發(fā)率、5年生存率比較Table 1 Comparison of postoperative one year recurrence rate，five year survival rate among four groups（例數(shù)，%）

表2 不同臨床特征間MTSS1及E-cadherin表達(dá)比較Table 2 Comparison of clinical characteristics between MTSS1and E-cadherin expression（例數(shù)，%）

表3 MTSS1及E-cadherin與NMIBC臨床特征情況多因素Cox回歸分析結(jié)果Table 3 Multiple factor Cox regression analysis on clinical characteristics of MTSS1，E-cadherin and NMIBC

3 討 論

膀胱癌為泌尿科常見(jiàn)惡性腫瘤，也是全身十大癌癥疾病之一，占我國(guó)泌尿生殖系腫瘤發(fā)病率首位，在西方膀胱癌僅次于前列腺癌。我國(guó)2012年調(diào)查發(fā)現(xiàn)膀胱癌居于惡性腫瘤第9位并有提升趨勢(shì)。該病發(fā)病年齡處于任何年齡層，甚至包括兒童在內(nèi)。但膀胱癌發(fā)病率與年齡成正比，高發(fā)人群發(fā)病年齡在50～70歲之間，且男性高于女性。膀胱癌的病因復(fù)雜，既有內(nèi)在的遺傳因素，又有外在的環(huán)境因素。較為明確的兩大致病危險(xiǎn)因素是吸煙和職業(yè)接觸芳香胺類化學(xué)物質(zhì)。吸煙是目前最為肯定的膀胱癌致病危險(xiǎn)因素，30%～50%的膀胱癌由吸煙引起，吸煙可使膀胱癌危險(xiǎn)率增加2～6倍，隨著吸煙時(shí)間的延長(zhǎng)，膀胱癌的發(fā)病率也明顯增高。膀胱癌臨床手術(shù)效果不徹底，復(fù)發(fā)率較高，首次術(shù)后復(fù)發(fā)率可達(dá)80%以上，其中NMIBC經(jīng)電切術(shù)后復(fù)發(fā)可高達(dá)90%以上［3］。

MTSS1對(duì)于膀胱癌的影響主要作用于癌腫轉(zhuǎn)移階段，該蛋白通過(guò)過(guò)量增殖抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)和黏附［4］。其是否直接作用于腫瘤細(xì)胞，抑制其轉(zhuǎn)移目前機(jī)制不明。也有學(xué)者認(rèn)為MTSS1可能與Rac等因子協(xié)同形成某直接蛋白，影響癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移；MTSS1蛋白與NMIBC的細(xì)胞增殖、組織生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及凋亡存在明顯的相關(guān)性；該蛋白還與NMIBC的分期及復(fù)發(fā)有關(guān)［5-6］。E-cadherin是一種糖蛋白，主要在細(xì)胞間建立一種黏附機(jī)制，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞間的聚集和連接［7-8］。其發(fā)揮作用的機(jī)制主要是與鈣離子特異性結(jié)合，增強(qiáng)細(xì)胞的黏附性［9］。NMIBC的增殖、侵襲與E-cadherin關(guān)系密切，若E-cadherin缺失，腫瘤細(xì)胞將無(wú)限增殖，出現(xiàn)組織渙散、侵襲性增加、腫瘤組織加速轉(zhuǎn)移［10-11］。在正常組織中，E-cadherin表達(dá)率為100%，腫瘤組織的分化程度越差，E-cadherin的缺失程度越高［12］。

本研究C組1年復(fù)發(fā)率最低，5年生存率最高；D組1年復(fù)發(fā)率最高，5年生存率最低；A、B組1年復(fù)發(fā)率和5年生存率介于C、D組之間。表明MTSS1和E-cadherin表達(dá)越高，NMIBC患者術(shù)后預(yù)后越好。Cox回歸分析顯示復(fù)發(fā)和病理分級(jí)是MTSS1和E-cadherin陽(yáng)性的危險(xiǎn)因素（P＜0.01），MTSS1和E-cadherin有望成為NMIBC術(shù)后治療和判斷預(yù)后的新型靶向研究目標(biāo)。

腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，重要的始動(dòng)因素是腫瘤因子，這對(duì)于臨床進(jìn)行靶向治療，抑制腫瘤細(xì)胞分化、生長(zhǎng)、黏附、凋亡的全過(guò)程均可發(fā)揮相當(dāng)重要的作用［13-14］。MTSS1和E-cadherin均與膀胱癌的侵襲及凋亡呈負(fù)相關(guān)，表達(dá)降低是癌細(xì)胞發(fā)生惡化的重要分 子 生 物 學(xué) 基礎(chǔ)［15-17］。所以，通 過(guò) 檢 測(cè)MTSS1和E-cadherin的表達(dá)對(duì)于臨床進(jìn)一步判斷病情十分關(guān)鍵。

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