郭建波 高鵬 白自剛

RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在非小細(xì)胞肺癌者組織和外周血中的表達(dá)及相關(guān)性研究

郭建波 高鵬 白自剛

目的研究非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者組織、外周血和正常肺組織中核糖核苷酸還原酶M1肽(RRM1)和Ⅲ型β微管蛋白(β-tubulinⅢ)mRNA的表達(dá)差異及其相關(guān)性。方法收集42例NSCLC患者手術(shù)切除腫瘤組織及10例良性肺病患者組織, 同時(shí)術(shù)前留取外周血4 ml, 應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在不同來(lái)源標(biāo)本中的表達(dá)水平, 并分析其相關(guān)性。結(jié)果RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在腫瘤組織、外周血中的表達(dá)與在正常肺組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),在外周血中的表達(dá)與在腫瘤組織中的表達(dá)不具有相關(guān)性。結(jié)論RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在肺癌組織和外周血中的檢測(cè)可以為晚期NSCLC個(gè)體化化療提供參考依據(jù)；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR在外周血中的檢測(cè)還不能替代肺癌組織標(biāo)本的檢測(cè)。

非小細(xì)胞肺癌；核糖核苷酸還原酶M1肽；Ⅲ型β微管蛋白；外周血；腫瘤組織；實(shí)時(shí)熒光定量PCR

肺癌已成為人類(lèi)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤, 中晚期肺癌經(jīng)驗(yàn)性化療療效停滯于平臺(tái)期, 因此化療分子標(biāo)志物的研究為NSCLC的個(gè)體化化療提供了方向。目前組織標(biāo)本是獲取分子標(biāo)志物的主要來(lái)源, 但是對(duì)于發(fā)病即為晚期, 標(biāo)本往往難以取得。因此找到組織標(biāo)本的替代者進(jìn)行檢測(cè)成為研究熱點(diǎn)。核糖核苷酸還原酶是DNA合成通路中的限速酶, RRM1亞單位是核苷酸結(jié)合位點(diǎn), 控制底物的特異性和整個(gè)酶的活性, 同時(shí)也是吉西他濱等核苷酸類(lèi)似物的化療藥物結(jié)合位點(diǎn)[1]。Ⅲ型β微管蛋白是微管蛋白的一種, 表達(dá)與作用于微管類(lèi)的藥物化療敏感性密切相關(guān)[2]。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)RRM1、β-tubulinⅢmRNA在NSCLC患者腫瘤組織和外周血中的表達(dá)情況, 明確能否用外周血中的表達(dá)水平來(lái)預(yù)測(cè)腫瘤組織中的表達(dá), 為晚期NSCLC患者的個(gè)體化治療提供一種簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2010～2014年胸外科行手術(shù)治療的臨床資料完整的NSCLC患者42例(分期為Ⅱ～Ⅲ期)及良性肺病患者10例為對(duì)照, 術(shù)前同時(shí)留取外周血4 ml。

1.2 檢測(cè)方法 應(yīng)用ABI公司ABI7500型熒光PCR儀及TOYOBO公司試劑, 采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；采用Pearson相關(guān)分析法分析同一患者肺癌組織及外周血基因表達(dá)水平相關(guān)性。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在不同來(lái)源標(biāo)本中的表達(dá)水平 RRM1 mRNA在外周血中的表達(dá)與在肺癌組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.164, P=0.360＞0.05), 肺癌組織、外周血中的表達(dá)與在正常肺組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.316, P=0.022＜0.05；t=2.258, P=0.015＜0.05)。β-tubulinⅢ mRNA在外周血中的表達(dá)與在肺癌組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.081, P=0.429＞0.05), 肺癌組織、外周血中的表達(dá)與在正常肺組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.252, P=0.009＜0.05；t=3.463, P=0.003＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在不同來(lái)源標(biāo)本中的表達(dá)水平比較(±s)

表1 RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在不同來(lái)源標(biāo)本中的表達(dá)水平比較(±s)

注：與肺癌組織比較,aP＞0.05；與正常肺組織比較,bP＜0.05

標(biāo)本來(lái)源 例數(shù) RRM1 mRNA表達(dá)水平 β-tubulinⅢ mRNA表達(dá)水平肺癌組織 42 31.76±0.62b 4.31±2.26b外周血 42 32.03±0.49ab 5.17±1.12ab正常肺組織 10 15.62±0.34 2.65±3.21

2.2 RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在外周血與肺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 運(yùn)用Pearson等級(jí)相關(guān)分析提示, 同一患者, 外周血RRM1 mRNA表達(dá)水平與肺癌組織的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.252, P=0.234＞0.05)；β-tubulinⅢ mRNA在肺癌組織與外周血中的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.161, P=0.197＞0.05)。

3 討論

肺癌已成為我國(guó)惡性腫瘤首位死亡原因。非小細(xì)胞肺癌約占肺癌的80%, 多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)即為晚期, 已失去手術(shù)機(jī)會(huì), 需采取以化療為主的綜合治療。部分患者盡管組織類(lèi)型、臨床分期相同、采用同樣治療方法, 卻出現(xiàn)不同的結(jié)果。因此對(duì)不同分子標(biāo)志物的檢測(cè)作為有針對(duì)性的個(gè)體化治療的基礎(chǔ)成為研究熱點(diǎn)。

RRM1是核苷酸結(jié)合位點(diǎn)之一, 它與RRM2共同構(gòu)成核糖核苷酸還原酶, 該酶是DNA合成的限速酶, 也是吉西他濱的分子靶點(diǎn)。因此檢測(cè)RRM1的表達(dá)有助于指導(dǎo)化療。本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)不同組織中RRM1 mRNA的表達(dá), 結(jié)果顯示, RRM1 mRNA在肺癌組織的表達(dá)與正常肺組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 提示RRM1 mRNA在肺癌組織檢測(cè)可以作為肺癌化療的分子標(biāo)志物, 這與Bepler等[3]的研究結(jié)果相近。

微管蛋白在細(xì)胞分裂過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。Ⅲ型β-tubulin是微管蛋白的重要組成部分, 其糖基化和磷酸化可形成抗藥表型并破壞細(xì)胞骨架, 使細(xì)胞在低氧水平和微營(yíng)養(yǎng)素的環(huán)境中仍能存活[4]。研究發(fā)現(xiàn), β-tubulinⅢ與NSCLC抗微管類(lèi)化療藥物療效相關(guān), 亦與肺癌進(jìn)展有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)顯示, β-tubulinⅢ mRNA在肺癌組織中表達(dá)高于正常肺組織, 提示β-tubulinⅢ可能在肺癌細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到了促進(jìn)作用。

目前肺癌分子標(biāo)志物的檢測(cè)都采用肺癌組織作為檢測(cè)樣本, 而晚期肺癌難以取得或沒(méi)有足量組織用于檢測(cè)。因此本研究希望通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)RRM1、β-tubulinⅢmRNA在肺癌組織與外周血中表達(dá)的相關(guān)性, 用外周血的檢測(cè)替代病理組織標(biāo)本, 為臨床治療提供簡(jiǎn)單易行的途徑。本實(shí)驗(yàn)顯示, RRM1、β-tubulinⅢ mRNA在肺癌組織與外周血中的表達(dá)不具有相關(guān)性, 提示外周血的檢測(cè)還不能替代肺癌組織作為檢測(cè)標(biāo)本, 下一步有待于尋求其他的檢測(cè)方法或者新的分子標(biāo)志物做進(jìn)一步研究。

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[2] Seve P, Isaac S, Tredan O, et al. Expression of classⅢβ-tubulin is predictive of patient outcome in patients with non small cell lung cancer receiving vinorelbine-based chemotherapy. Clin Cancer Res,2005,11(15):5481-5486.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.16.022

2015-04-24]

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