卞方杰，邢美燕，楊健，孫文，潘賽

污染控制與資源化研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)江水環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，同濟(jì)大學(xué)，上海 200092

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彗星試驗(yàn)技術(shù)在水生與土壤環(huán)境中的毒理學(xué)應(yīng)用

卞方杰，邢美燕*，楊健，孫文，潘賽

污染控制與資源化研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)江水環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，同濟(jì)大學(xué)，上海 200092

彗星試驗(yàn)是一種檢測(cè)真核細(xì)胞脫氧核糖核酸(DNA)損傷的技術(shù)，快速、低成本、適用于幾乎所有真核細(xì)胞，因此常應(yīng)用于遺傳毒理學(xué)、輻射生物學(xué)、腫瘤細(xì)胞學(xué)、毒性檢測(cè)等方面。尤其以靈敏度高、檢測(cè)聯(lián)合毒性的特點(diǎn)大量運(yùn)用于環(huán)境研究中。主要介紹彗星試驗(yàn)方法學(xué)發(fā)展歷程，彗星試驗(yàn)的原理及其在環(huán)境領(lǐng)域中的應(yīng)用，并指出應(yīng)用中的受限因素以及未來的發(fā)展前景，為今后進(jìn)一步推廣該試驗(yàn)技術(shù)提供理論上的指導(dǎo)與參考。

彗星試驗(yàn)；遺傳毒性；DNA損傷；污染評(píng)價(jià)；生物檢測(cè)

近年來，隨著經(jīng)濟(jì)的迅猛發(fā)展，我國(guó)的生態(tài)環(huán)境也承受著前所未有的風(fēng)險(xiǎn)。大量的污染事件頻繁暴發(fā)，昭示著環(huán)境的脆弱。同時(shí)各類新興污染物不斷曝光，逐漸引起學(xué)者與公眾的關(guān)注，如環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(EDCs)，持久性有機(jī)污染物(POPs)，有機(jī)磷阻燃劑(OPFRs)，溴代阻燃劑(BFRs)等。而在對(duì)這些污染物的深入研究中，人們?cè)絹碓蕉嗟匕涯抗饩奂蕉纠矸矫?，并致力于定性定量評(píng)估這些物質(zhì)對(duì)生態(tài)環(huán)境，對(duì)生物體造成的毒性效應(yīng)。

在環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域，細(xì)胞和分子水平的診斷技術(shù)，如DNA損傷檢測(cè)技術(shù)，由于其特異性和實(shí)用性等優(yōu)點(diǎn)，在污染評(píng)價(jià)與生物檢測(cè)方面異軍突起。外界環(huán)境中的理化因素對(duì)細(xì)胞脫氧核糖核酸(DNA)的損傷是引起基因突變和癌變的主要原因，因此判斷細(xì)胞DNA是否損傷是環(huán)境監(jiān)測(cè)中重要的一環(huán)。彗星試驗(yàn)(comet assay)又稱單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)(single cell gel electrophoresis，SCGE或SCG)，是一種檢測(cè)真核細(xì)胞DNA損傷的常用方法。該方法可以對(duì)遺傳毒性物質(zhì)產(chǎn)生的多種DNA損傷(單鏈斷裂、雙鏈斷裂等)進(jìn)行定性和半定量的檢測(cè)。同時(shí)該技術(shù)具有檢測(cè)敏感性高，樣品所需細(xì)胞數(shù)量少，靈活低成本，試驗(yàn)周期短等特點(diǎn)。近些年來，該方法廣泛應(yīng)用于遺傳毒理、環(huán)境監(jiān)測(cè)和細(xì)胞凋亡等研究，其中在健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中的應(yīng)用已成為目前研究的焦點(diǎn)。關(guān)于彗星試驗(yàn)的文章多立足于技術(shù)上的應(yīng)用，鮮有關(guān)于彗星試驗(yàn)方法學(xué)發(fā)展歷程的概述，也未有從大環(huán)境的宏觀角度進(jìn)行綜述，所以本文從彗星試驗(yàn)方法學(xué)發(fā)展展開，介紹試驗(yàn)原理及其在水生環(huán)境、土壤環(huán)境中的應(yīng)用，也指出該方法一定的局限性與發(fā)展空間，旨在為進(jìn)一步推廣該技術(shù)提供參考與指導(dǎo)。

1 彗星試驗(yàn)方法學(xué)發(fā)展歷程(Methodologicaldevelopment of comet assay)

1.1 國(guó)際研究者對(duì)彗星試驗(yàn)方法學(xué)的探究

1984年Ostling和Johanson[1]首次提出電泳pH9.5情況下的彗星試驗(yàn)版本，當(dāng)時(shí)認(rèn)為彗尾是DNA超螺旋的釋放，現(xiàn)在的研究表明其實(shí)是一些緊密的DNA環(huán)在電泳下形成的光圈。

1988年，Singh等[2]對(duì)試驗(yàn)過程進(jìn)行改良，主要是將電泳過程中的pH提高至13，在此版本下可以檢測(cè)到DNA單鏈損傷(SSB)、ALS(堿性易變位點(diǎn))、DNA-DNA交聯(lián)、DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)和與SSB相關(guān)的修復(fù)。該版本得到很多國(guó)際組織的認(rèn)可，成為經(jīng)典版本。

1995年，ICAW(The International Comet Assay Workshop)在第二屆ICEM研討會(huì)(International Conference on Environmental Mutagens)上成立，每?jī)赡暌粚?，至今已舉辦10次(10thICAW，Porto，Portugal，16-17Sep 2013)，是彗星試驗(yàn)領(lǐng)域最全面，最專業(yè)的研討會(huì)，每屆會(huì)議上都會(huì)討論關(guān)于彗星試驗(yàn)理論、實(shí)踐方面的研究進(jìn)展和這項(xiàng)技術(shù)的最新應(yīng)用。

1999年，IWGT(國(guó)際基因毒性檢測(cè)課題組)專家達(dá)成共識(shí)，認(rèn)為1988年Singh的堿性檢測(cè)版本是最佳版本，并概括了其成本低，試驗(yàn)周期短，靈活敏感的特點(diǎn)，同時(shí)討論了試驗(yàn)中操作步驟對(duì)應(yīng)的機(jī)理，如何在載玻片上鋪膠，以及細(xì)胞毒性在結(jié)果中難以顯示清楚等問題[3]。

2005年，第四屆IWGT研討會(huì)召開，期間召集專家組成彗星試驗(yàn)專家組，討論了多劑量與單一劑量，不同的細(xì)胞提取方式，細(xì)胞毒性，不同的圖像分析系統(tǒng)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響[4]。

2010年，歐洲彗星試驗(yàn)組織ECVAG成立，該組織的研究重點(diǎn)是研究彗星試驗(yàn)中DNA損傷和修復(fù)的差異性。通過研究表明，在用彗星試驗(yàn)檢測(cè)DNA損傷和FPG(甲酰嘧啶)敏感位點(diǎn)時(shí)，不同試驗(yàn)室的差異很大，但是濃度和損傷的關(guān)系在每個(gè)試驗(yàn)室中都可以檢測(cè)到。此外，不同數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)帶來的影響遠(yuǎn)大于試驗(yàn)操作規(guī)范不同的影響，同時(shí)ECVAG也在向制定國(guó)際統(tǒng)一的彗星試驗(yàn)操作規(guī)范而努力[5]。

2011年，第八屆研討會(huì)上由Andrew Collin等領(lǐng)軍人物提出建立運(yùn)用彗星試驗(yàn)對(duì)人體進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)的計(jì)劃，并在第九屆會(huì)議上得以確定為“ComNet”計(jì)劃，并成立專門的網(wǎng)站(www.comnetproject.org)來收集數(shù)據(jù)[6]。這些系列研討會(huì)為彗星試驗(yàn)的深入探究及推廣做出了相當(dāng)大的貢獻(xiàn)。

1.2 國(guó)內(nèi)研究者對(duì)彗星試驗(yàn)方法學(xué)的發(fā)展

國(guó)內(nèi)早期對(duì)彗星試驗(yàn)的研究主要包括引用介紹、研究應(yīng)用、方法改進(jìn)三個(gè)方面。20世紀(jì)末國(guó)內(nèi)開始出現(xiàn)了大量關(guān)于單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)的介紹[7-8]，隨后該方法被陸續(xù)用于癌細(xì)胞研究、人血淋巴細(xì)胞研究、細(xì)胞凋亡研究、毒性檢測(cè)等領(lǐng)域。

四川大學(xué)張遵真教授及其課題組在彗星試驗(yàn)技術(shù)的探索與推廣方面做了大量工作，是國(guó)內(nèi)本領(lǐng)域的領(lǐng)軍力量。曾就彗星試驗(yàn)裂解時(shí)間、解旋時(shí)間、電壓電流等進(jìn)行篩選，尋求最優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件[9]。也對(duì)傳統(tǒng)染毒、懸浮染毒兩種染毒方式進(jìn)行了對(duì)比，提出了懸浮染毒更敏感，節(jié)約細(xì)胞與時(shí)間，均勻性好的結(jié)論，建議作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞的首選染毒方式[10]。此外，他們還建立了一種非熒光染色的實(shí)驗(yàn)方法：銀染法。該方法具有染色清晰，敏感性高，可直接用光學(xué)顯微鏡觀察的特點(diǎn)，促進(jìn)了彗星試驗(yàn)的進(jìn)一步推廣[11]。

在實(shí)驗(yàn)操作步驟方面，牛勇等[12]研究了乙醇脫水干燥法保存膠片的穩(wěn)定性及系統(tǒng)性。羅明志等[13]對(duì)制膠，水洗，電源選擇和脫水等主要實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行了改進(jìn)。劉豐等[14]對(duì)制膠方法稍加改良，使之可處理大批量的樣品。歐紅梅等[15]對(duì)彗星試驗(yàn)的國(guó)際聯(lián)合驗(yàn)證進(jìn)行了詳細(xì)介紹，從給藥方案設(shè)計(jì)、取樣等6個(gè)方面闡述了較公認(rèn)的體內(nèi)彗星試驗(yàn)方法，具有較重要的借鑒意義。

國(guó)內(nèi)研究者針對(duì)不同實(shí)驗(yàn)對(duì)象也確立了不同的實(shí)驗(yàn)方案。徐海娟等[16]采用大鼠微量全血法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的分離-富集法，使實(shí)驗(yàn)方法更簡(jiǎn)單，便于大規(guī)模的檢測(cè)工作。魯志松等[17]針對(duì)人體頰黏膜細(xì)胞彗星實(shí)驗(yàn)探討了最適條件。陳建偉等[18]建立了雙尾彗星試驗(yàn)法來檢測(cè)精子的DNA完整性。這些不同方法學(xué)的建立表明了彗星試驗(yàn)技術(shù)已得到國(guó)內(nèi)研究者們的繼承與發(fā)展。

閆學(xué)昆等[19]對(duì)彗星試驗(yàn)圖像采用的傳統(tǒng)迭代閾值分割法進(jìn)行改進(jìn)，并推廣至雙閾值分析法。該方法快速，可靠，分割效果理想，并可實(shí)現(xiàn)圖像的自動(dòng)分割。這是國(guó)內(nèi)少有的對(duì)彗星試驗(yàn)圖像分析系統(tǒng)的改良，為提高不同實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的可比性做出了較大貢獻(xiàn)。

國(guó)內(nèi)多年來對(duì)彗星試驗(yàn)的發(fā)展主要集中在實(shí)驗(yàn)步驟與條件優(yōu)化方面，涉及機(jī)理較少，但我們看到該技術(shù)已慢慢得到研究者的認(rèn)同與青睞，且在各領(lǐng)域得到大量應(yīng)用，前景可觀。

2 彗星試驗(yàn)在環(huán)境領(lǐng)域的應(yīng)用(Applications ofcomet assay in the environmental field)

2.1 彗星試驗(yàn)的原理

彗星試驗(yàn)是通過將細(xì)胞懸浮液固定在載玻片上的瓊脂糖里，浸泡在高鹽分、高堿度的裂解液里裂解細(xì)胞膜，排出細(xì)胞質(zhì)，使DNA緊密的超螺旋結(jié)構(gòu)裸露，繼而在之后的過程中解旋開來，損傷的DNA片段暴露出負(fù)電荷，并在電泳時(shí)向陽極遷移，形成“彗尾”，而完整的DNA沒有遷移，形成“彗核”，再通過染色和顯微拍照記錄。通過尾長(zhǎng)、尾矩、Oliver尾矩等指標(biāo)來顯征DNA的損傷程度，且可以較好地表達(dá)污染物遺傳毒性的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

2.2 彗星試驗(yàn)在環(huán)境領(lǐng)域的應(yīng)用

彗星試驗(yàn)最早應(yīng)用于檢測(cè)電離輻射對(duì)DNA的損傷研究中，如今在基因毒性測(cè)試[20]、人體研究[21]、DNA修復(fù)測(cè)試[22]等領(lǐng)域均有很廣泛的研究。而隨著環(huán)境領(lǐng)域方面的研究越來越多，越來越深入，彗星試驗(yàn)已經(jīng)成為一項(xiàng)常用技術(shù)普遍用于污染物質(zhì)的毒性檢測(cè)中。

2.2.1 水環(huán)境中的應(yīng)用

水環(huán)境是構(gòu)成環(huán)境的基本要素之一，是人類社會(huì)賴以生存和發(fā)展的重要場(chǎng)所，也是受人類干擾和破壞最嚴(yán)重的領(lǐng)域。水環(huán)境中污染物質(zhì)種類復(fù)雜，衍生物繁多。通過原位取樣和實(shí)驗(yàn)室模擬兩種方法，脊椎水生生物、無脊椎水生生物、水生植物彗星實(shí)驗(yàn)都得到很廣泛的研究(表1)。

隨著研究的不斷深入，人們?cè)絹碓蕉嗟仃P(guān)注利用水環(huán)境中的特定生物研究及評(píng)價(jià)新型污染物的基因毒性。例如利用貽貝研究煙草提取物[23]和內(nèi)氯氰菊酯的濃度[24]。

其中，人類活動(dòng)對(duì)水環(huán)境利用的起源便是河流水源與飲用水環(huán)節(jié)。Kolarevic[31]研究了復(fù)雜環(huán)境下彗星實(shí)驗(yàn)參數(shù)與各種有機(jī)物以及環(huán)境之間的聯(lián)系。通過檢測(cè)貽貝血細(xì)胞彗星試驗(yàn)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)尾矩與水環(huán)境中鋅、溫度、溶解氧呈現(xiàn)很好的相關(guān)性。Alink[32]監(jiān)測(cè)了1978-2005年近30年萊茵河河水對(duì)蔭魚的彗星實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為環(huán)保決策提供了有力的支撐。Rajaguru等[33]利用鯉魚、蚯蚓分別作為印度Noyyal河河水和底泥的毒性指示生物，研究了河流沿程毒性的變化情況，為海洋環(huán)境的綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)體系提供了新方法及重要的手段。

檀麗[34]應(yīng)用蠶豆根尖微核試驗(yàn)、彗星試驗(yàn)技術(shù)對(duì)8種代表性DBPs(消毒副產(chǎn)物)進(jìn)行遺傳毒性評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)彗星試驗(yàn)8種毒性損傷都可以檢測(cè)出，而微核試驗(yàn)只檢測(cè)出5種，并且發(fā)現(xiàn)蠶豆根尖彗星試驗(yàn)對(duì)5種鹵乙酸(HAAs，重要的消毒副產(chǎn)物)的檢出限比其他檢測(cè)系統(tǒng)要低。因此，在進(jìn)行進(jìn)一步的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)積累后，有望將該試驗(yàn)用于飲水遺傳毒性原位監(jiān)測(cè)。

在水環(huán)境毒性監(jiān)測(cè)中更具意義的應(yīng)用是用于廢水的檢測(cè)，尤其是工業(yè)廢水。隨著現(xiàn)代工業(yè)的迅速發(fā)展，實(shí)際水體和排放水體中的致癌物、難降解物質(zhì)、重金屬等有毒物質(zhì)的種類和含量大大增加，對(duì)環(huán)境影響很大。逐一檢測(cè)各個(gè)污染物的毒性和含量相當(dāng)繁瑣且沒有必要。綜合毒性的測(cè)量手段應(yīng)運(yùn)而生，又以敏感度高，靈活快速的彗星試驗(yàn)應(yīng)用廣泛。

凌發(fā)忠等[35]對(duì)彗星試驗(yàn)稍加改進(jìn)后，利用嗜熱四膜蟲對(duì)醫(yī)藥工業(yè)廢水進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)彗星試驗(yàn)可以快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出各類醫(yī)藥廢水的毒性，相對(duì)其他化學(xué)分析法等有著不可替代的優(yōu)勢(shì)。張遵真等[36]利用改良的彗星試驗(yàn)對(duì)污水處理廠進(jìn)出水、造紙廠、制革廠廢水進(jìn)行檢測(cè)，總結(jié)了利用彗星試驗(yàn)檢測(cè)工業(yè)廢水對(duì)DNA損傷的誘導(dǎo)性的特點(diǎn)：無需預(yù)處理，直接檢測(cè)；反映廢水里多種物質(zhì)的聯(lián)合毒性作用，更具實(shí)際意義；可通過不同稀釋倍數(shù)的廢水毒性的檢測(cè)來大致確認(rèn)廢水排出廠后的影響范圍。

表1 水環(huán)境中某些生物彗星試驗(yàn)

2.2.2 土壤環(huán)境中的應(yīng)用

環(huán)境保護(hù)部和國(guó)土資源部2014年發(fā)布了全國(guó)土壤污染狀況調(diào)查公報(bào)，調(diào)查結(jié)果顯示，全國(guó)土壤環(huán)境狀況總體不容樂觀，部分地區(qū)土壤污染較重，工礦業(yè)廢棄地土壤環(huán)境問題突出。重金屬、DDT等農(nóng)藥、POPs、PAHs各種污染物引發(fā)的社會(huì)事件不斷出現(xiàn)。大量除草劑和殺蟲劑的使用，可能會(huì)影響非目標(biāo)生物的生長(zhǎng)，導(dǎo)致土壤的結(jié)構(gòu)和功能生態(tài)系統(tǒng)的不可逆破壞[37]。土壤是一個(gè)復(fù)雜的釋義動(dòng)態(tài)系統(tǒng)，對(duì)各類污染物調(diào)節(jié)作用不盡相同。因此取得當(dāng)?shù)赝寥乐甘緲?biāo)志物顯得十分重要，而其中蚯蚓被認(rèn)為是非常合適的陸地生物生態(tài)毒性測(cè)試的模型[38]。

蚯蚓根據(jù)不同的目的不僅被用作殺蟲劑、重金屬的指示標(biāo)志物(表2)，而且在新型材料毒性檢測(cè)方面也有很廣泛的應(yīng)用。Hu等[44]實(shí)驗(yàn)室研究了多壁碳納米管及吸附材料五氯酚鈉對(duì)赤子愛勝蚓的毒性實(shí)驗(yàn)，試圖說明兩種“捆綁”的化學(xué)物質(zhì)的聯(lián)合毒性。Sforzini等[45]用人造土壤為基質(zhì)背景，比較了微核試驗(yàn)和彗星試驗(yàn)在苯并[a]芘與四氯二苯并-p-二惡英不同濃度下的蚯蚓遺傳毒性。不同的原理以及數(shù)據(jù)信息來源，使得彗星試驗(yàn)?zāi)軌蚺c其他分子診斷技術(shù)聯(lián)合使用，更好的為環(huán)境決策做支撐。

植物彗星試驗(yàn)是彗星試驗(yàn)的另一重要分支，憑借更高的敏感性，樣本的選擇性更強(qiáng)，應(yīng)用規(guī)模更廣的特點(diǎn)同樣得到了研究者的青睞，大量應(yīng)用于土壤環(huán)境的毒性檢測(cè)。1996年Koppen[46]首次提出了植物彗星試驗(yàn)的理念，隨后，國(guó)內(nèi)外研究學(xué)者開始使用植物彗星試驗(yàn)技術(shù)開創(chuàng)出一片新的毒性檢測(cè)領(lǐng)域。林愛軍等[47]采用了機(jī)械分離細(xì)胞核的方法分析了6種不同植物組織細(xì)胞進(jìn)行彗星試驗(yàn)的情況。曹玉偉等[48]對(duì)植物彗星試驗(yàn)的細(xì)胞核分離方法，試驗(yàn)操作進(jìn)行了詳細(xì)介紹，同時(shí)較全面地綜述了其在生態(tài)毒理領(lǐng)域的應(yīng)用及植物修復(fù)機(jī)制。

表2 土壤環(huán)境中彗星試驗(yàn)應(yīng)用研究

3 研究展望

彗星試驗(yàn)是一種較為年輕的方法，潛力還沒有被完全發(fā)掘出來，在不久的將來也許能夠作為標(biāo)準(zhǔn)方法應(yīng)用于環(huán)境生物毒性檢測(cè)。彗星試驗(yàn)與染色體畸變?cè)囼?yàn)和微核試驗(yàn)等技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用研究逐步受到研究者的關(guān)注[49]。此外研究者還嘗試?yán)肍PG彗星試驗(yàn)對(duì)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)DNA損傷指示空氣顆粒物質(zhì)危害[50-51]。

近些年科學(xué)家們對(duì)不同試驗(yàn)室結(jié)果出現(xiàn)的差異化現(xiàn)象，活體內(nèi)(in vivo)、活體外(in vitro)不同染毒方式的區(qū)別等方面投入了大量精力進(jìn)行研究。Godschalk等[52]人通過對(duì)歐洲5個(gè)國(guó)家，12個(gè)不同試驗(yàn)室對(duì)PBMC(外周血單核細(xì)胞)中的FPG(甲酰嘧啶)敏感位點(diǎn)和SB(DNA鏈損傷)進(jìn)行比較，結(jié)果表明前者差異不大，而后者具有顯著性差異。此外還發(fā)現(xiàn)采用統(tǒng)一的細(xì)胞提取手段并不能降低各試驗(yàn)室結(jié)果之間的差異性。這對(duì)2013年ECVAG的相關(guān)研究是進(jìn)一步的印證[53]。而早在2009年Zainol等[54]也嘗試使用自制的標(biāo)準(zhǔn)化方法來降低試驗(yàn)室之間試驗(yàn)結(jié)果的差異性。

彗星試驗(yàn)方法學(xué)的研究從自O(shè)stling和Johanson首次提出彗星試驗(yàn)后始終繼續(xù)著，常用的彗星試驗(yàn)檢測(cè)的是一種綜合毒性，隨著應(yīng)用越來越廣泛，試驗(yàn)對(duì)象越來越復(fù)雜，不同的細(xì)胞，它的提取方式，試驗(yàn)條件的控制都不同，雖然都能得到陰性或陽性的結(jié)果，濃度與結(jié)果的對(duì)應(yīng)關(guān)系，但不同實(shí)驗(yàn)室之間幾乎不能相互定量比較，這些都是試驗(yàn)本身性質(zhì)帶來的局限性。DNA損傷的原因和種類有很多，污染物及其大量衍生物本身會(huì)對(duì)DNA產(chǎn)生復(fù)合損傷，同時(shí)損傷的細(xì)胞會(huì)引發(fā)炎癥等癥狀產(chǎn)生二次損傷[55]，因此很難從結(jié)果去區(qū)別損傷類型或是研究作用機(jī)理。此外，圖像數(shù)據(jù)處理(IA)系統(tǒng)是影響試驗(yàn)結(jié)果差異的重要因素，研發(fā)更準(zhǔn)確，更有效的IA系統(tǒng)也是當(dāng)務(wù)之急。

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◆

The Toxicologic Applications of the Comet Assay in the Aquatic and Soil Environment

Bian Fangjie, Xing Meiyan*, Yang Jian, Sun Wen, Pan Sai

Key Laboratory of Yangtze River Water Environment Ministry of Education, State Key Laboratory of Pollution Control and Resource Reuse, Tongji University, Shanghai 200092, China

Received 6 October 2014 accepted 12 November 2014

The comet assay is a rapid and cost-effective protocol of measuring deoxyribonucleic acid (DNA) damages, highly suitable for almost all eukaryotic cells. Therefore, it is widely used in the field of genetic toxicity, radiation biology, tumor cytology, toxicity detection etc., particularly with wide applications in environment researches due to its high sensitivity and detection of joint toxicity. This paper mainly reviews the development of the comet assay methodology, its experimental principles and applications in the aquatic and soil environment. More importantly, the limited factors and future prospects for the applications of comet assay in this paper are documented to provide a theoretical guidance and reference for popularizing the comet assay.

comet assay; genetic toxicity; DNA damage; pollution assessment; biological monitoring

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金(0400219187)

卞方杰(1991-), 男, 碩士, 研究方向?yàn)榄h(huán)境毒理學(xué), E-mail: bfj222000@126.com

*通訊作者(Corresponding author)， E-mail: xmy5000@163.com

10.7524/AJE.1673-5897-20141006001

2014-10-06 錄用日期：2014-11-12

1673-5897(2015)3-063-08

X171.5

A

邢美燕(1977-)，女，同濟(jì)大學(xué)環(huán)境學(xué)院市政工程博士，副教授，主要研究方向?yàn)槲鬯c廢水處理理論與資源化技術(shù)。

卞方杰, 邢美燕, 楊健, 等. 彗星試驗(yàn)技術(shù)在水生與土壤環(huán)境中的毒理學(xué)應(yīng)用[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào), 2015, 10(3): 63-70

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