吳春艷 汪開毓 任思宇 王 均 苗常鴻

(1. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)魚病研究中心 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 成都 611130;2. 重慶三峽職業(yè)學(xué)院動(dòng)物科技系 重慶 404155; 3. 四川省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 成都 610000)

自20世紀(jì)80年代以來,我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)取得顯著性發(fā)展,但隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖進(jìn)入規(guī)模化和集約化模式后,促使養(yǎng)殖密度過高、水環(huán)境惡化及餌料營(yíng)養(yǎng)不均衡等原因,造成了水產(chǎn)動(dòng)物的大面積發(fā)病和死亡,嚴(yán)重阻礙了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。隨著科技的發(fā)展,脂類食譜已廣泛應(yīng)用于鮭科魚類的飼料中,但在一些植食性魚類,特別是草魚(Ctenopharyngodon idellus),由于長(zhǎng)期攝入這種飼料后會(huì)出現(xiàn)肝臟脂肪代謝機(jī)能的紊亂,導(dǎo)致食欲下降,影響生長(zhǎng)性能(Duet al,2005)。目前生產(chǎn)上主要通過在飼料中添加氯化膽堿(Choline choride)、甜菜堿(Betaine)等抗脂因子(向朝林,2011),但因此類物質(zhì)僅可作為飼料添加劑而限制其用量,使得治療效果不理想(Wilsonet al,1988),故在治療魚類脂肪肝疾病的領(lǐng)域里,開發(fā)廉價(jià)高效的新型中草藥具有重要的意義。

保肝中藥景天科植物垂盆草(Sedum sarmentosum)可有效抑制由 D-半乳糖苷(D-galactoside,D-GalN)、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)導(dǎo)致的小鼠爆發(fā)性肝衰竭引起的小鼠血液谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平的升高,且因其可有效抑制人肝癌細(xì)胞增殖而被民間廣泛應(yīng)于慢性病毒性肝病的治療(Lianet al,2010),但目前有關(guān)其對(duì)肝臟脂質(zhì)代謝等方面的研究少有報(bào)道,僅有 Morikawa等(2012)和 Muraoka等(2009)報(bào)道了關(guān)于垂盆草影響人肝癌細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝活性的研究中,證實(shí)了垂盆草可有效促進(jìn)人肝癌細(xì)胞積累脂質(zhì)的代謝并同時(shí)具有抑制脂質(zhì)合成的作用,因此,本試驗(yàn)主要以在飼料中添加垂盆草水提物后,通過血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定、病理學(xué)觀察及肝臟肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I (Carnitine Palmityl Transferase-1,CPT-1)、過氧化物酶體增殖物激活受體-α (Peroxisome Proliferatoractivated Receptor-α,PPAR-α)及 腫 瘤 壞 死 因 子 -α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α) mRNA 的表達(dá)量變化來評(píng)估和研究垂盆草對(duì)草魚脂肪肝的保護(hù)作用及機(jī)理,旨在為探索更有效的治療草魚脂肪肝疾病提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

主要試劑: 垂盆草提取物(CPC.TC10),由成都三陽(yáng)科技有限公司提供(將 20kg生藥,傳統(tǒng)水提濃縮,真空凍干,最終得到3kg粉末狀提取物); 魚油,購(gòu)自青島永豐生物科技有限公司; 大豆油,購(gòu)自益海嘉里食品營(yíng)銷有限公司。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和總膽固醇(CHO)的檢測(cè)試劑盒,均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。Trizol plus購(gòu)自TaKaRa公司。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物: 購(gòu)自成都市邛崍水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)。

1.2 方法

1.2.1 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)草魚為同一批孵化草魚,購(gòu)自成都市邛崍水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng),初始體重為(12±1.5)g,經(jīng)氯化鈉溶液浸泡消毒后暫養(yǎng)在80×75×60cm的靜水水族箱中,控制水體水溫在 26—28°C之間,pH 7.5,溶氧為5 mg/L左右,氨氮低于0.02 mg/L。試驗(yàn)過程中每 2天換水 1次,換水量為原來水量的 1/4—1/3,換水的同時(shí)抽去殘餌和糞便,水源為經(jīng)曝氣后的自來水,試驗(yàn)周期為12周。

1.2.2 造模期間試驗(yàn)分組與飼料配制 造模 1—6周期間,選取規(guī)格均一健康草魚360尾,隨機(jī)平均分到12個(gè)水族箱中,然后將12個(gè)水族箱隨機(jī)分為4組,每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)。四個(gè)處理組分別為: 基礎(chǔ)組、高脂組、1200mg/kg劑量組和 300mg/kg劑量組。參考汪開毓等(2012)報(bào)道的飼料中脂肪比例進(jìn)行配合飼料設(shè)計(jì)并進(jìn)行制作四組等氮飼料。造模過程中: 基礎(chǔ)組投喂基礎(chǔ)飼料(粗蛋白 30.5%),其中高脂組(粗蛋白30.5%)、1200mg/kg (粗蛋白 30.5%)劑量組和300mg/kg (粗蛋白30.5%)劑量組投喂高脂飼料,共飼喂6周,每天投喂率為3%。造模第6周結(jié)束后,各組分別進(jìn)行稱重、臨床及組織病理學(xué)觀察,當(dāng)高脂組、1200mg/kg劑量組和 300mg/kg劑量組均出現(xiàn)明顯的內(nèi)臟脂肪堆積和血清學(xué)指標(biāo)發(fā)生明顯升高及肝細(xì)胞脂肪變性時(shí),進(jìn)行治療試驗(yàn)。

1.2.3 治療期間試驗(yàn)分組與飼料配制 治療 1—6周期間,1200mg/kg劑量組、300mg/kg劑量組開始投喂加藥飼料(高脂飼料+1200mg/kg垂盆草水提物、高脂飼料+300mg/kg垂盆草水提物),進(jìn)行6周的治療,其余兩組飼料仍按造模期間飼料投喂。在每天的9: 00 am,12: 00 am,6: 00 pm,按草魚體重的3%投喂飼料,并在投喂加藥飼料后每隔 2周檢測(cè)一次血清指標(biāo)并稱重,隨時(shí)觀察魚體健康狀況,記錄死亡情況。

1.3 血清采集與相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

試驗(yàn)期間,在造模結(jié)束的第6周和治療的第2、4和 6周進(jìn)行取樣檢測(cè),取樣前將試驗(yàn)草魚禁食 24h,各組隨機(jī)抽取6尾,進(jìn)行尾靜脈采血。血液樣品置于4°C冰箱,靜置3 h后,4°C下,4000 r/min離心 10min,采集上層血清,4°C存放,用于谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和總膽固醇(CHO)含量的測(cè)定。

1.4 肝臟采樣與病理切片制作

在無(wú)菌條件下剝離肝臟,單獨(dú)將治療6周后所取的部分肝臟組織固定于 4%中性福爾馬林中,制作病理切片后進(jìn)行 H.E.染色和蘇丹染色,并將其余部分于–80°C 中凍存,用于總 RNA 的提取,以進(jìn)行CPT-1、PPAR-α、TNF-α表達(dá)量的半定量檢測(cè)。

1.5 CPT-1、PPAR-α和 TNF-α基因mRNA表達(dá)的半定量檢測(cè)

1.5.1 引物設(shè)計(jì) 參考 GenBank已公布的草魚CPT-1(登錄號(hào): JF728839)、PPAR-α(登錄號(hào): FJ231987,FJ849065)、TNF-α(登錄號(hào): HQ696609,JQ040498)使用Primer 5.0和Oligo 7.0軟件設(shè)計(jì)RT-PCR引物,引物序列送至生工生物工程(上海)股份有限公司合成。β-actin基因應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室已報(bào)道的序列(表 1) (汪開毓等,2012)。

1.5.2 PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物半定量分析 反轉(zhuǎn)錄: 稱取0.1g肝臟組織,采用Trizol試劑(TaKaRa公司),提取治療 6周各組草魚肝臟總 RNA,1%瓊脂糖凝膠電泳分析總 RNA提取效果后,用紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度。提取的總RNA經(jīng)過37°C 15min,85°C 5s的反轉(zhuǎn)錄后,合成cDNA (TaKaRa公司: DRRO14S)。各組的cDNA樣品保存于–20°C。

以合成的cDNA為模板,擴(kuò)增目的片段。反應(yīng)體系為 50 μL; CPT-1、PPAR-α、TNF-α 基因的反應(yīng)參數(shù)為: 94°C 5 min; 94°C 30 s,55°C 30 s ,72°C 1 min,共30個(gè)循環(huán); 72°C 5 min。β-actin反應(yīng)參數(shù)為: 94°C 5 min; 94°C 30 s,59.4°C 30 s,72°C 1 min,共 30 個(gè)循環(huán); 72°C 5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠電泳分析后,用Quantity One 462軟件分析條帶豐度,并計(jì)算各基因相對(duì)表達(dá)量。

表1 RT-PCR引物序列Tab.1 List of primers used for the RT-PCR

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

Quantity One 462軟件分析所得數(shù)據(jù)采用Spss16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,各組相同指標(biāo)的數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果用“±SD”表示,P＜0.05表示差異顯著,P＞0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)期間草魚生長(zhǎng)情況及血清生理與生化指標(biāo)變化

2.1.1 造模 6周草魚生長(zhǎng)情況及血清生理與生化指標(biāo)測(cè)定 由表2可知,在造模第6周結(jié)束時(shí)基礎(chǔ)組草魚體重顯著高于高脂飼料投喂的高脂組、1200mg/kg劑量組和300mg/kg劑量組(P＜0.01)。高脂組草魚各生理生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果表明: 高脂組、1200mg/kg劑量組、300mg/kg劑量組各生化指標(biāo)與基礎(chǔ)組相比出現(xiàn)顯著性變化,ALT、AST、TG和CHO指標(biāo)分別表現(xiàn)為不同水平的顯著升高(P＜0.01)。

2.1.2 治療6周血清生理與生化指標(biāo)的測(cè)定 由表3可知,整個(gè)治療期間,高脂組體重顯著低于其它三組(P＜0.01),試驗(yàn)第 2、4周時(shí),1200mg/kg劑量組與300mg/kg劑量組草魚體重差異不顯著,而試驗(yàn)的第 6周,1200mg/kg劑量組體重顯著高于300mg/kg劑量組(P＜0.01)。

治療第 2周結(jié)束后,1200mg/kg劑量組與300mg/kg劑量組草魚血清 ALT水平為 5.89 U/L和7.53 U/L,均同時(shí)極顯著低于高脂組的 23.71 U/L(P＜0.01)。其中,1200mg/kg劑量組與300mg/kg劑量組ALT水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01); AST水平分別為7.35 U/L和9.56 U/L,均同時(shí)極顯著低于高脂組 43.68 U/L (P＜0.01),且 1200mg/kg劑量組與300mg/kg劑量組差異顯著(P＜0.05); TG水平分別為1.96mmol/L和 2.55mmol/L,與高脂組無(wú)顯著性差異(P＞0.05); CHO含量分別為3.97mmol/L和4.91mmol/L均顯極著低于高脂組的5.86mmol/L (P＜0.01)。

表2 造模6周后各組草魚生理指標(biāo)的變化Tab.2 The physiological changes of C. idellus after modeling for 6 weeks

治療第 4周結(jié)束后,1200mg/kg劑量組與300mg/kg劑量組草魚血清 ALT水平為 4.97 U/L和5.76 U/L,均同時(shí)極顯著低于高脂組的 49.60 U/L(P＜0.01)。其中,1200mg/kg劑量組 ALT水平與300mg/kg劑量組,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);AST水平分別為6.63 U/L和7.59 U/L,均極顯著低于同期高脂組的57.94 U/L(P＜0.01),其中1200mg/kg劑量組與300mg/kg劑量組AST水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); TG水平分別為1.77mmol/L,和1.91mmol/L,均極顯著低于同期高脂組的 2.56mmol/L (P＜0.01);CHO含量分別為4.07mmol/L和4.55mmol/L,均極顯著低于同期高脂組的 6.14mmol/L (P＜0.01),其中,1200mg/kg劑量組與300mg/kg劑量組CHO水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

治療第6周結(jié)束后,1200mg/kg劑量與300mg/kg劑量組草魚血清ALT水平為4.60 U/L和5.39 U/L,均同時(shí)極顯著低于高脂組的 53.30 U/L(P＜0.01)。其中,1200mg/kg劑量組ALT水平與300mg/kg劑量組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); AST水平分別為 6.60 U/L和 7.13 U/L,均極顯著低于同期高脂組的 59.61 U/L(P＜0.01),其中1200mg/kg劑量組與 300mg/kg劑量組 AST水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05); TG水平分別為1.51mmol/L和1.60mmol/L,均極顯著低于同期高脂組的2.62mmol/L (P＜0.01),其中1200mg/kg劑量與 300mg/kg劑量組 SOD水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05); CHO 含量分別為 3.97mmol/L和4.67mmol/L,均極顯著低于同期高脂組的 6.41mmol/L(P＜0.01),其中,1200mg/kg劑量組與300mg/kg劑量組CHO水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表3 治療6周內(nèi)各組草魚生理指標(biāo)的變化Tab.3 The physiological changes of C. idellus within 6 weeks of treatment

2.2 治療6周草魚肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察

組織病理學(xué)觀察結(jié)果表明,經(jīng)過加藥飼料的投喂,在治療的第6周結(jié)束后基礎(chǔ)組(圖1a,b): 肝細(xì)胞大小一致,細(xì)胞核藍(lán)染,位于細(xì)胞中央; 胞漿均質(zhì)紅染,內(nèi)有少量脂滴。高脂組(圖1c,d): 肝細(xì)胞形似脂肪細(xì)胞,胞核被擠向邊緣,胞內(nèi)脂滴融合為大空泡,蘇丹Ⅲ染色呈現(xiàn)大量脂滴; 與高脂組相比,1200mg/kg劑量組(圖1e,f)與300mg/kg劑量組(圖1g,h)在治療6周后取樣觀察時(shí),發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性的程度有所降低,脂滴有一定程度的減少。

2.3 治療6周總RNA的鑒定及樣品檢測(cè)

總 RNA經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)純度和定量A260/A280值在 1.8—2.0之間,表明純度高、污染低且無(wú)降解,可以作為逆轉(zhuǎn)錄模版。各組CPT-1、PPAR-α、TNF-α和β-actin基因擴(kuò)增產(chǎn)物如圖2所示。

利用Quantity One 462軟件對(duì)β-actin、CPT-1、PPAR-α及TNF-α的RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步的數(shù)據(jù)分析,結(jié)果可知: 試驗(yàn)治療第6周結(jié)束后1200mg/kg劑量組和300mg/kg劑量組的肝臟CPT-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量為1.42和1.15均高于同期高脂組相對(duì)表達(dá)量且差異極顯著(P＜0.01); PPAR-α mRNA表達(dá)量分別為1.49和、1.43均高于同期高脂組且差異極顯著(P＜0.01); 1200mg/kg劑量組TNF-α mRNA表達(dá)量為1.11,低于同期高脂組且差異極顯著(P＜0.01)(表4)。

圖1 治療6周后草魚肝臟病理組織學(xué)變化Fig.1 Pathological changes of the C. idellus hepatopancreas after treatment for 6 weeksa. 基礎(chǔ)組: 肝細(xì)胞形態(tài)正常,細(xì)胞核居中,胞質(zhì)均質(zhì)紅染(H.E.); b. 基礎(chǔ)組: 肝細(xì)胞紅染脂滴體積較小(Sudan Ⅲ); c. 高脂組: 肝細(xì)胞形似脂肪細(xì)胞,胞核邊移,胞漿內(nèi)出現(xiàn)大的脂滴空泡(H.E); d. 高脂組: 肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量紅染脂滴(Sudan Ⅲ); e. 1200mg/kg劑量組(第12周): 肝細(xì)胞腫脹,胞漿內(nèi)脂滴空泡相對(duì)于高脂組有所減少(H.E); f. 1200mg/kg劑量組(第12周): 肝細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴有所減少(Sudan Ⅲ);g. 300mg/kg劑量組(第12周): 肝細(xì)胞腫脹,胞漿內(nèi)脂滴空泡輕微減少(H.E); h. 300mg/kg劑量組(第12周): 肝細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴相對(duì)減少(Sudan Ⅲ)

3 討論

本研究中,通過對(duì)健康草魚進(jìn)行連續(xù)6周投喂高脂飼料,使得魚體ALT、AST、TG和CHO血液指標(biāo)升高,說明肝組織出現(xiàn)了嚴(yán)重的損傷,部分細(xì)胞內(nèi)的酶進(jìn)入血液,導(dǎo)致血液中相應(yīng)酶含量增加,并由于持續(xù)的高脂飲食導(dǎo)致魚體攝入過量的脂肪酸,使血清TG和CHO水平升高,另外病理組織學(xué)顯示肝細(xì)胞嚴(yán)重脂肪變性,說明本次研究成功建立了草魚脂肪性肝損傷模型(Duet al,2006)。作為保肝降酶特效藥景天科植物垂盆草(Sedum sarmentosumBunge),近年來主要用于慢性病毒性肝炎的治療,其有效成分對(duì)人肝癌細(xì)胞脂質(zhì)代謝具有調(diào)控作用,并同時(shí)抑制癌細(xì)胞的增殖(Huanget al,2010; Morikawaet al,2012),且通過抑制炎性滲出而有效降低血清中 ALT水平(Junget al,2008); 除此之外,Oh等(2004)報(bào)道了垂盆草黃酮成分可抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的活性,有效緩解高血壓等一系列心血管疾病。但這些研究結(jié)果主要是針對(duì)小鼠等哺乳類動(dòng)物,而關(guān)于草魚脂肪肝脂質(zhì)代謝調(diào)控等方面的研究,本文尚屬首次報(bào)道。

表4 治療6周結(jié)束后草魚肝臟不同基因mRNA表達(dá)的情況Tab.4 The effect of C. idellus hepatopancreas on different gene mRNA expressions after 6 weeks of treatment

圖2 治療第6周結(jié)束草魚肝臟不同基因mRNA表達(dá)情況Fig.2 The effect of C. idellus epatopancreas on different gene mRNA expressions after 6 weeks of treatment

投喂加藥飼料 6周后,1200mg/kg劑量組、300mg/kg劑量組的ALT、AST水平顯著降低(P＜0.01),說明垂盆草可通過降低血清 ALT、AST水平對(duì)肝細(xì)胞起保護(hù)作用。由于持續(xù)投喂高脂飼料導(dǎo)致草魚肝臟攝取脂肪酸增多,造成草魚血清TG和CHO水平的升高,出現(xiàn)類似哺乳動(dòng)物的高血脂癥癥狀(汪開毓等,2012),是引起草魚脂肪肝的重要因素。本試驗(yàn)在投喂添加垂盆草的藥物飼料治療4周后,血清TG和CHO已經(jīng)開始顯著降低(P＜0.05),且在試治療 6周結(jié)束時(shí)1200mg/kg劑量組TG和CHO水平已降低到基礎(chǔ)組正常水平,說明垂盆草水提物可通過促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)脂肪酸氧化,抑制其積累而減少TG和CHO釋放入血,來有效降低持續(xù)高脂飼料導(dǎo)致的患病草魚 TG和CHO的升高,與 1200mg/kg劑量組改善肝細(xì)胞脂肪變性組織病理學(xué)觀察結(jié)果一致。

CPT-1、PPAR-α作為體內(nèi)脂肪代謝過程中重要的調(diào)控酶類,其表達(dá)量的變化可反應(yīng)體內(nèi)脂類代謝情況(Hsuet al,2007),治療6周后1200mg/kg、300mg/kg劑量組 CPT-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著升高,與Kuwashiro等(2011)研究替米沙坦改善高脂造成的青鱂魚非酒精性脂肪肝模型中的結(jié)果相符,這說明了垂盆草水提物可促進(jìn)脂肪酸代謝,從而使得大量堆積的脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行 β-氧化,這初步反應(yīng)了垂盆草水提物對(duì)草魚脂肪肝的保護(hù)作用。PPAR-α主要在肝臟表達(dá),可通過對(duì)肝內(nèi)脂肪酸氧化相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控,對(duì)肝臟脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)中起重要作用(Reddy,2001),治療6周后,1200mg/kg劑量組、300mg/kg劑量組 PPAR-α mRNA 的相對(duì)表達(dá)量均顯著升高(P＜0.01),與Zhou等(2008)報(bào)道的小檗堿緩解大鼠高脂血癥肝臟PPAR-α的表達(dá)中結(jié)果一致,這說明垂盆草可通過促進(jìn)PPAR-α mRNA的表達(dá),從而使得一系列與肝內(nèi)脂肪酸代謝有關(guān)的蛋白質(zhì)、酶基因的轉(zhuǎn)錄水平相應(yīng)的升高,最終提高脂肪酸的氧化與脂蛋白的合成,有效緩解了魚類肝臟的脂肪病變(Kuwashiroet al,2011)。此外,已有研究表明,肝細(xì)胞TNF-α的表達(dá)量的變化,可直接反應(yīng)出脂類和葡萄糖的代謝情況,對(duì)脂肪肝發(fā)病早期及其進(jìn)展均有作用,是肝細(xì)胞壞死的一個(gè)關(guān)鍵步驟,其致病機(jī)制主要是通過自身高表達(dá)來降低PPAR-a mRNA的表達(dá)量進(jìn)而促進(jìn)脂肪肝的形成(Valentiet al,2002; Glosliet al,2005); 本研究中,投喂高脂飼料6周后,高脂組TNF-α mRNA表達(dá)量顯著于基礎(chǔ)組,而經(jīng)過投喂6周的加藥飼料治療后,1200mg/kg劑量組TNF-α mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著低于高脂組(P＜0.01),這反映出垂盆草可通過抑制TNF-α mRNA 的表達(dá)從而抑制高脂飲食造成的脂質(zhì)積累,佐證了垂盆草高劑量組顯著改善草魚肝細(xì)胞脂肪變性的結(jié)果。

綜上所述,以上三個(gè)基因半定量檢測(cè)結(jié)果說明垂盆草可通過促進(jìn) CPT-1和 PPAR-α的表達(dá),抑制TNF-α表達(dá),來提高肝細(xì)胞內(nèi)脂肪酸的代謝速率; 同時(shí)文中組織病理學(xué)觀察與血液生化指標(biāo)的變化均顯示,垂盆草可緩解草魚由高脂飲食造成的脂肪性肝病。以上結(jié)果可為生產(chǎn)上解決魚類脂肪性肝病提供理論依據(jù),進(jìn)而為后期試驗(yàn)研究提供有效數(shù)據(jù)。

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