李亞永，薛 鵬，王瑜玲，劉 巖，李玉坤，江新利

（1.河北省石家莊市第一醫(yī)院內(nèi)科，河北 石家莊050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院內(nèi)分泌科，河北 石家莊050051；3.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北 石家莊050051；4.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院眼科，河北 石家莊050051）

糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病最常見(jiàn)和最嚴(yán)重的眼部微血管并發(fā)癥之一，也是致盲的重要眼病之一。DR最主要的病理改變是新生血管的形成。其中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）是最重要的血管刺激因子和抑制因子，它們的協(xié)同作用在生理性和病理性眼底新生血管形成過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，二者的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)血管滲漏與新生血管的形成至關(guān)重要［1］。但是，目前的研究多集中在動(dòng)物模型，且多集中于眼球局部［2］。本研究通過(guò)檢測(cè)血漿中PEDF及VEGF的含量，旨在明確循環(huán)中二者與DR的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年4—12月河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院內(nèi)分泌科、眼科門(mén)診及住院2型糖尿病患者71例，年齡30～73歲，病程0.05～36年。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡＜30或＞75歲，1型糖尿病，嚴(yán)重心腦血管疾病（心力衰竭、心律失常、心肌梗死），感染，肝腎功能異常，腫瘤，自身免疫系統(tǒng)疾病，低蛋白血癥，貧血。根據(jù)血糖水平和眼底熒光造影及眼底檢查結(jié)果，將糖尿病患者分為2型糖尿病無(wú)視網(wǎng)膜病變（diabetes mellitus without retinopathy）即DM 無(wú)DR組22例，2型糖尿病伴非增殖期視網(wǎng)膜病變（diabetes mellitus nonproliferative DR）即 DM 伴DR組33例，2型糖尿病伴增殖期視網(wǎng)膜病變組（diabetes mellitus with proliferative DR）即 DM 伴PDR組16例。另選取正常志愿者（非糖尿病組）13例作為對(duì)照。所有入選對(duì)象均被告知實(shí)驗(yàn)過(guò)程并簽署知情同意書(shū)。

1.2 血漿樣本采集 于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，上臂肘前靜脈取血3mL，用0.1mol／L 乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝；血漿標(biāo)本4℃靜置4h后3 500r／min離心10min，吸取上清，分裝后置于-80℃冰箱待用。

1.3 血漿PEDF和VEGF含量測(cè)定 應(yīng)用人PEDF酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-inked immunosorbent assay，ELISA）試 劑 盒 （美 國(guó)Chemicon公司）和VEGF ELISA試劑盒（美國(guó)ImmunoWay公司），采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）［M（QR）］表示，多組間比較和兩兩比較采用秩和檢驗(yàn)；相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 研究對(duì)象的基線特征 4組間性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與非糖尿病組比較，DM 無(wú)DR組、DM伴NPDR組和DM伴PDR組年齡均較大（P＜0.05），且DM 伴NPDR組和 DM 伴PDR組年齡大于 DM 無(wú) DR組（P＜0.05）；DM 伴NPDR組和DM伴PDR組病程更長(zhǎng)，與DM無(wú)DR組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 各組血漿中PEDF和VEGF水平比較 與非糖尿病組比較，DM伴NPDR組和DM伴PDR組患者血漿中PEDF水平均明顯升高（P＜0.05）；與DM無(wú)DR組比較，DM伴NPDR組和DM伴PDR組患者血漿中PEDF水平亦升高（P＜0.05）；DM無(wú)DR組與非糖尿病組比較、DM伴PDR組與DM伴NPDR組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。VEGF在4組中值的范圍波動(dòng)較大，但組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表1 4組研究對(duì)象的基本特征Table 1 The basic characteristics of subjects in four grups

2.3 相關(guān)性分析 DR的嚴(yán)重程度與2型糖尿病病程、PEDF呈明顯正相關(guān)（P＜0.01），而與性別、年齡、VEGF無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表2 各組血漿中PEDF和VEGF水平比較Table 2 Comparison of serum PEDF and VEGF concentrations in four groups［M（QR）］

表3 各變量與DR程度的相關(guān)性分析Table 3 The relativity analysis of variables and the degree of DR

3 討 論

DR是糖尿病最常見(jiàn)和最嚴(yán)重微血管并發(fā)癥之一，其基本病理改變是血視網(wǎng)膜屏障破壞，新生血管形成，后期新生血管膜收縮引起牽拉視網(wǎng)膜脫離。一些促血管生成因子和抗血管生成因子共同參與了DR的發(fā)生及進(jìn)展，在這些因子中，VEGF與PEDF是研究的焦點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示，血漿中PEDF隨著糖尿病、DR的發(fā)生發(fā)展逐漸升高，雖然VEGF值范圍波動(dòng)較大，但與DR的發(fā)生發(fā)展無(wú)明顯相關(guān)性。

VEGF是目前已知的功能最強(qiáng)的新生血管形成促進(jìn)因子。研究發(fā)現(xiàn)，眼內(nèi)VEGF水平隨著DR的發(fā)展明顯升高［3］。但是，關(guān)于DR患者血漿VEGF含量的數(shù)值差異極大。有實(shí)驗(yàn)表明增殖性DR患者的玻璃體內(nèi)以及血漿的VEGF含量明顯升高［4-5］。本研究結(jié)果顯示，相對(duì)于非糖尿病患者，2型糖尿病患者血漿中VEGF的水平變化不大。隨著DR的發(fā)生和發(fā)展，血漿中的VEGF亦無(wú)明顯降低趨勢(shì)，這可能跟樣本量少有關(guān)。

目前國(guó)際上關(guān)于DR患者血漿中VEGF的含量的變化尚無(wú)一致結(jié)論。Cavusoglu等［6］發(fā)現(xiàn)隨著DR的發(fā)展以及糖化血紅蛋白水平的增加，血漿中VEGF的呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)。但Ozturk等［7］發(fā)現(xiàn)血漿中的VEGF水平并未隨著DR的發(fā)生和發(fā)展呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，在NPDR以及PDR的血漿中未發(fā)現(xiàn)VEGF的差異。Meleth等［8］也發(fā)現(xiàn)在不嚴(yán)重以及嚴(yán)重的DR患者血漿中VEGF無(wú)明顯差別。結(jié)合本研究中觀察到的糖尿病患者中血漿VEGF的含量變化，我們認(rèn)為眼球局部VEGF含量的變化可能與DR的發(fā)展關(guān)系更為密切，而具體血漿中VEGF含量隨著DR發(fā)生發(fā)展怎樣變化，仍需進(jìn)一步探討。

PEDF被認(rèn)為是最有效的天然血管抑制因子。在DR中PEDF是一個(gè)保護(hù)性因子，具有抗氧化應(yīng)激、抗炎、減少毛細(xì)血管通透性等作用，可以拮抗VEGF的促血管增生作用。眼球內(nèi)PEDF含量的減少，在DR發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮著重要作用［3］。本研究結(jié)果顯示隨著DR的進(jìn)展，患者血漿中PEDF有逐漸增加趨勢(shì)，且血漿中的PEDF水平與DR的發(fā)生以及發(fā)展呈正相關(guān)，而非顯示出對(duì)DR的保護(hù)作用。這可能是因?yàn)槌弁?，機(jī)體多種組織均可產(chǎn)生PEDF，故PEDF在血液中的含量變化差異較大。既往對(duì)循環(huán)中PEDF的研究發(fā)現(xiàn)，血漿中的PEDF升高與機(jī)體胰島素抵抗相關(guān)［9-11］，而這可能與肝臟或脂肪組織產(chǎn)生的PEDF增多有關(guān)［12］。Jenkins等［13］曾發(fā)現(xiàn)，與非糖尿病患者相比，2型糖尿病患者血漿中的PEDF含量明顯升高，但PEDF含量與體質(zhì)量指數(shù)、血肌酐以及低密度脂蛋白膽固醇含量有關(guān)，與藥物應(yīng)用、并發(fā)癥以及性別無(wú)關(guān)。在本研究中，相對(duì)于非糖尿病人群，糖尿病患者血漿中的PEDF含量明顯升高，且隨著DR的發(fā)生與發(fā)展，血漿中的PEDF逐漸升高。故與既往國(guó)際上類(lèi)似的觀察結(jié)果相似，本研究發(fā)現(xiàn)血漿中PEDF水平隨著DR的發(fā)生發(fā)展有增加的趨勢(shì)，這可能與患者糖尿病病程延長(zhǎng)、機(jī)體胰島素抵抗程度增加有關(guān)。血漿PEDF的水平升高并未對(duì)DR起保護(hù)作用，這可能與眼內(nèi)PEDF含量減少、對(duì)視網(wǎng)膜的保護(hù)作用減弱有關(guān)。

綜上所述，本研究中血漿中PEDF的含量隨著糖尿病、DR的發(fā)展呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，這可能與糖尿病的病程增加、機(jī)體胰島素抵抗的程度增加有關(guān)。而DR的發(fā)生發(fā)展與眼內(nèi)PEDF含量的減少、對(duì)視網(wǎng)膜的保護(hù)作用減弱有關(guān)。

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