張旭，李樹綱，張蕾，巨福星

(甘肅省獸藥飼料監(jiān)察所， 蘭州 730030)

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催情散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張旭，李樹綱，張蕾，巨福星*

(甘肅省獸藥飼料監(jiān)察所， 蘭州 730030)

為提高和完善催情散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加了方中君藥淫羊藿的薄層鑒別方法，并采用HPLC法測(cè)定淫羊藿苷含量。薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾。淫羊藿苷對(duì)照品濃度在0.0510～0.2550 mg/mL (r=0.9992，n=5)范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率為99.24%，RSD為0.29%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、精密度高，可作為催情散的質(zhì)量控制方法。

催情散；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層鑒別；含量測(cè)定；高效液相色譜

催情散收載于《中華人民共和國(guó)獸藥典》2010年版二部，由淫羊藿、陽(yáng)起石(酒淬)、當(dāng)歸、香附、益母草、菟絲子六味中藥加工制成的中獸藥散劑[1]。具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、催情促孕的功效，臨床常用于母豬不發(fā)情，家畜勞傷乏情等癥[2]，研究表明能增強(qiáng)種公畜性機(jī)能和精子活力，顯著提高配種質(zhì)量[3]。且成本較低，使用方便，經(jīng)濟(jì)效益可觀，具有很好的推廣和應(yīng)用前景。目前催情散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為簡(jiǎn)單，僅有各藥味的顯微鑒別，無(wú)有效成分的薄層鑒別項(xiàng)和含量測(cè)定項(xiàng)，因此現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)已不能有效控制目前市場(chǎng)上催情散的質(zhì)量。為了更好的控制藥品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，增加了淫羊藿的薄層鑒別，并采用 HPLC法測(cè)定了淫羊藿苷的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，均符合有關(guān)規(guī)定，為進(jìn)一步完善催情散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜，配DAD檢測(cè)器， METTLER AE240電子天平，BX8200HP超聲波清洗器；硅膠H板(青島海洋化工有限公司)。

1.2 試劑與藥材 淫羊藿對(duì)照藥材(121632-201101)、淫羊藿苷對(duì)照品(110737-200415)，中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；催情散(批號(hào)：150610、150616、150623)，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院中獸醫(yī)研究所藥廠提供；陰性樣品(自制)。乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法及結(jié)果

2.1 淫羊藿的薄層鑒別 取催情散粉末3.2 g，加乙醇20 mL，溫浸超聲15 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿對(duì)照藥材0.4 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取缺淫羊藿的陰性對(duì)照樣品，同供試品方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上， 以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈下(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾(圖1)。

1．陰性對(duì)照溶液；2．淫羊藿苷對(duì)照品；3．淫羊藿對(duì)照藥材；4．供試品(批號(hào)150610)；5．供試品(批號(hào)150616)；6．供試品(批號(hào)150623)圖1 催情散中淫羊藿的薄層鑒別圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取上述儲(chǔ)備溶液3 mL置10 mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取催情散1.6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，稱定重量，超聲處理1 h，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取缺淫羊藿陰性對(duì)照樣品同法制備得陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 色譜條件 選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4.6 mm × 150 mm, 5 μm)；以乙腈-水(30∶70)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣10 μL，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

2.2.5 專屬性考察 分別取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液，在2.2.4色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果見圖2～圖4。供試品色譜中，呈現(xiàn)與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰。陰性樣品色譜中，未呈現(xiàn)與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相同的色譜峰，試驗(yàn)結(jié)果表明陰性樣品無(wú)干擾，該方法具有專屬性。

圖2 陰性對(duì)照溶液色譜圖

圖3 供試品溶液色譜圖

圖4 淫羊藿苷對(duì)照品溶液(0.1530 mg/mL)色譜圖

2.2.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、3、10、5 mL分別置10、10、10、25、10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得各濃度對(duì)照品溶液。按2.2.4項(xiàng)色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)(x)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=14378x-13.1，r=0.9992，結(jié)果表明淫羊藿苷對(duì)照品濃度在0.0510～0.2550 mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為0.1530 mg/mL的對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄淫羊藿苷峰面積，RSD為0.77%，結(jié)果表明方法的精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一催情散樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，按2.2.4項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，記錄淫羊藿苷峰面積，RSD為0.80%。結(jié)果表明本法測(cè)定淫羊藿苷含量的重復(fù)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一催情散樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。分別在0、1、2、4、6、8、10、12 h按2.2.4項(xiàng)色譜條件分別進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算RSD為0.92%，表明催情散供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的催情散樣品1.6 g，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(0.510 mg/mL)3.0 mL，按2.2.2項(xiàng)下方法處理后，測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1?？梢钥闯觯咔樯⒌奶砑悠骄厥章蕿?9.24%，表明該方法回收率較好，準(zhǔn)確度高。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.1.11 樣品含量測(cè)定 取3批樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。按2.2.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積值，依照標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品中淫羊藿苷含量，結(jié)果見表2。批號(hào)為150610、150616、150623的三批催情散中淫羊藿苷的含量為0.9 mg/g。

表2 含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

方中淫羊藿和陽(yáng)起石補(bǔ)腎壯陽(yáng)，為君藥。淫羊藿系小檗科植物淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿或朝鮮淫羊藿的干燥葉。在我國(guó)分布較為廣泛，是補(bǔ)腎壯陽(yáng)的常用藥物。淫羊藿中主要有效活性成分是多糖和黃酮類化合物，而淫羊藿苷在總黃酮中含量最為豐富，可增強(qiáng)性腺功能，具有“壯陽(yáng)”[4]以及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的功效[5]。為了更有效控制催情散的質(zhì)量，本研究在鑒別中增加淫羊藿的薄層色譜法，采用高效液相色譜法對(duì)該方中的淫羊藿苷進(jìn)行定量測(cè)定。

淫羊藿的TLC鑒別中，實(shí)驗(yàn)條件、展開系統(tǒng)參照《中國(guó)獸藥典》“淫羊藿”鑒別(2)項(xiàng)下薄層鑒別方法[1]，經(jīng)多次試驗(yàn)表明，“溫浸超聲”的提取效果較“溫浸”提取的效果好，且節(jié)省時(shí)間，超聲5 min、10 min、15 min、20 min，考察超聲時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，結(jié)果表明，超聲15 min后淫羊藿苷已提取基本完全，為了保證淫羊藿苷提取率并結(jié)合工作效率，綜合選擇超聲處理時(shí)間為15 min。

陰性對(duì)照樣品色譜中，在與淫羊藿苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有較淺的不同顏色的斑點(diǎn)(圖1)，考慮陰性樣品有其他成分的干擾；供試品色譜中，在與淫羊藿對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，專屬性強(qiáng)。故淫羊藿的TLC鑒別中，只采用淫羊藿藥材對(duì)照，未采用淫羊藿苷對(duì)照。

采用 DAD 在 200～400 nm 進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，淫羊藿苷對(duì)照品在270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故采用270 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。分別用25∶75、30∶70、35∶65比例的乙腈-水系統(tǒng)進(jìn)行了方法考察，當(dāng)流動(dòng)相為乙腈-水(30∶70)時(shí)最佳，使得樣品中淫羊藿苷與其他組分的分離效果最好，且保留時(shí)間適宜。

經(jīng)測(cè)定，該3批樣品的淫羊藿苷含量為0.9 mg/g。淫羊藿相關(guān)的報(bào)道和文獻(xiàn)很多，不同的產(chǎn)地、不同的品種含量不盡相同，即使相同產(chǎn)地其含量也有一定的差別[6-7]，故需收集大量樣品進(jìn)行試驗(yàn)，才能制定合理的含量限度。

[1] 中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典二〇一〇年版(二部)[S].

[2] 中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典獸藥使用指南中藥卷二〇一〇年版(中藥卷)[S].

[3] 孔偉，李剛，馬致遠(yuǎn)，等.催情散治療種公牛性欲降低的效果觀察[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2014,8: 7.

[4] 張森，譚建華，伊鵬霏，等.淫羊藿苷對(duì)生殖系統(tǒng)影響研究進(jìn)展 [J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2011,30(3): 76-77.

[5] 劉雪琴，何燕.淫羊藿苷藥理作用研究進(jìn)展 [J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2012, 19 (4) : 379-380, 382.

[6] 史萬(wàn)忠, 徐德生，劉力，等.30批市售淫羊藿的質(zhì)量分析 [J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006, 12 (7): 6-7.

[7] 徐玲玲，黃禮杰，顧國(guó)獻(xiàn).不同產(chǎn)地和品種淫羊藿品種中活性黃酮類成分分析及資源研究[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010, 41(2): 146-150.

(編輯：李文平)

Studies on Quality Standard of Cuiqing San

ZHANG Xu, LI Shu-gang, ZHANG Lei, JU Fu-xing*

(GansuInstituteofVeterinaryDrugandFeedInspection,Lanzhou730030,China)

To improve quality standard for Cuiqing San，Herba Epimedii was identified by TLC, which is the Monarch Drug of Cuiqing San, and icariin was determined by HPLC.The TLC spots of these traditional Chinese medicinal materials were fairly clear and the blank test showed no interference.The linear ranges were 0.0510～0.2250 mg/mL for icariin (r=0.9992,n=5).The average recoveries rates were 99.24% withRSD0.29%.The methods are available with a good reproducibility and can control the quality of Cuiqing San effectively.

Cuiqing San；Quality Standard；TLC； Determination；HPLC

張旭，從事獸藥檢測(cè)工作。E-mail: wwwzx0099@126.com

2015-09-10

A

1002-1280 (2015) 11-0038-04

S853.76