張長(zhǎng)坡 張延博

RP-HPLC法測(cè)定消痤丸中隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量

張長(zhǎng)坡 張延博

目的建立高效液相色譜法(RP-HPLC)同時(shí)測(cè)定消痤丸中隱丹參酮和丹參酮ⅡA含量。方法采用Thermo BDS HYPESILC18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,以甲醇-水(78∶22)為流動(dòng)相,流速為1.0 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm,柱溫為20 ℃。結(jié)果隱丹參酮和丹參酮ⅡA進(jìn)樣量分別在0.119～0.714、0.115～0.691 μg的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)分別為0.9999和0.9998；平均回收率(n=6)分別為98.3%(RSD=1.5%),99.5%(RSD=0.86%)。結(jié)論本方法操作簡(jiǎn)便可行,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

復(fù)方制劑；消痤丸；隱丹參酮；丹參酮ⅡA；高效液相色譜法；含量測(cè)定

DOI∶10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.17.207

消痤丸是由丹參、紫草、重樓、牡蠣、川芎、黃精、茵陳、蒼耳子和野菊花加工而成的復(fù)方制劑,具有清熱祛濕、涼血解毒、活血祛瘀、軟堅(jiān)散結(jié)之功效,臨床上用于治療痤瘡。丹參具有活血祛瘀、涼血消癰的功效[1］,是該制劑的主藥,為有效控制制劑質(zhì)量,確保臨床療效,本研究建立了隱丹參酮、丹參酮ⅡA的測(cè)定方法,并對(duì)供試品溶液的制備方法和色譜條件進(jìn)行了篩選、優(yōu)化,該方法可有效排除干擾物質(zhì),靈敏度高,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測(cè)器；Agilent Chemstation工作站(美國(guó)安捷倫科技公司)。

隱丹參酮(含量測(cè)定用,批號(hào)852-993)、丹參酮ⅡA(含量測(cè)定用,批號(hào)110766-200416)的對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；消痤丸(50 g/瓶,濟(jì)寧市中醫(yī)院提供)。甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心)為色譜純；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Thermo BDS HYPESIL C18(250 mm× 4.6 mm,5 μm)色譜柱,以甲醇-水(78±22)為流動(dòng)相,流速為1.0 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm,柱溫20℃,進(jìn)樣體積20 μl[2］。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取樣品20粒,精密稱(chēng)定重量,研細(xì),取粉末約1.0 g,精密稱(chēng)定,置磨口錐形瓶中,精密加入甲醇50 ml,密塞,稱(chēng)定重量,加熱回流1 h,放冷后,密塞,稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減損的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液[3］。

2.2.2 隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對(duì)照品溶液 分別精密稱(chēng)取經(jīng)減壓干燥24 h的隱丹參酮對(duì)照品12.4 mg、丹參酮ⅡA對(duì)照品12.0 mg,置50 ml棕色量瓶中,加甲醇5 ml使溶解,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取儲(chǔ)備液3 ml,置25 ml棕色量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液 按制劑的處方工藝,去除丹參藥材制成不含丹參的樣品,并按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作,即得。2.3 專(zhuān)屬性考察 取隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液,按上述色譜條件進(jìn)樣,記錄色譜圖。結(jié)果表明其他藥味對(duì)隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1,圖2,圖3。

圖1 對(duì)照品

圖2 樣品

圖3 色譜圖

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸取隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對(duì)照品溶液4.0、8.0、12.0、16.0、20.0、24.0 μl,分別按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積值。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),峰面積值(Y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并進(jìn)行線(xiàn)性回歸,隱丹參酮、丹參酮ⅡA回歸方程分別為∶

線(xiàn)性范圍分別為0.119～0.714 μg和0.115～0.691 μg。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取隱丹參酮、丹參酮ⅡA混合對(duì)照品溶液10 μl,連續(xù)進(jìn)樣5次,測(cè)定隱丹參酮、丹參酮ⅡA的峰面積,其RSD分別為0.11%和0.06%,表明精密度符合要求。

2.6 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液,分別在0、2、4、6、8 h進(jìn)樣測(cè)定峰面積,計(jì)算含量。結(jié)果在8 h內(nèi)隱丹參酮、丹參酮ⅡA含量的RSD分別為1.1%和1.3%。表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品5份,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果隱丹參酮、丹參酮ⅡA的平均含量(n=5)分別為0.0413%和0.0620%,RSD分別為0.79%和0.37%。表明方法重復(fù)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度考察 取已知含量的樣品6份,每份約0.5 g,精密稱(chēng)定,置具塞三角瓶中,精密加入隱丹參酮(0.203 mg/ml)和丹參酮ⅡA(0.341 mg/ml)混合對(duì)照品溶液,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率(n=6)分別為98.3%和99.5%,RSD分別為1.5%和0.86%。

2.9 樣品測(cè)定 取不同批號(hào)的樣品約1.0 g,精密稱(chēng)定,按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別進(jìn)行測(cè)定,采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。結(jié)果表明不同批號(hào)樣品含量穩(wěn)定。見(jiàn)表1。

表1 不同批號(hào)樣品隱丹參酮和丹參酮ⅡA含量測(cè)定結(jié)果(%)

3 小結(jié)

3.1 指標(biāo)性成分的確定 丹參脂溶性成分是丹參主要有效成分之一,具有較強(qiáng)的生理活性。其中丹參酮ⅡA、隱丹參酮含量較高。故以隱丹參酮和丹參酮ⅡA為指標(biāo),控制消痤丸的質(zhì)量。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 按本文色譜條件,分別記錄隱丹參酮、丹參酮ⅡA色譜圖。通過(guò)3D色譜圖不同波長(zhǎng)的比較,選擇270 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有丹參酮ⅡA的鑒別,不能真實(shí)有效地控制消痤丸的質(zhì)量,本文采用RP-HPLC法對(duì)消痤丸中隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果表明該法簡(jiǎn)便可行,重復(fù)性好,準(zhǔn)確性高,可用于消痤丸的質(zhì)量控制。

[1]周曉麗,劉春生,黃璐琦,等.傳統(tǒng)道地產(chǎn)區(qū)與非道地產(chǎn)區(qū)丹參有效成分含量比較.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2001,34(3):193-194.

[2]楊樹(shù)聲,宋平順,趙建邦,等.高效液相色譜法測(cè)定丹參類(lèi)藥材中四種脂溶性成分含量.蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版) ,2010,36(3):26.

[3]霍艷萍,張倩,吳翠.HPLC法同時(shí)測(cè)定益心舒片中丹參酮ⅡA的含量.醫(yī)學(xué)信息,2015(2):122.

2015-04-24］

∶272000 濟(jì)寧市中醫(yī)院(張長(zhǎng)坡)；滕州市中心人民醫(yī)院藥學(xué)部(張延博)