侯亞平 沈莉 張金彩 張燕

添加不同量PAS-ⅢM對單采血小板質量的影響

侯亞平 沈莉 張金彩 張燕

目的 研究單采血小板添加不同濃度的PAS-ⅢM液后在保存期間對血小板功能的影響變化，探究更適合單采血小板保存的PAS-ⅢM液的濃度。方法 將40個治療量的單采血小板分成4組，分別添加不同濃度PAS-ⅢM液的單采血小板，對各組在保存期的第1、3、5、7、10天分別進行pH值、HSR、凝血酶聚集率、CD62p陽性率的測定。結果 添加PAS-ⅢM液濃度為70%的單采血小板在單采血小板保存的第10天，pH值、HSR、凝血酶聚集率、CD62p陽性率等各項指標均優(yōu)于添加PAS-ⅢM液濃度為90%、50%以及未添加PAS-ⅢM液的單采血小板。結論 添加PAS-ⅢM液濃度為70%的單采血小板有效的保存了血小板的功能，延長了單采血小板的保存期。

單采血小板;PAS-ⅢM;HSR;CD62p

通常單采血小板是用血漿作為懸浮介質保存的，保存時間為5 d左右，國外近年來研制了多種不同的血小板添加液，以延長血小板保存時間。不同的血小板保存液，不同的血漿濃度，對血小板的質量影響也不同。本實驗是去除不等量的血漿，添加不等量的PAS-ⅢM單采血小板添加液，在22℃保存，以觀察體外單采血小板的質量指標變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機抽取符合《獻血者健康檢查要求》的獻血者捐獻的單采血小板。

1.2 設備與試劑 MCS+血細胞分離機(美國血液技術公司)，血細胞計數儀(SYSMEX有限公司)，無菌導管接口機(日本制造)，血小板振蕩儀(蘇州)，FACS流式細胞儀(美國BD公司)，血小板凝聚儀(北京普利生集團)，血小板聚集誘導劑，PAS-ⅢM聯袋(山東威高醫(yī)用高分子生物制品有限公司)，995E耗材(美國血液技術公司)，離心機(德國JouanKR41)。

1.3 方法 根據《獻血者健康檢查要求》對單采成分獻血者進行初篩檢測，合格后隨機抽取符合采集單采血小板要求的獻血者40人，用MCS+血細胞分離機采集單采血小板1個治療量，采集過程均順利，獻血者沒有出現獻血反應并且血細胞分離機未出現異常報警等情況。經質量檢測，采集后每位獻血者捐獻的單采血小板產品質量(血小板含量，白細胞，紅細胞殘留量及容量)均符合《全血及成分血質量要求》。將40人份的單采血小板隨機分成4組，每組10份，將其中1組單采血小板作為對照組，放入血小板振蕩儀中22℃振蕩保存。隨機將另外3組經離心分別移除占單采血小板總量的90%、70%、50%的血漿后，通過無菌導管接口機連接PAS-ⅢM聯袋，通過密閉管道分別加入與移除血漿容量相等的的 PAS-ⅢM液，分別制備成含90%、70%、50%濃度PAS-ⅢM的單采血小板，再將含不同濃度PAS-ⅢM的單采血小板各10份放入血小板振蕩儀中振蕩保存。將制備成不同PAS-ⅢM濃度的單采血小板和未移除血漿的單采血小板對照組分別進行以下實驗:(1)用ISTAT CG4+血氣儀在第1、3、5、7、10天分別測定pH值。(2)用分光光度計在第1、3、5、7、10天分別測定HSR。(3)用血小板聚集儀在第1、3、5、7、10 天分別測定凝血酶聚集率。(4)用流式細胞儀在第 1、3、5、7、10 天分別檢測血小板 CD62p陽性率。

2 結果

2.1 pH值比較 正常單采血小板的pH值應在6.4～7.4，4組單采血小板在實驗的第1～5天，pH值沒有明顯的差異。PAS-ⅢM濃度為70%和PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板，在第10天時pH值仍在血小板保存的正常范圍內，但是PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板pH值低于PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板。PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板在第10天的pH值接近未添加PAS-ⅢM的單采血小板對照組在第5天pH值，PAS-ⅢM濃度為50%的單采血小板和未添加PAS-ⅢM的單采血小板對照組在10天pH值都低于正常值低限，并且未添加PAS-ⅢM的單采血小板對照組在7 d～10 d pH值下降非?？?。見表1。

表1 pH值比較

2.2 HSR比較 在實驗的第1天，4組單采血小板HSR實驗均沒有明顯差異，在實驗的第3天，PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板，和其他3組對比，有明顯差異。PAS-ⅢM濃度為50%的單采血小板在第5天HSR值明顯下降，未添加PAS-ⅢM的對照組在第7天-第10天HSR恢復率明顯下降。PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板在第1、3、5、10天HSR值沒有明顯差異。其他3組在第10天HSR值和第1天相比顯著減少。見表2。

表2 HSR比較 %

2.3 凝血酶聚集率比較 PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板和對照組的凝血酶聚集率在第5天就出現明顯下降，第7～10天略有下降;PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板凝血酶聚集率在1、3、5、7、10天均沒有明顯下降，經統(tǒng)計學分析，沒有明顯差異。PAS-ⅢM濃度為50%的單采血小板凝血酶聚集率在第7天出現明顯下降。見表3。

表3 凝血酶聚集率比較 %

2.4 血小板CD62p陽性率的比較 PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板從第1天到第10天血小板CD62p陽性率有所升高，但經統(tǒng)計學分析沒有明顯差異。PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板血小板CD62p陽性率在第3天就明顯升高，和第1天有明顯差異;對照組血小板CD62p陽性率在第7天明顯升高，和第1天有明顯差異。見表4。

表4 血小板CD62p陽性率比較 %

3 討論

3.1 PAS-ⅢM中的醋酸鹽主要以三羧酸循環(huán)的方式代謝［1］，最終代謝產物CO2能夠從保存袋內排出，減少了碳酸氫鹽的消耗，保證了單采血小板pH值維持正常范圍，PAS-ⅢM中的磷酸鹽能維持血小板的中性pH值。未添加PAS-ⅢM的單采血小板對照組，是完全以血漿作為血小板的懸浮介質，血漿中的葡萄糖主要以糖酵解的方式代謝，而代謝終產物乳酸鹽和氫離子不能排出，隨著時間的延長，產生的乳酸鹽和氫離子等代謝產物增多，pH值急劇下降，血小板的功能活性也減低，達不到正常范圍。

3.2 血小板在低滲環(huán)境中使自身體積縮小的機制和其他動物細胞一樣，通過產生一系列信息傳導和生化反應，降低血小板內部離子的濃度以維持血小板內體積，血小板內的這個反應依靠ATP來完成，而ATP來源于PAS-ⅢM中醋酸鹽的氧化［2］。HSR實驗是檢測單采血小板的抗低滲休克能力。即HSR恢復率越高，血小板的形態(tài)和體積越接近正常，血小板的功能就越好［3］。

3.3 凝血酶誘導的聚集反應即凝血酶聚集率，血小板CD62p是血小板活化的重要指標，PAS-ⅢM中含有鎂離子和鉀離子，鎂離子通過改變膜流體性或通過形成環(huán)腺苷酸抑制血小板在受到刺激時發(fā)生聚集，鉀離子和鎂離子聯合應用能夠減少血小板的活化，由此表明，PAS-ⅢM能夠減少血小板活化。但是CD62p的水平不能單獨作為血小板生存力和輸注效果的唯一指標。

3.4 實驗表明，PAS-ⅢM和血漿混合保存單采血小板較好地保持了血小板膜的完整性和維護血小板正常體積所需要的能量代謝，較好地保持了血小板的功能。而PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板更有效的保持了血小板的特性［3，4］。國外有文獻報道，PAS-ⅢM 保存血小板在體外維持血小板質量至少有30%的血漿［5］。BEST Collaborative剩余血漿被從30%降低到20%對血小板的功能有損害［6］。

3.5 溫度對單采血小板的保存非常重要，本實驗是在正常22℃條件下進行的，4℃和22℃添加PAS-ⅢM液的單采血小板在血小板的功能，形態(tài)上會有明顯的差異。國外有報道表明，添加PAS-ⅢM液后冷藏和冷凍單采血小板可以提高血小板的功能，提高出血病人的止血效果，同時減少發(fā)熱、膿毒血癥、過敏等輸血反應的風險［7］。對于添加不同濃度的PAS-ⅢM液的單采血小板也有不同的影響，由于條件限制，還應該進一步進行血小板功能方面的其他實驗。

1 孫曉紅，常纓，李雅靜，等.血小板保養(yǎng)液洗滌血小板的低滲休克反應試驗.河北醫(yī)藥，2008，30:1424-1425.

2 鄔旭群，熊文，鮑自謙，等.血小板低滲休克反應檢測方法的建立及應用.現代檢驗醫(yī)學雜志 ，2006，21:6-8.

3 趙鳳綿，孫曉紅，張愛紅，等.采用HSR方法測定手工匯集濃縮血小板在不同保存溫度下的保存效果.中國輸血雜志，2008，21:116-118.

3 Gulliksson H，Aubuchon JP，Vesterinen M，et al.Storage of platelets in additive solutions:a pilot in vitro study of the effects of potassium and magnesium.Vox Sang，2002，82:131-136.

4 Ringwald J，Walz S，Zimmermann R，et al.Hyperconcentrated platelets stored in additive solutions:aspects on productivity and in vitro quality.Vox Sang，2005，89:11-18.

5 Klinger MH，Josch M，Klter H.Platelets stored in a glucose-free additive solution or in autologous plasma-an ultrastructural and morphometric evaluation.Vox Sang，1996，71:13-20.

6 Gulliksson H，Aubuchon JP，Cardigan R，et al.Storage of platelets in additive solutions:a multicentre study of the in vitro effects of potassium and magnesium.Vox Sang，2003，85:199-205.

7 Capocelli KE，Dumont LJ.Novel platelet storage conditions:additive solutions，gas，and cold.Curr Opin Hematol，2014，21:491-496.

R 446.11

A

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050071 石家莊市，河北省血液中心

2015-04-12)