齊攀 金艷 曹興玥 張冰 謝振斌

CDC6蛋白在乳腺癌中表達(dá)及與病理指標(biāo)的關(guān)系

齊攀 金艷 曹興玥 張冰 謝振斌

目的探討乳腺癌組織中細(xì)胞分裂周期蛋白6(CDC6)表達(dá)情況, 分析CDC6蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系和意義。方法采用免疫組化方法檢測(cè)73例乳腺癌石蠟標(biāo)本中CDC6蛋白的表達(dá), 分析其與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果CDC6主要表達(dá)于細(xì)胞漿及細(xì)胞核中, 陽(yáng)性表達(dá)率：乳腺癌中65.8%；CDC6蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)。結(jié)論CDC6蛋白表達(dá)與乳腺癌關(guān)系密切, 檢測(cè)其表達(dá)對(duì)進(jìn)一步了解乳腺癌的生物學(xué)行為及判斷預(yù)后有一定價(jià)值。

細(xì)胞分裂周期蛋白6；乳腺癌; 病理指標(biāo)

乳腺癌嚴(yán)重威脅女性健康, 在我國(guó)女性乳腺癌發(fā)病率10年增長(zhǎng)37%, 且發(fā)病年齡有年輕化趨勢(shì)。早期預(yù)防、早期診斷、早期治療是防治乳腺癌的主要手段。然而為獲得更高的生存率, 選擇具有高危預(yù)后因素的患者進(jìn)行個(gè)體化治療已成為主要趨勢(shì)[1,2]。

細(xì)胞分裂周期蛋白6(cell division cycle6, CDC6)是DNA復(fù)制和細(xì)胞增殖必須蛋白質(zhì)。其正性調(diào)控DNA復(fù)制, 在DNA復(fù)制初期、后期、S期和有絲分裂期均起重要作用。CDC6缺乏, DNA無(wú)法復(fù)制, 細(xì)胞進(jìn)入凋亡或無(wú)DNA復(fù)制的假分裂狀態(tài)[3]。CDC6在腫瘤中的研究已廣泛受到重視。CDC6在正常組織中、增生不良組織中及腫瘤組織中表達(dá)依次增高[4], 并且選擇性阻止腫瘤細(xì)胞的增殖可以通過(guò)抑止CDC6的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。本次實(shí)驗(yàn)研究探討CDC6與乳腺癌的關(guān)系, 評(píng)價(jià)其是否能單獨(dú)或與其他指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用于乳腺癌患者的預(yù)后判斷及指導(dǎo)治療。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料73例乳腺癌標(biāo)本來(lái)自2003～2009年新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院病理科, 均為石蠟包埋組織塊。73例乳腺癌患者全部為女性(均有完整的隨訪資料), 年齡37～78歲, 中位年齡56歲, 其中年齡≤50歲的患者27例, 年齡＞50歲的患者46例；2例為導(dǎo)管內(nèi)癌,6例為浸潤(rùn)性特殊型癌,65例為浸潤(rùn)性非特殊型癌；腫瘤直徑≤2 cm24例, ＞2 cm49例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例, 未轉(zhuǎn)移44例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ期58例, Ⅲ期15例。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 采用組織切片免疫組化 CDC6(11640-1-AP)兔抗人多克隆抗體為美國(guó)PTG.LAB公司生產(chǎn)。免疫組化染色按S-P試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行。染色過(guò)程中設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

1.3 療效判斷標(biāo)準(zhǔn) 每例乳腺癌標(biāo)本均已有HE染色切片(病理既往存放), 并進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)(SBR分級(jí)標(biāo)準(zhǔn))。CDC6以胞核和胞漿出現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽(yáng)性, 采用半定量積分法判斷結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman法進(jìn)行分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CDC6表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 免疫組化結(jié)果顯示, CDC6蛋白陽(yáng)性表達(dá)定位在乳腺癌細(xì)胞胞核和細(xì)胞漿, 表現(xiàn)為細(xì)胞核及胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒沉淀,73例乳腺癌標(biāo)本CDC6在乳腺癌中陽(yáng)性率為65.8%, 其中(-)5例、(+)20例、(++)23例、(+++)25例。結(jié)果顯示, 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否及組織學(xué)分級(jí)不同的乳腺癌組織中, CDC6的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移, CDC6表達(dá)高, 組織學(xué)分級(jí)高, CDC6表達(dá)高；年齡、有無(wú)絕經(jīng)、臨床分期、病理類型與CDC6表達(dá)無(wú)關(guān)。見(jiàn)表1。

2.2 與臨床病理特征的相關(guān)性 相關(guān)分析結(jié)果顯示, CDC6蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P＜0.05), 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多, CDC6蛋白表達(dá)越高；與組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)(P＜0.05), 組織學(xué)分級(jí)高, CDC6蛋白表達(dá)越高。見(jiàn)表2。

3 討論

CDC6在腫瘤組織中, 包括宮頸癌、肺癌、口腔鱗狀上皮癌、前列腺癌等組織中呈現(xiàn)高表達(dá), 且其表達(dá)水平與組織的惡性進(jìn)程相關(guān)[5]。有學(xué)者用免疫組化與免疫熒光方法, 檢測(cè)了正常與病變宮頸切片中CDC6蛋白的表達(dá), 發(fā)現(xiàn)CDC6在非正常組織切片中染色明顯增強(qiáng), 其特異性與敏感性超過(guò)傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)記物Ki67和PCNA。有學(xué)者檢測(cè)了75例NSCLC病例癌組織與周邊正常組織中CDC6 mRNA與蛋白水平的差異, 發(fā)現(xiàn)在癌組織中CDC6的mRNA水平比正常組織高出5倍, 蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)結(jié)果證實(shí), 其蛋白水平也相應(yīng)地偏高。

表1 CDC6表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(n)

表2 Spearman等級(jí)相關(guān)分析中各臨床病理參數(shù)的賦值

本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), CDC6蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān), CDC6蛋白表達(dá)增強(qiáng)預(yù)示著腫瘤分化差, 容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移, 組織學(xué)分級(jí)差及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提示預(yù)后不佳。所以通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)再次證實(shí)CDC6預(yù)示不良預(yù)后, 其可以成為監(jiān)測(cè)乳腺癌病情、評(píng)價(jià)療效的重要分子生物學(xué)指標(biāo)。通過(guò)抑制CDC6的表達(dá)可以選擇性抑制腫瘤細(xì)胞的增殖, CDC6有可能成為一種有前景的治療乳腺癌的突破點(diǎn)。

[1]Gonzalez S, Klatt P, Delgado S, et al. Oncogenic activity of Cdc6 through repression of the INK4/ARF locus. Nature,2006,440(7084):702-706.

[2]Mallik I, Davila M, Tapia T, et al. Androgen regulates Cdc6 transcription through interactions between androgen receptorand E2F transcription factor in prostate cancer cells. Biochim Biophys Acta,2008,1783(10):1737-1744.

[3]Jin F, Fondell JD. A novel androgen receptor-binding element modulates Cdc6 transcription in prostatecancer cells during cellcycle progression. Nucleic Acids Res,2009,37(14):4826-4838.

[4]Martin CM, Astbury K, McEvoy L, et al. Gene expression profiling in cervical cancer: identification of novel markers for disease diagnosis and therapy.MethodsMol Biol,2009(511):333-359.

[5]Murphy N, Ring M, Heffron CC, et al. Quantitation of CDC6 and MCM5 mRNA in cervical intraepithelial neoplasia and invasivesquamous cell carcinoma of the cervix. Mod Pathol,2005,18(6):844-849.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.16.020

2015-04-20]

453002 新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院頭頸乳腺科(齊攀)；新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院組胚教研室(金艷 曹興玥)；新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院兒科(張冰)；新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院(謝振斌)