王 珅

（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州121000）

綿羊痘（Sheeppox，SP）是由綿羊痘病毒（Sheep poxvirus，SPPV）引起綿羊的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。SPPV 是痘病毒科（Poxviridae），山羊痘病毒屬（Capripoxvirus）的成員，該病毒具有高度的嗜上皮性，可感染不同年齡和不同品種的綿羊，其中以羔羊最為敏感，感染后引起皮膚和黏膜發(fā)生增生性病變，臨床上以在感染羊唇、乳房、會(huì)陰、尾根以及皮膚無毛少毛處發(fā)生丘疹、痘疹和膿皰為特征，若無繼發(fā)感染，綿羊痘引起的死亡率一般在10%～20%之間。目前，該病廣泛流行于世界各養(yǎng)羊國(guó)家，該病在我國(guó)內(nèi)蒙古、遼寧、吉林和黑龍江等多個(gè)養(yǎng)羊業(yè)發(fā)達(dá)的省市都有該病發(fā)生和流行的報(bào)道。給養(yǎng)羊業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1 發(fā)病情況

2014 年9 月遼寧省一養(yǎng)殖戶從外地新購入小尾寒羊54 只。羊到場(chǎng)后由于更換飼料飼草，以及飼養(yǎng)環(huán)境的變化，大多數(shù)羊出現(xiàn)食欲不振，挑食。每天下午出去放牧2～3 h，1 周后陸續(xù)有5～6 只羊發(fā)病，后發(fā)展到21 只羊發(fā)病，2 周后出現(xiàn)死亡病例，在發(fā)病期間新生羔羊5 只，最后統(tǒng)計(jì)總發(fā)病21 只，死亡11 只。

2 臨床癥狀

發(fā)病時(shí)出現(xiàn)咳嗽、眼瞼發(fā)紅以及發(fā)熱癥狀，最高體溫達(dá)41.5 ℃，不吃草，離群呆立，之后1～2 d，病羊出現(xiàn)口腔和皮膚病變，最初是在局部皮膚出現(xiàn)紅斑，紅斑大小如黃豆粒到指甲蓋大小，1～2 d 后，紅斑變?yōu)榍鹫钔怀鲇谄つw表面，隨后丘疹逐漸增大，變?yōu)榛野咨虻t色的隆起結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)大的直徑可以達(dá)到4 cm 左右，結(jié)節(jié)在幾天之內(nèi)轉(zhuǎn)變成典型的水皰，水皰初為透明液體，后變?yōu)槟撔砸后w，形成膿皰，最后破潰結(jié)痂。出現(xiàn)皮膚損害的部位多是腹股溝、腋下和會(huì)陰等皮膚無毛或少毛部位?？谇徊∽兠黠@，在齒齦和上下腭均可形成水皰，口腔及嘴唇腫脹，流涎嚴(yán)重，病羊眼瞼腫脹、流淚、角膜發(fā)炎、失明；流鼻涕，咳嗽，呼吸困難，最終衰竭而死。癥狀輕微的羊不影響食欲和食量，只是偶爾咳嗽、尾根和腿內(nèi)側(cè)有少量痘疹，在少量水皰破潰后康復(fù)。

3 剖檢變化

剖檢病死羊4 只，可見咽喉、氣管、食道等部位有大小不等的圓形或半球形結(jié)節(jié)；肺充血、水腫,整個(gè)肺部分布大量灰白色的結(jié)節(jié)性病變，結(jié)節(jié)質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，切面灰白色，肝臟有壞死灶；真胃、瘤胃表面有許多大小不一的結(jié)節(jié)，個(gè)別病例見有糜爛或潰瘍病變，小腸空虛，結(jié)腸腸壁變薄，黏膜脫落。

4 病原檢查

4.1 細(xì)菌分離培養(yǎng) 無菌采集病死羊的血液、肝臟、脾臟以及皮膚痘疹做病料觸片和涂片，并進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)，經(jīng)革蘭染色和美藍(lán)染色鏡檢。未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染。

4.2 PCR檢測(cè) 參照相關(guān)文獻(xiàn)[1]針對(duì)綿羊痘病毒P32基因設(shè)計(jì)1 對(duì)特異性引物，引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，預(yù)期擴(kuò)增的目的片段為1 045 bp。結(jié)果利用綿羊痘病毒RNA pol 基因序列設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，擴(kuò)增出與預(yù)期片段大小一致的條帶，大小為1 045 bp，見圖1，凝膠回收，克隆測(cè)序，經(jīng)同源性分析，與AY077834 同源性為97.4%，測(cè)序結(jié)果見圖2。

圖1 S PPV PC R 電泳

5 診斷

根據(jù)小羊發(fā)病率高并且死亡率高，以及呼吸道癥狀為主，口腔、皮膚較薄處出現(xiàn)痘疹做出初步診斷，最終通過PCR 檢測(cè)確診，并排出細(xì)菌混合感染。

6 病原分離

將采集到的病羊的肺部痘疹組織痂皮剪碎，制作病毒懸液，將其接種于生長(zhǎng)良好的原代胎羊腎細(xì)胞，從病羊肺組織中分離獲得1 株綿羊痘病毒。收集細(xì)胞病變液，反復(fù)凍融3 次后使用差速離心法對(duì)病毒進(jìn)行純化。

7 討論

7.1 關(guān)于發(fā)病原因的分析 此次羊群發(fā)病原因主要有以下幾點(diǎn)：第一是引進(jìn)動(dòng)物只做了綿羊痘的臨床基本檢查，并沒有作特異性的ELISA 檢測(cè)和PCR 檢測(cè)；第二是引進(jìn)動(dòng)物沒有嚴(yán)格隔離，進(jìn)場(chǎng)的第2 天就出去放牧；第3 是飼養(yǎng)場(chǎng)周邊可能存在綿羊痘的傳染源。