康瑞琴，蘇文輝，張 鑫，王 琪，康舒欣，孫亞茹

（安陽工學院，河南安陽455000）

隨著人們對時尚的追求，染發(fā)越來越多的被廣大消費者所接受。但是由于染發(fā)著色的需要，染發(fā)劑中通常會添加對苯二胺等有機化學物質，伴隨而來的安全性問題也越來越多的引起相關工作者的注意。染發(fā)劑中對苯二胺及其衍生物是極為重要的染料中間體，可作為偶帶氮分散染料、酸性染料、直接染料和硫化染料的中間體。對苯二胺對毛發(fā)中的角蛋白有極強的親和力，染發(fā)時其被氧化的過程就是顏色的固著過程，可將頭發(fā)著色[1]。有實驗證明，長期使用染發(fā)劑可引起人體皮膚過敏反應，如接觸部位的皮膚發(fā)癢、出現(xiàn)紅斑、丘疹，甚至水皰、紅腫、脹痛、滲液等癥狀。如果皮膚有外傷或患皮膚病，則更易吸收化學物質，而導致慢性蓄積中毒，孕婦甚至有可能發(fā)生胎兒畸形[2]。而染發(fā)劑會引發(fā)癌癥絕非聳人聽聞。長期接觸染發(fā)劑，會使其中一些化學物質同某些細胞結合，引起細胞突變，從而誘發(fā)皮膚癌、膀胱癌、白血病等，其中染發(fā)劑導致白血病的問題更甚[3]。美國明尼蘇達州化妝品基地調查發(fā)現(xiàn)，使用染發(fā)劑的人群，血液病的發(fā)病率明顯高于未使用染發(fā)劑的人群[4]。

本文利用高效液相色譜法對所采集的染發(fā)劑樣品進行分離分析，檢測了不同種類染發(fā)劑中對苯二胺的含量。通過對客觀檢測數(shù)值的分析，為消費者購買使用染發(fā)劑時提供參考。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200 高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；PHS-3E 型pH 計（上海佑科儀器儀表有限公司）；SYU-22-6000T 超聲波清洗器（生元儀器）；FAZ004C 電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）；TD24-WS 離心機（湖南湘儀實驗儀器開發(fā)有限公司）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；SCAA-203 型0.45μm 針式過濾器（上海安譜科學儀器有限公司）。

乙腈（CP 天津賽孚科技有限公司）；三乙醇胺，（A.R. 天津市富宇精細化工有限公司）；H3PO4，（A.R.北京新光化學試劑廠）；對苯二胺標準品（A.R. 天津市光復精細化工研究所）。

1.2 染發(fā)劑樣品處理

染發(fā)劑的品牌多種多樣，顏色的種類繁多，染發(fā)劑的形態(tài)有粉末狀、液體、膏狀，而膏狀染發(fā)劑是使用最多的。本次所采集的染發(fā)劑樣品全部為粘稠的膏狀染發(fā)劑。本實驗所檢測的染發(fā)劑樣品均在不同理發(fā)店采集，共采集染發(fā)劑樣品10 種。精確稱取事先采集好的不同種類的染發(fā)劑樣品0.2g，置于標有10mL 刻度線的離心管中，加入流動相定容至10mL，放入超聲波清洗器中超聲提取20min，使染發(fā)劑樣品充分溶解于加入的流動相中。再放入離心機中，調節(jié)轉速至3500r·min-1，離心分離20min，使不溶物與下清液分離。離心分離后，用1mL 注射器多次吸取離心管下部清液，經(jīng)0.45μm 針式過濾器過濾，所得濾液即為待測樣品溶液。用提前準備好的進樣瓶盛裝待測樣品溶液，并依次為待測樣品溶液編號，放入冰箱保存待測。

1.3 高效液相色譜的分析條件

固定相：C18色譜柱，150mm×4.6mm，5μm；流動相：5%的乙腈三乙醇胺水溶液；柱溫：35℃；流速：1mL·min-1；檢測器：二極管陣列檢測器；檢測波長：280nm；進樣量：10μL。

1.4 對苯二胺標準系列的制備

精確稱取對苯二胺0.030g，置于100mL 容量瓶中，加流動相溶解，定容至100mL，混合均勻，即得到0.30g·L-1的對苯二胺標準儲備液。分別取對苯二胺標準儲備液5、10、15、25mL 于4 個50mL 容量瓶中，依次加入流動相定容至50mL，即得到濃度為0.03、0.06、0.09、0.15、0.30mg·mL-1的對苯二胺標準系列，經(jīng)0.45μm 針式過濾器過濾，分別取適量的不同濃度的對苯二胺標準系列于進樣瓶中，依次編號為1、2、3、4、5，即得到待測的對苯二胺標準系列，放入冰箱保存待測。

1.5 標準曲線

分別取質量濃度依次為0.03、0.06、0.09、0.15、0.30g·L-1的標準系列，稀釋10 倍后各取10μL，依次進入高效液相色譜儀進行測定，通過高效液相色譜儀的分離以及檢測器的檢測，得到對苯二胺的峰高、峰面積、保留時間，以保留時間來定性，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算其回歸方程。

1.6 加標回收率和精密度的測定

精確多次稱取事先采集好的1 號染發(fā)劑樣品0.2g，置于標有10mL 刻度線的離心管中，分別加入低、中、高3 種濃度的標準品溶液，3 種不同的濃度依次為0.03、0.15、0.25g·L-1，定容至10mL，每個不同的濃度6 個平行樣。通過高效液相色譜儀的分離以及檢測器的檢測，分析所得結果經(jīng)計算，得到加標回收率和標準偏差。

2 結果分析

2.1 對苯二胺的標準曲線

將配制好的濃度依次為0.03、0.06、0.09、0.15、0.30g·L-1的標準系列稀釋10 倍后，各取10μL 進入高效液相色譜儀中，得到不同濃度的對苯二胺標準品的色譜圖及其相對應的峰高、峰面積和保留時間，具體數(shù)值見表1。

表1 標準系列色譜圖數(shù)據(jù)Tab.1 Data of standard series chromatogram

由表1 可以看出，對苯二胺標準系列的保留時間在2.223～2.243min 之間。以保留時間來定性，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，建立直角坐標系，將對苯二胺標準系列各濃度對應的峰面積值在所建立的坐標系中標出，得到一系列的點，連接所有的數(shù)值點，得到對苯二胺標準曲線，進而得到其線性回歸方程。對苯二胺標準系列的線性回歸方程為：y=2.9289x+4.5362，線性相關系數(shù)為0.9997。對苯二胺標準曲線見圖1。

圖1 對苯二胺標準曲線Fig.1 Standard curve of para-phenylene diamine

2.2 加標回收率和精密度

按照回收率和精密度的實驗步驟，制備加標樣并進入高效液相色譜儀進行檢測，得到3 個不同濃度的6 個加標樣的色譜峰面積，對照對苯二胺標準曲線，得出每一個加標樣的濃度，計算回收率、平均值及相對標準偏差。加標回收率及相對標準偏差結果見表2。

表2 加標回收率和相對標準偏差Tab.2 Standard addition recovery and relative standard deviation

從表2 可以看出，該方法精密度高，回收效果好，可以得到較好的實驗效果，可用于染發(fā)劑中對苯二胺的日常分離檢測分析，對于提高消費者使用染發(fā)劑時的安全性有非常實際的意義。

2.3 化妝品測定結果

將10 種染發(fā)劑樣品按編號順序依次各取10μL 進入高效液相色譜儀中進行檢測，得到10 種不同種類的染發(fā)劑樣品試劑的色譜圖及其相對應的峰高、峰面積和保留時間。將10 種染發(fā)劑樣品所檢測到的峰面積數(shù)值對照對苯二胺標準曲線中，即得到各個樣品試劑中對苯二胺的濃度。由于試劑檢測時標準系列與染發(fā)劑樣品試劑全部都是稀釋10倍后才進行進樣檢測的，所以在0.2g 染發(fā)劑樣品溶于10mL 流動相后的實際對苯二胺濃度應為所測值的10 倍。得到0.2g 染發(fā)劑樣品中實際的對苯二胺的量后，經(jīng)過計算，得出各種染發(fā)劑中對苯二胺的含量。結果見表3。

表3 樣品檢測結果Tab.3 Test results of samples

從表3 中可以看出，所采集的染發(fā)劑樣品中對苯二胺的量在1.289363～2.801892mg 之間，含量在0.65%～1.50%之間。其中3 號樣品HIDEML 中對苯二胺的含量最少，9 號樣品中含量最多。根據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范（2007 版）》的對苯二胺的限量規(guī)定為6%[5]，說明此次所采集檢測的10 種染發(fā)劑樣品中對苯二胺的含量均未超過相應的限量值，消費者可以放心使用。據(jù)了解，目前市面上的染發(fā)劑品種繁多，一些產(chǎn)品標榜“純中草藥制劑”、“無毒副作用不含染發(fā)劑”、“純天然植物精華,治白發(fā)放心又健康”，均稱能起到快速染發(fā)的功效，被廣大染發(fā)者爭相購買和使用。但由于其質量安全問題，引發(fā)很多投訴，從而更是加大了廣大染發(fā)者的擔憂。故相關專家建議在染發(fā)和使用染發(fā)劑時應注意：染發(fā)劑應選正規(guī)商場或美發(fā)店出售的包裝完好、標識清楚,具備生產(chǎn)許可、衛(wèi)生許可、特殊化妝品批準文號及執(zhí)行產(chǎn)品標準號標識的產(chǎn)品；進口商品應標注進口化妝品衛(wèi)生批準文號、中文產(chǎn)品名稱、制造者名稱、地址及經(jīng)銷商注冊的名稱地址等，拒絕假冒偽劣產(chǎn)品。如果到發(fā)廊染發(fā)應選擇合法、正規(guī)、信譽度好,美發(fā)師具有從業(yè)資格的美發(fā)店。染發(fā)時要防止將染發(fā)劑涂到皮膚上，應先在皮膚上涂一層防護產(chǎn)品。切忌同時使用不同品牌的產(chǎn)品,因為它們之間可能會產(chǎn)生化學反應,生成有毒物質，增大過敏幾率[6]。但致癌的有毒物質對苯二胺作為染發(fā)劑中的著色劑，雖然含量未超過國家的質量標準，卻還會對人體造成傷害，長期使用染發(fā)劑染發(fā)將會更加的嚴重。

［1］楊艷偉,朱英.染發(fā)類化妝品中染發(fā)劑的使用情況分析［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007,17（2）:279-281.

［2］楊兆弘.染發(fā)劑的安全性及監(jiān)管對策［J］.日用化學工業(yè),2012,42（4）:293-297.

［3］周盟.我國染發(fā)劑市場現(xiàn)狀［J］.日用化學品科學,2008,31（9）:6-11.

［4］徐燕英,童建.氧化性染發(fā)劑毒性研究進展［J］.環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學,2004,21（5）:403-404.

［5］中華人民共和國衛(wèi)生部.化妝品衛(wèi)生規(guī)范（2007 版）［M］.2007.

［6］朱會卷,朱英.染發(fā)劑的安全性及其檢測研究進展［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,16（7）:888-890.