李 軍，宋秋靈

（山東菏澤市立醫(yī)院，山東菏澤274000）

鼻咽癌（NPC）是國內(nèi)常見的頭頸部惡性腫瘤，全球4／5發(fā)病人口均在我國，南方各省是鼻咽癌的高發(fā)區(qū)。鼻咽癌早期癥狀無特征，容易誤診或漏診，男性發(fā)病高于女性［1－2］。目前鼻咽癌的診斷依據(jù)除了取組織行病理檢查聯(lián)合MRI和CT影像學(xué)，還增加檢測血清胸腺嘧啶脫氧核苷激酶（thymidine kinase，TK），即胸苷激酶，以提高診斷率降低誤診率。TK中的胸苷激酶－1（TK1）是TK家族中研究較為深入的成員，TK1與DNA合成相關(guān)，在臨床用于評(píng)估增殖細(xì)胞增殖度和惡性程度［3－4］，惡性腫瘤患者細(xì)胞過度增殖，DNA 合成增強(qiáng)，血清TK1則現(xiàn)動(dòng)態(tài)增加，那么鼻咽癌患者治療過程中TK1動(dòng)態(tài)增加與病理特征的關(guān)系如何，本課題就此展開研究。

1 資料與方法

1．1 一般資料 經(jīng)院內(nèi)倫理委員會(huì)同意，收集本院2010～2013年在放療科收治且經(jīng)病理確診的鼻咽癌患者35例，年齡（53．6±10．7）歲。TNM 分期：Ⅰ期2例，Ⅱ期10例，Ⅲ期14例，Ⅳ期9例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例；高中分化鱗癌9例，低分化鱗癌16例，未分化癌10例。所有病例接受標(biāo)準(zhǔn)的放射治療。選擇同期鼻咽部炎癥患者20例為對(duì)照組，包括8例扁桃體炎、7例急慢性咽炎和5例鼻前庭囊腫。所有受試者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：已接受過放療或化療的鼻咽癌患者；伴心、肝、肺和腎功能異常者，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，有感染表現(xiàn)，卡氏功能狀態(tài)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（KPS）＜70；血紅蛋白小于90 g／L；既往有除鼻咽癌惡性腫瘤病史；先天性或獲得性免疫缺陷性疾病者；6個(gè)月內(nèi)有獻(xiàn)血史者；維生素缺乏者；處于月經(jīng)期、哺乳或妊娠期者。兩組年齡、BMI、性別比、血紅蛋白、功能狀態(tài)評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。

1．2 方法 鼻咽癌患者均接受根治性放療。Ⅰ期和Ⅱ期患者采用單純放射治療，Ⅲ期和Ⅳ期患者給予鉑類輔助化療1個(gè)療程后進(jìn)行放療，采用直線加速器6MVX線分割照射，每次2 Gy，5次／周，照射劑量：鼻咽部組織70Gy，頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者70 Gy，頸淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者行預(yù)防性照射60Gy，療程6周［5］。鼻咽部炎癥患者給予對(duì)癥治療。

1．3 指標(biāo)檢測［6］

1．3．1 檢測治療前后的血清TK1 采用印跡免疫－增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測血清TK1。所有患者分別在治療前和治療結(jié)束后5d內(nèi)抽取空腹靜脈血5mL，鼻咽部炎癥者于體檢日空腹抽靜脈血5mL，所有收集的全血，離心分離血清。

1．3．2 治療前鼻咽組織的TK1表達(dá) 采用免疫組化法，將石蠟包埋的組織切片、脫蠟、水化，滴加一抗鼠抗人TK1多克隆抗體，對(duì)照采用PBS，滴加二抗，固封，觀察。TK1陽性為細(xì)胞質(zhì)為棕黃色或棕褐色。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，將計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)或構(gòu)成比表示，計(jì)量資料采用x±s表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或組間方差分析，α＝0．05為檢驗(yàn)水平，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 兩組治療前后TK1變化 治療前后，對(duì)照組的TK1無顯著變化（P＞0．05）；與對(duì)照組比，治療前后鼻咽癌組的TK1均較高（P＜0．05）；鼻咽癌組治療前后TK1差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），見表1。

表1 兩組治療前后TK1變化（x±s，pmol／L）

2．2 鼻咽癌患者治療前后血清TK1水平與病理學(xué)參數(shù)分析 治療前后，鼻咽癌Ⅰ～Ⅱ期的TK1顯著低于Ⅲ～Ⅳ期（P＜0．05），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移TK1顯著低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0．05），頸神經(jīng)未侵犯顯著低于頸神經(jīng)侵犯（P＜0．05），顱底未受侵顯著低于顱底受侵（P＜0．05），未分化癌顯著高于高中分化鱗癌和低分化鱗癌（P＜0．05），見表2。

表2 鼻咽癌患者治療前后血清TK1水平與病理學(xué)參數(shù)分析

續(xù)表2 鼻咽癌患者治療前后血清TK1水平與病理學(xué)參數(shù)分析

2．3 鼻咽癌患者治療前病理學(xué)參數(shù)TK1表達(dá)情況 TNMⅣ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、頸神經(jīng)侵犯TK1表達(dá)較高（P＜0．05），見圖1。

圖1 鼻咽癌患者治療前病理學(xué)參數(shù)TK1表達(dá)情況

3 討 論

TK1參與細(xì)胞分裂增殖，與DNA合成呈正相關(guān)，正常細(xì)胞基本不表達(dá)TK1，外周血幾乎檢測不到TK1。惡性腫瘤TK1活性是正常細(xì)胞的4倍，TK1在細(xì)胞周期的不同時(shí)相表達(dá)呈波動(dòng)態(tài)，G1／S期逐漸升高，持續(xù)至S晚期或G2早期，惡性腫瘤可使TK1羧基末梢變異而難降解，使細(xì)胞周期的TK1保持高度活性。多種惡性腫瘤患者組織或血清的TK1呈現(xiàn)高表達(dá)，直腸癌組織的TK1表達(dá)明顯高于直腸良性病組，而直腸良性病組與正常組無顯著差異［7］；宮頸癌TK1表達(dá)明顯增高，TK1水平也是預(yù)測宮頸癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［8］。非小細(xì)胞肺癌組織中TK1表達(dá)亦上調(diào)［9］。因此TK1已作為惡性腫瘤細(xì)胞的活性、分裂增殖速率和惡性程度的重要標(biāo)志，可評(píng)估消化道腫瘤、宮頸癌和肺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后［10－12］。

治療前，鼻咽癌血清TK1顯著高于鼻咽炎癥組，治療后鼻咽癌血清TK1下降，與文獻(xiàn)結(jié)果相似［13－14］，與治療殺死大量增生細(xì)胞，促使腫瘤細(xì)胞死亡或阻滯腫瘤細(xì)胞DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，縮小處于G1～G2期腫瘤細(xì)胞比例，降低了血清TK1水平相關(guān)。但仍需要注意的是，獻(xiàn)血者、妊娠期婦女和維生素缺乏人群因細(xì)胞增生顯著，血清TK1水平也會(huì)升高，這種良性或生理現(xiàn)象可假性拉高TK1水平，對(duì)這類人群的血清TK1高水平不能解讀為病理改變。

TK1水平與鼻咽癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，分期越高，TK1水平越高，鼻咽組織的表達(dá)也越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移高，與文獻(xiàn)結(jié)果相似［6，14，10］。類似地，Chen等［15］和Li等［16］報(bào)道血清 TK1與肺癌、食道癌、甲狀腺癌、食管癌、噴門癌和非小細(xì)胞肺癌的臨床分期有明顯相關(guān)性，臨床分期越高，血清TK1水平也越高。TK1水平越高提示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、頸神經(jīng)侵犯、顱底受侵及病理惡化的概率增高，治療時(shí)TK1水平較治療前不變或升高，推測癌細(xì)胞可能遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，提示治療失敗。可見血清TK1水平與患者腫瘤臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，掌握鼻咽癌細(xì)胞增殖程度，為患者制定個(gè)性和動(dòng)態(tài)放療方案提供依據(jù)［17］。

TK1的檢測與腫瘤的惡性程度密切相關(guān)也提供一個(gè)辯證看待鼻咽癌的觀點(diǎn)：（1）鼻咽癌治療后總體TK1水平降低，肯定了治療效果，但分期越高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、頸神經(jīng)侵犯、顱底侵犯和未分化的鼻咽癌的TK1水平雖有降低但與分期較低、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移、頸神經(jīng)未侵犯、顱底未侵犯和高中低分化仍較高，提示病理惡性程度較高者的預(yù)后不佳，大量臨床試驗(yàn)證明分期Ⅰ和Ⅱ期的患者，單純放療即可達(dá)到治療目的，5年的存活率可超過90%，對(duì)于Ⅱ～Ⅳ期患者，5年的存活率不超過50%，造成治療失敗的原因包括局部復(fù)發(fā)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［18－20］。（2）不論鼻咽癌的分期、轉(zhuǎn)移、侵犯或分化，只要顯著降低鼻咽癌患者體內(nèi)TK1水平并確?；颊叩哪褪芘c安全，那么鼻咽癌的痊愈是可以實(shí)現(xiàn)的，近年大量的研究結(jié)果顯示通過控制TK1基因表達(dá)達(dá)到治療鼻咽癌的目的［21－22］，雖然控制TK1基因表達(dá)還存在諸多人文倫理和耗費(fèi)巨大等經(jīng)濟(jì)問題，但臨床鼻咽癌的治愈仍具希望。

綜上所述，TK1可反映鼻咽癌患者的腫瘤負(fù)荷和增殖活性，對(duì)鼻咽癌診斷、監(jiān)測病情和預(yù)后等多方面有應(yīng)用前景，有望為個(gè)體化基因治療提供新靶點(diǎn)。

［1］ Han L，Lin SJ，Pan JJ，et al．Prognostic factors of 305nasopharyngeal carcinoma patients treated with intensitymodulated radiotherapy［J］．J Chin Cancer，2010，29（2）：145－150．

［2］ 劉潔，廖劍絢，楊巧．晚期鼻咽癌同步放化療患者營養(yǎng)狀況監(jiān)測及院內(nèi)感染分析［J］．臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2014，28（3）：188－191．

［3］ Gasparri F，Wang N，Skog S，et al．Thymidine kinase 1 expression defines an activated G1state of the cell cycle as revealed with site－specific antibodies and ArrayScan assays［J］．Eur J Cell Biol，2009，88（12）：779－785．

［4］ 錢紀(jì)銀．消化道腫瘤患者細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶檢測的臨床意義［J］．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，12（4）：427－428，432．

［5］ Metellus P，Nanni I，Dussert C，et al．Prognostic implications of biologic markers in inteacranial meningiomas：120 cases［J］．Neurochirurgie，2008，54（6）：750－756．

［6］ 王娟毅，馬武，景文江，等．放療同步TNF方案治療鼻咽癌的臨床療效觀察［J］．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014，12（5）：1043－1045．

［7］ Korkmaz T，Seber S，Okutur K，et al．Serum thymidine kinase 1levels correlates with FDG uptake and prognosis in patients with non small cell lung cancer［J］．Biomarkers，2013，18（1）：88－94．

［8］ 唐夢君．鼻咽癌患者血清中胸苷激酶1的檢測意義［D］．長沙：中南大學(xué)，2009．

［9］ 姚怡敏，周菊英，俞志英，等．鼻咽癌患者血清胸苷激酶1的表達(dá)及臨床意義［J］．江蘇醫(yī)藥，2012，38（3）：300－303．

［10］Shen C，Wen Z，Qian Y，et al．Study on the relationship between TK gene regulated by enhanced suicide gene vector and telomerase activity in nasopharyngeal carcinoma cells［J］．Lin Chung Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi，2010，24（4）：168－173．

［11］李小騰，王鋒，黃平．直腸癌患者血清胸苷激酶檢測的臨床意義［J］．江蘇醫(yī)藥，2009，35（12）：1436－1437．

［12］朱棟元．功能影像早期預(yù)測小細(xì)胞肺癌療效及預(yù)后的臨床應(yīng)用研究［D］．濟(jì)南：山東大學(xué)，2013．

［13］Chen G，He C，Li L，et al．Nuclear TK1expression is an independent prognostic factor for survival in pre－malignant and malignant lesions of the cervix［J］．BMC Cancer，2013，21（13）：249．

［14］秦雷，楊林．血清胸苷激酶1與鼻咽癌臨床病理特征相關(guān)性分析［J］．中華腫瘤防治雜志，2013，20（2）：113－117．

［15］Chen Y，Ying MG，Chen YS，et al．Serum thymidine kinase 1correlates to clinical stages and clinical reactions and monitors the outcome of therapy of 1，247cancer patients in routine clinical settings［J］．Int J Clin Oncol，2010，15：359－368．

［16］Li ZS，Wang YH，He J，et al．Serological thymidine kinase 1is a prognostic factor in oesophageal，cardial and lung carcinomas［J］．Eur J Cancer Prev，2010，19（4）：313－318．

［17］秦雷．初治鼻咽癌患者檢測血清胸苷激酶1的臨床意義［D］．合肥：安徽醫(yī)科大學(xué)，2013．

［18］許少偉，楊熙鴻，林建英，等．鼻咽癌放療后頸淋巴結(jié)失敗挽救手術(shù)的療效和預(yù)后因素［J］．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014，12（6）：1297－1300．

［19］管燕，郭其森，山鳳蓮，等．小細(xì)胞肺癌組織胸苷激酶表達(dá)臨床意義的研究［J］．中華腫瘤防治雜志，2010，17（10）：746－748．

［20］Huang SH，Lin JZ，Guo Na，et al．Elevated serum thymidine kinase 1predicts risk of pre／early cancerous progression［J］．Asian Pacific J Cancer Prev，2011，15（12）：497－505．

［21］Shen CX，Wen Z，Qian YH，et al．Targeted gene therapy of nasopharyngeal cancerin vitro and in vivo by enhanced thymidine kinase expression driven by human TERT promoter and CMV enhancer［J］．J Exp Clin Cancer Res，2010，29：94．

［22］Shen CX，Wen Z，Qian YH，et al．Enhanced thymidine kinase genevector and its killing effect on nasopharyngeal carcinomain vitro and in vivo［J］．Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi，2010，45（5）：414－419．