何雄生 羅瑜 張遠(yuǎn)華 肖俊強(qiáng)

痰咳舒糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

何雄生 羅瑜 張遠(yuǎn)華 肖俊強(qiáng)

目的制訂痰咳舒糖漿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法鑒別川貝母；采用紫外可見(jiàn)分光光度法(UV-VIS)測(cè)定貝母素乙的含量。結(jié)果薄層斑點(diǎn)清晰, 陰性樣品無(wú)干擾, 貝母素乙在0.05～0.35 mg呈良好的線性關(guān)系, 平均回收率為93.41%。RSD=2.23%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可有效控制本制劑的質(zhì)量。

痰咳舒糖漿；川貝母；貝母素乙；薄層色譜法；紫外可見(jiàn)分光光度法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

痰咳舒糖漿是本院名老中醫(yī)鄒志為的經(jīng)驗(yàn)處方。處方中含有桔梗、枇杷葉、川貝母、姜半夏、杏仁水、甘草等, 主治風(fēng)熱咳嗽、痰多、咽喉腫痛、感冒及支氣管炎見(jiàn)上述證者。在臨床應(yīng)用已有20年的歷史, 療效顯著并且銷(xiāo)量較大。為有效控制該制劑的質(zhì)量, 保證臨床療效的穩(wěn)定性, 作者對(duì)方中的川貝母進(jìn)行薄層色譜(TLC)鑒別, 采用UV-VIS對(duì)制劑中的貝母素乙進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試劑

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)UV752, 貝母素乙對(duì)照品(供含量測(cè)定用, 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所), 痰咳舒糖漿(100 ml/瓶,批號(hào)130510、130610、130710、130810、130910, 韶關(guān)市中醫(yī)院提供), 陰性樣品(韶關(guān)市中醫(yī)院制備), 所用試劑均為分析純, 水為去離子水。

2 川貝母的薄層定性鑒別

2.1 供試品溶液的制備 取本品100 ml, 加濃氨試液適量,使pH至11以上, 加氯仿提取2次,40 ml/次, 合并氯仿液,水浴蒸干, 殘?jiān)右掖?.5 ml使溶解, 即得。

2.2 陰性樣品溶液的制備 按痰咳舒糖漿處方, 去掉川貝母, 按原工藝制備出缺川貝母的制劑, 同法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 對(duì)照藥材溶液的制備 取川貝母對(duì)照藥材2.5 g, 加濃氨試液使?jié)駶?rùn), 密封, 放置1 h, 加氯仿30 ml回流40 min, 濾過(guò),濾液蒸干, 殘?jiān)右掖?.5 ml使溶解, 即得。

2.4 貝母素乙對(duì)照品溶液的制備 取貝母素乙適量加乙醇制成1 mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.5 TLC鑒別 按照TLC(《中國(guó)藥典》[1]2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn), 分別吸取供試液、陰性對(duì)照溶液30 μl、對(duì)照藥材溶液15 μl、對(duì)照品溶液4 μl點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-氨水-水(18∶2∶1∶0.1)為展開(kāi)劑, 展開(kāi), 取出, 晾干, 噴以稀碘化鉍鉀試液與亞硝酸鈉乙醇試液,供試品在與對(duì)照品和對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上, 顯相同顏色的斑點(diǎn)[2]。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 川貝母薄層色譜圖(Fritillariae Cirrhosae Bulbus were identified by TLC.)

3 貝母素乙的含量測(cè)定

3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 準(zhǔn)確稱取貝母素乙對(duì)照品10.00 mg,以三氯甲烷為溶劑定容至100 ml, 濃度為0.10 mg/ml, 搖勻,備用。

3.2 線性關(guān)系的考察 精密吸取對(duì)照品溶液(0.10 mg/ml) 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 ml, 分別置25 ml量瓶中,各精密加入0.2 mol/L鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液(取0.2 mol/L鄰苯二甲酸氫鉀溶液100 ml, 用0.2 mol/L NaOH溶液約50 ml調(diào)節(jié)pH值為5.0, 即得)5 ml, 再精密加0.03%溴百里香酚藍(lán)試液(取溴百里香酚藍(lán)0.03 g, 用1 mol/L NaOH溶液0.5 ml使溶解, 加水稀釋至100 ml, 即得)2 ml, 加三氯甲烷至刻度,劇烈振搖, 轉(zhuǎn)移至分液漏斗中, 放置45 min, 取三氯甲烷液,用干燥濾紙濾過(guò), 取續(xù)濾液, 以相應(yīng)試劑為空白, 照紫外可見(jiàn)分光光度法, 在412 nm的波長(zhǎng)處, 用1 cm比色皿測(cè)定吸光度[3-7]。以吸光度為縱坐標(biāo), 貝母素乙質(zhì)量為橫坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 得回歸方程：Y=2.091X+0.1870(r2=0.9964), 貝母素乙在0.05～0.35 mg內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為0.1 mg/ml的貝母素乙對(duì)照品溶液0.20、0.30、0.50 ml, 依法處理, 重復(fù)測(cè)定6次, 以吸光度計(jì)算RSD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 本儀器的精密度良好,各濃度對(duì)照品的RSD值均＜3.00%。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品(批號(hào)130710)6份,按上述設(shè)定的方法進(jìn)行平行試驗(yàn), 并依法進(jìn)行測(cè)定貝母乙素的含量, RSD值為0.65%[8]。結(jié)果表明, 本方法的重復(fù)性良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對(duì)同一供試品溶液, 在0、10、20、30、40、50、60 min進(jìn)行測(cè)定, 記錄貝母乙素的含量。RSD=2.65%, 表明供試品溶液在1 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

3.6 加樣回收實(shí)驗(yàn) 分別精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)130910)約100 ml即0.00763 g, 共6份, 分別準(zhǔn)確加入貝母乙素對(duì)照品溶液7.50 ml, 搖勻, 依法處理, 測(cè)定吸光值, 以相應(yīng)試劑為空白, 按對(duì)照品的回歸方程進(jìn)行計(jì)算, 回收率平均值為93.41%, RSD為2.23%[9-11]。見(jiàn)表1。

3.7 樣品測(cè)定 精密量取糖漿100 ml(n=6), 置具塞錐形瓶中, 加濃氨試液50 ml, 振搖, 靜置1 h, 加三氯甲烷-甲醇(4∶1)混合溶液50 ml, 置分液漏斗中, 振搖, 靜置2 h, 取三氯甲烷層, 用干燥濾紙濾過(guò), 濾液蒸干, 殘?jiān)尤燃淄槭谷芙鈁12]。精密量取2 ml樣品液, 置50 ml量瓶中, 照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法, 自“各精密加入0.2 mol/L鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液(取0.2 mol/L鄰苯二甲酸氫鉀溶液100 ml, 用0.2 mol/L NaOH溶液約50 ml調(diào)節(jié)pH值為5.0, 即得)5 ml”起, 依法測(cè)定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中貝母素乙的重量(mg), 即得[13]。見(jiàn)表2。每100 ml痰咳舒糖漿含貝母乙素0.014 mg。

表1 加樣回收率結(jié)果(n)

表2 痰咳舒糖漿樣品中貝母乙素的含量測(cè)定結(jié)果(n)

4 討論

4.1 通過(guò)查找資料與反復(fù)試驗(yàn), 發(fā)現(xiàn)有關(guān)川貝母的TLC方法資料不多, 有些方法用于復(fù)方中藥制劑時(shí), 各成分的分離效果不佳, 或有干擾, 或拖尾嚴(yán)重[14,15]。而本文所建立的川貝母的TLC方法分離效果好, 陰性對(duì)照無(wú)干擾, 不失為一個(gè)很好的方法。

4.2 制劑處方中川貝母屬于貴重藥材, 故對(duì)其生物堿代表成分貝母素乙進(jìn)行含量測(cè)定[16]。采用紫外可見(jiàn)分光光度法,由本研究結(jié)果可見(jiàn), 該測(cè)定方法快速、重復(fù)性和穩(wěn)定性好,精密度、回收率均較高, 與TLC結(jié)合能很好地控制痰咳舒糖漿的內(nèi)在質(zhì)量。

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Research of quality standard for Tankeshu syrup

HE Xiong-sheng, LUO Yu, ZHANG Yuan-hua, et al. Shaoguan City Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shaoguan512026, China

ObjectiveTo establish the quality standard for Tankeshu syrup.MethodsThin-layer chromatography (UV-VIS) was applied for identification of dulbus fritillariae cirrhosae, and ultraviolet visible spectrophotometry for content of peiminine.ResultsThin-layer had clear spots, without interference by negative samples. Peiminine showed fine linear relation in range of 0.05～0.35 mg, with the average recovery rate as93.41% and RSD=2.23%.ConclusionThis method has accuracy and good repeatability, and it can control the quality of Tankeshu syrup.

Tankeshu syrup; Bulbus fritillariae cirrhosae; Peiminine; Thin-layer chromatography; Ultraviolet visible spectrophotometry; Quality standard

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.16.192

2015-02-09]

512026 韶關(guān)市中醫(yī)院