沈繼春，張愛民，劉冀琴，劉曉梅

(武裝警察部隊后勤學院附屬醫(yī)院 a.血液科，b.檢驗科，天津 300162)

?

老年巨幼細胞性貧血患者同型半胱氨酸與T淋巴細胞亞群的相關性研究

沈繼春a※，張愛民b，劉冀琴b，劉曉梅b

(武裝警察部隊后勤學院附屬醫(yī)院 a.血液科，b.檢驗科，天津 300162)

目的 探討老年巨幼細胞性貧血(MA)患者血清同型半胱氨酸(Hcy)水平與T淋巴細胞亞群的相關性。方法 選取2012年1月至2014年12月武裝警察部隊后勤學院附屬醫(yī)院收治的MA患者150例，根據血紅蛋白(Hb)水平分為輕度貧血組(73例，90 g/L≤Hb<110 g/L)和中度貧血組(77例，60 g/L≤Hb<90 g/L)。選擇同期健康體檢者150例作為對照組。檢測各組受試者Hb、Hcy、維生素B12、葉酸的水平以及CD3+T、輔助性T細胞(Th)、抑制性T細胞(Ts)比例和Th/Ts比值。結果 輕度貧血組和中度貧血組的Hcy水平[(19.4±2.6) μmol/L和(29.3±6.9) μmol/L]與對照組[(9.6±5.3) μmol/L]相比，顯著升高(P<0.05)，而Hb、維生素B12、葉酸水平顯著降低(P<0.05)。與輕度貧血組相比中度貧血組變化幅度較大(P<0.05)。MA組的CD3+T[(59.2±2.6)%]、Ts[(16.9±2.8)%]與對照組[(67.2±3.7)%、(23.4±3.0)%]相比，其比例顯著降低(P<0.01)，而Th、Th/Ts顯著升高(P<0.01)。MA組患者Hcy與維生素B12和葉酸均呈負相關(r=-0.402，-0.437，P<0.05)；Hcy與CD3+T、Ts比例呈負相關(r=-0.610，-0.514，P<0.05)，而與Th比例及Th/Ts呈正相關(r=0.479，0.515，P<0.05)。結論 老年MA患者血清中高Hcy與機體免疫功能異常具有相關性，并可作為臨床診斷及評估病情的一項參考指標。

巨幼細胞性貧血；同型半胱氨酸；T淋巴細胞亞群

巨幼細胞性貧血(megaloblastic anemia,MA)是由于葉酸和(或)維生素B12缺乏而影響細胞內DNA的代謝，骨髓中出現幼稚紅細胞，伴巨幼樣變，發(fā)生髓內溶血引起的一種良性貧血，多見于老年人。葉酸是同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)代謝的重要一碳單位供體，維生素B12又是Hcy代謝的重要輔酶，兩者的缺乏會引起體內Hcy的堆積，進而產生一系列損傷，并影響機體的免疫功能。而T淋巴細胞亞群[包括輔助性T細胞(helper T cell，Th細胞或CD4+T細胞)和抑制性T細胞(suppressor T cell，Ts細胞或CD8+T細胞)]在體液免疫及細胞免疫中均發(fā)揮重要作用。因此，本研究主要探討老年MA患者Hcy及T淋巴細胞亞群的改變，并研究兩者的相關性，為臨床MA的診斷及病情評估提供參考依據，進而為老年MA的治療提供臨床證據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2014年12月武裝警察部隊后勤學院附屬醫(yī)院收治的MA患者150例(MA組)，其中男79例、女71例，年齡61～79歲，中位年齡70歲。上述患者根據血紅蛋白(hemoglobin，Hb)水平分為輕度貧血組73例(90 g/L≤Hb<110 g/L)和中度貧血組77例(60 g/L≤Hb<90 g/L)。其中，輕度貧血組73例，男39例、女34例，年齡61～68歲，中位年齡72歲；中度貧血組77例，男40例、女37例，年齡67～79歲，中位年齡74歲。上述病例的診斷均符合《血液病診斷及療效標準》[1]。選擇同期健康體檢者150例作為對照組，其中男75例、女75例，年齡60～77歲，中位年齡68歲。排除標準：心腦血管疾病及嚴重肝腎功能障礙的患者，且至少1個月內服用葉酸、維生素B12及可能影響葉酸、維生素B12吸收藥物的患者。各組受試者的性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究受試者均簽署知情同意書，并由醫(yī)院倫理委員會批準實施。

1.2 方法 分別檢測 Hb、血清Hcy、維生素B12、葉酸的水平，以及CD3+T、Th、Ts細胞比例和Th/Ts比值。

1.2.1 Hb水平的檢測 采集空腹靜脈血2 mL置于乙二胺四乙酸抗凝管中，采用日本Sysmex-XE-2000檢測。

1.2.2 Hcy、維生素B12、葉酸的檢測 采集空腹靜脈血2 mL，離心半徑10 cm，3000 r/mim離心5 min，取血清，并于2 h 內檢測。采用美國雅培ARCHITECTI4000全自動免疫分析儀及其配套試劑盒，所有操作均嚴格按照操作說明書執(zhí)行。

1.2.3 T細胞亞群的檢測 采集空腹靜脈血2 mL置于乙二胺四乙酸抗凝管中，取25 μL樣本與5 μL光孵育30 min后，加入1 mL稀釋后的破紅液混勻，避光靜置8 min，離心半徑10 cm，1200 r/min離心5 min，棄上清，加入300 μL磷酸緩沖液充分混勻后，采用美國BD公司FACSCan to Ⅱ全自動流式細胞分析儀進行檢測，所有操作嚴格按照操作說明書執(zhí)行。

2 結 果

2.1 各組受試者Hb、Hcy、維生素B12及葉酸水平的比較 與對照組相比，輕度貧血組和中度貧血組Hcy水平顯著升高(P<0.05)，而Hb、維生素B12、葉酸水平顯著降低(P<0.05)；與輕度貧血組相比，中度貧血組Hcy顯著升高(P<0.05)，血Hb、維生素B12、葉酸水平顯著降低(P<0.05)。見表1。

組別例數Hb(g/L)Hcy(μmol/L)維生素B12(ng/L)葉酸(μg/L)對照組 150127±109.6±5.3439±3015.3±4.3輕度貧血組7394±4a19.4±2.6a167±22a5.6±1.8a中度貧血組7774±5ab29.3±6.9ab100±28ab2.9±1.0abF30.54101.16454.78112.19P0.0000.0000.0000.000

Hb:血紅蛋白；Hcy:同型半胱氨酸；對照組：健康體檢者；a與對照組比較，P<0.05；b與輕度貧血組比較，P<0.05

2.2 MA組患者Hcy與維生素B12和葉酸水平的相關性分析 Hcy與維生素B12和葉酸水平均呈負相關(r=-0.402，-0.437，P<0.05)。

2.3 MA組和對照組T淋巴細胞亞群測定值的比較 與對照組相比，MA組CD3+T細胞比例、Ts比例顯著降低(P<0.01)，而Th比例、Th/Ts顯著升高(P<0.01)，見表2。

組別例數CD3+(%)Th(%)Ts(%)Th/TsMA組15059.2±2.647±316.9±2.84.26±2.40對照組15067.2±3.732±323.4±3.01.92±0.11t21.56040.62019.52111.929P0.0000.0000.0000.000

MA：巨幼細胞性貧血；Th:輔助性T細胞；Ts:抑制性T細胞；對照組：健康體檢者

2.4 MA組患者Hcy與T淋巴細胞亞群的相關性分析 Hcy與CD3+T細胞比例、Ts比例呈負相關(r=-0.610，-0.514，P<0.05)，而與Th比例及Th/Ts呈正相關(r=0.479，0.515，P<0.05)。

3 討 論

隨著老齡化社會的來臨，帶病生存的老年患者逐漸增多，巨幼細胞性貧血的發(fā)病率也逐年上升。老年人由于飲食習慣或胃腸道功能降低，致使葉酸和維生素B12攝入不足或吸收障礙，往往容易出現MA。本研究結果顯示，與對照組相比，輕度貧血組和中度貧血組維生素B12、葉酸水平均降低(P<0.05)；與輕度貧血組相比，中度貧血組維生素B12、葉酸水平顯著降低(P<0.05)。另外，MA患者除有貧血、消化道癥狀及神經系統(tǒng)癥狀外，還可能存在免疫功能異常，從而引起相關疾病的發(fā)生。人體正常的免疫系統(tǒng)依賴于各種免疫細胞的協(xié)調穩(wěn)定，T淋巴細胞既是體液免疫的主要細胞，又可以介導并調節(jié)體液免疫。T淋巴細胞均特異性表達CD3分子，其中，Th細胞可以輔助并誘導其他免疫相關細胞發(fā)揮相應的功能，也可引起遲發(fā)型超敏反應；而Ts細胞則以直接或間接的方式殺滅表達特異性抗原的Th細胞、B細胞和腫瘤細胞，還可分泌多種細胞因子抑制免疫反應。Th/Ts 一般相對穩(wěn)定，可以反映人體細胞免疫狀態(tài)，若兩者數目或Th/Ts 比值發(fā)生改變，機體免疫功能也可能發(fā)生變化[2]。近年來，研究發(fā)現很多血液疾病伴隨T淋巴細胞的異常。Nakamura等[3]研究發(fā)現，骨髓增生異常綜合征患者存在免疫功能的異常，主要表現為T淋巴細胞過度活化，其中以Th細胞異常為主。Erkurt等[4]發(fā)現，維生素B12缺乏患者體內的Th、Ts細胞均降低，而Ts細胞降低更顯著，Th/Ts比值增高，自然殺傷細胞功能受抑制。有研究發(fā)現，MA患者免疫功能異常，表現為Ts細胞顯著降低，Th/Ts比例顯著升高[5]。本研究結果顯示，與對照組相比，MA組CD3+T細胞比例、Ts比例顯著降低(P<0.01)，而Th比例、Th/Ts顯著升高(P<0.01)。因機體的免疫反應有眾多免疫細胞及細胞因子的參與，且處在動態(tài)平衡中，T淋巴細胞的改變可能影響整體的免疫功能，所以MA患者T淋巴細胞亞群發(fā)生變化，可能存在免疫功能的紊亂，而此病理過程是否有其他因素的作用尚有待研究。

Hcy為甲硫氨酸循環(huán)的一個中間代謝產物，而葉酸和維生素B12是Hcy再甲基化的一碳單位供體和輔酶。因此，葉酸和(或)維生素B12的缺乏會導致Hcy代謝障礙。本研究也驗證了Hcy與維生素B12和葉酸呈負相關(P<0.05)。且MA患者血清Hcy較對照組顯著升高，中度貧血組升高更顯著，提示血清Hcy可作為評估MA患者貧血程度的參考指標。目前，高Hcy已被證實是心腦血管疾病的危險因素[6-7]，它參與氧化應激、內質網應激及炎癥反應[8]等諸多方面。近年來研究發(fā)現[9-10]，在高血壓、惡性腫瘤等許多疾病中，Hcy與免疫功能的異常有相關性。本研究亦證實，在MA患者中Hcy與CD3+T細胞比例、Ts比例呈負相關(P<0.05)，而與Th比例、Th/Ts呈正相關(P<0.05)。這種相關性可能與Hcy激活核因子κB，引起單核細胞趨化蛋白1[11]、腫瘤壞死因子α、白細胞介素6、白細胞介素1β、白細胞介素8等炎性因子的釋放，造成DNA損傷及影響細胞周期[12]等有關。而具體Hcy如何激活或抑制淋巴細胞的變化及其內部的信號轉導通路有待基礎科學的進一步研究。

綜上所述，與對照組相比，MA患者Hcy明顯升高，而維生素B12、葉酸水平明顯下降，且中度貧血MA患者與輕度貧血MA患者相比，變化幅度大，提示Hcy可作為評價MA及其貧血程度的參考指標。同時，MA患者存在細胞免疫功能的異常，而Hcy與T淋巴細胞亞群的變化具有相關性。因此，降低血清Hcy水平可能改善MA患者的免疫功能，進而改善患者的預后。

[1] 張之南,沈悌.血液病診斷及療效標準[S].北京:科學出版社,2007:12-16.

[2] Yasutomo K.The cellular and molecular mechanism of CD4/CD8lineage commitment [J].J Med Invest,2002，49(1/2):1-6.

[3] Nakamura Y,Yasuoka H,Tsujimoto M,etal.Importance of lymph vessels in gastric cancer:8 prognostic indicator in general and a predictor for lymph node metastasis in early stage cancer[J].J Clin Pathol,2006,59(1):77-82.

[4] Erkurt MA,Aydogdu I,DikilitaM,etal.Effects of cyanocobalamin on immunity in patients with pernicious anemia[J].Med Princ Pract,2008,17(2):131-135.

[5] Gogos CA,Kapatais-Zoumbos KN,Zoumbos NC.Lymphocyte subpopulations in megaloblastic anaemia due to vitamin B12deficiency[J].Scand J Haematol,1986,37(4):316-318.

[6] Eikelboom JW,Hankey GJ,Anard SS,etal.Association between high homocysteine and ischemic stroke due to large-and small-artery disease but not other etiologic subtype of ischemic stroke[J].Stroke,2000,31(5):1069-1075.

[7] Fowler B.Homocystein-an independent risk factor for cardiovascular and thrombotic diseases[J].Ther Umsch,2005,62(9):641-

646.

[8] Au-Yeung KK,Woo CW,Sung FL,etal.Hyperhomocysteinemia activates nuclear factor-kappaB in endothelial cells via oxidative stress[J].Circ Res,2004, 94(1):28-36.

[9] 赫連曼,王浩,趙海鷹,等.原發(fā)性高血壓患者血同型半胱氨酸與24小時血壓變異性的關系[J].臨床薈萃,2015,30(2):185-187.

[10] Koaar I，Kumar J，Thakur N，etal.Homocysteine levels are associated with cervical cancer independent of methylene letrahydrofolate reductase gene(MTHFR) polymorphisms in Indian population[J].Biomarkers,2010,15(1):61-68.

[11] Song YS,Rosenfeld ME.Methionine-induced hyperhomocysteinemia promotes superoxide anion generation and NFkappaB activation in peritoneal macrophages of C57BL/6 mice[J].J Med Food,2004,7(2):229-234.

[12] Picerno I,Chirico C,Condello S,etal.Homocysteine induces DNA damage and alterations in proliferative capacity of T-lymphocytes:a model for immunosenescence?[J].Biogerontology,2007,8(2):111-119.

Study on Clinical Significance of Homocysteine Examination in Elder Patients with Megaloblastic Anemia and Its Relationship with Changes of T Lymphocyte Subgroup

SHENJi-Chuna,ZHANGAi-minb,LIUJi-qinb,LIUXiao-Meib.

(a.DepartmentofHematology，b.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofLogisticsUniversityofChinesePeople′sArmedPoliceForce,Tianjin300162，China)

Objective To observe the relationship of changes of homocysteine and T lymphocyte subgroup in elder patients with megaloblastic anemia(MA).Methods A total of 150 patients diagnosed as MA admitted to the Affiliated Hospital of Logistics University of Chinese People′s Armed Police Force during Jan.2012 and Dec.2014 were divided into two groups according to hemoglobin(Hb) level:light anemia (73 cases，90 g/L≤Hb<110 g/L) and moderate anemia(77 cases，60 g/L≤Hb<90 g/L).Another 150 healthy people for physical examination during the same period in the hospital were selected as the control group.And the Hb,Hcy,cyanocobalamin (Vit B12), folic acid and percentage of CD3+T,Th,Ts and Th/Ts were observed and analyzed.Results Hcy level of mild anemia group[(19.4±2.6) μmol/L] and moderate anemia group[(29.3±6.9) μmol/L ]were significantly higher than the control group[ (9.6±5.3) μmol/L] (P<0.05),while Hb,Vit B12,folic acid were lower in MA group than the control group(P<0.05).And similar kind changes were found in moderate anemia subgroup when compared to light anemia group(P<0.05).Moreover,the percentage of CD3+T cell[(59.2±2.6)%] and Ts [(16.9±2.8)%] of mild anemia group and moderate anemia group were lower than control group [(67.2±3.7)% and (23.4±3.0)%] (P<0.01),and the percentage of Th cell and the rate of Th/Ts were increased in MA group(P<0.01).Hcy and Vit B12and folic acid of MA group were positively correlated(r=-0.402，-0.437，P<0.05).Hcy were negatively correlated with CD3+T,Ts percentage(r=-0.610，-0.514，P<0.05),and positively correlated with Th and Th/Ts(r=0.479，0.515，P<0.05).Conclusion The higher level of Hcy relates to the immune abnormality in elder patients with MA and may be an potential predictor to the diagnosis and prognosis.

Megaloblastic anemia； Homocysteine； T lymphocyte subgroup

R556

A

1006-2084(2015)12-2247-03

10.3969/j.issn.1006-2084.2015.12.051

2015-02-24

2015-04-03 編輯：伊姍