包常華，霍 萬(wàn)

（1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)病原生物學(xué)與免疫學(xué)研究所，內(nèi)蒙古 通遼 028000）

宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤，且年新增患者數(shù)達(dá)50余萬(wàn)例，其中80%新增病例發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家［1］。人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，已知的HPV基因型達(dá)100余種，多數(shù)感染者呈現(xiàn)短暫并可自行消失的感染［2］，但少數(shù)型別尤其是高危型別的感染將導(dǎo)致癌前病變或?qū)m頸癌，是宮頸癌發(fā)生的主要病因［3］，因此，HPV感染的基因型檢測(cè)已成為臨床篩查和預(yù)防宮頸癌的重要手段之一，本研究通過(guò)檢測(cè)科爾沁地區(qū)502例婦科門診女性感染的HPV基因型，以期對(duì)我區(qū)宣傳預(yù)防宮頸癌的發(fā)生提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對(duì)象為502例來(lái)我研究所檢驗(yàn)室進(jìn)行HPV分型檢測(cè)的女性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑

DNA提取試劑盒、HPV21導(dǎo)流雜交試劑盒、核酸導(dǎo)流快速雜交儀（凱普生物技術(shù)有限公司）、高速離心機(jī)、PCR儀、水浴箱。

1.2.2 采集標(biāo)本

要求檢測(cè)對(duì)象于檢測(cè)前48h內(nèi)不要做陰道沖洗或陰道內(nèi)使用藥物，月經(jīng)正常的婦女，在月經(jīng)來(lái)潮后10～18d為最佳檢測(cè)時(shí)間，檢測(cè)人員以專用采樣刷采集宮頸脫落細(xì)胞，標(biāo)本于4℃保存，3d內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 提取DNA

吸取500μl標(biāo)本于離心管中，14000rpm離心5min，棄上清液；加溶液Ⅰ400μl于沉淀中，沸水浴15min；再加入 400μl溶液Ⅱ，14000rpm 離心 5min，棄上清液；沉淀即為DNA，60μl無(wú)菌水溶解DNA，備用。

1.2.4 目的片段擴(kuò)增

預(yù)裝24μl反應(yīng)液的PCR管中加入1μl上述DNA溶液進(jìn)行擴(kuò)增，PCR反應(yīng)條件為95℃9min，40個(gè)循環(huán)（94℃ 20s，55℃ 30s，72℃ 30s），72℃ 5min。

1.2.5 導(dǎo)流雜交

450μl雜交液混合20μlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物浸潤(rùn)雜交膜，45℃雜交10min，開泵去除液體；加入封阻液500μl，25℃封阻 5min，開泵去除液體；加入 500μl顯色液，36℃條件下顯色5min后，開泵去除液體，觀察并記錄結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染率

502例檢測(cè)標(biāo)本中病毒感染陽(yáng)性結(jié)果117例，總陽(yáng)性率為23.3%（117/502）。病毒感染陽(yáng)性患者中單一亞型感染率為66.67%（78/117）。多種亞型感染率為33.33%（39/117），其中雙亞型感染率為 25.64%（30/117），三亞型感染率7.69%（9/117），結(jié)果如圖1所示。

圖1 HPV單亞型與多亞型感染率統(tǒng)計(jì)圖Fig.1 The infection rate of HPV single and multiple genotypes

2.2 HPV基因型分布

共檢測(cè)到18種HPV亞型，其中高危型別14種，所占比例為83.24%；低危型別4種，所占比例為16.76%。低危型別中的43、44型和高危型別中的45型未被檢出。感染者中以HPV16、31、6三種亞型多見，所占比例分別為20.95%、12.57%、8.38%，具體統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

表1 科爾沁地區(qū)女性HPV感染亞型統(tǒng)計(jì)Tab.1 Distribution of HPV genotype of female patients in Horqin region

3 討論

宮頸癌是嚴(yán)重危害女性的一種惡性疾病，HPV的特定型別與宮頸癌的發(fā)生存在緊密聯(lián)系［4］，采用基因芯片和導(dǎo)流雜交技術(shù)，能及時(shí)準(zhǔn)確地進(jìn)行病毒感染的檢測(cè)與基因型診斷［5］。本研究結(jié)果表明，502例樣本中共檢出HPV感染117例，總感染率為23.3%，低于臺(tái)州（35.08%）、北京（57.10%）、陽(yáng)泉（35.20%）及鄂州（30.93%）等地區(qū)［6］。本地區(qū)檢測(cè)出HPV感染的亞型處于前幾位的分別為 16、31、6、39、18，與上述地區(qū)相比也存在著區(qū)域性的差異：如臺(tái)州常見亞型為16、11、52，北京常見亞型為 16、58、52，鄂州常見亞型為 16、58、53。綜上結(jié)果表明，本地區(qū)HPV亞型即與其他地區(qū)的常見感染亞型基本類似，又存在著區(qū)域性差異。HPV是宮頸癌的重要致病因素［7］，控制HPV病毒的感染有利于宮頸癌的預(yù)防［8］，因此針對(duì)女性開展定期的HPV檢測(cè)是控制和預(yù)防宮頸癌的重要手段。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)了解科爾沁地區(qū)女性HPV的感染及基因型分布現(xiàn)狀，為在科爾沁地區(qū)開展預(yù)防宮頸癌的宣傳提供理論依據(jù)。

［1］ 邵軍輝，楊琳，龔逞英.新余地區(qū)2273例女性生殖道人乳頭瘤病毒感染狀況分析［J］.甘南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，34（4）：579-581.

［2］ Trottier H, Franco E. The epidemiology of genital human papillomavirus infection［J］. Vaccine，2006，24（Suppl）1：1-15.

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［4］ Michael, Matthew, Singh M, et al. IR microspectroscopy：potentinal application in cervical cancer screening［J］.Cancer lett，2007，246（1-2）：1-11..

［5］ Kin C J, Jeong J K, Park M, et al. HPV oligonuckeotide microarray based detection of HPV genotypes in cervical neoplastic lesions［J］. Gynecol Oncol，2003，89（2）：210-217.

［6］ 包常華，張東麗，劉鑫，等.婦科人乳頭瘤病毒感染基因型分析［J］.激光生物學(xué)報(bào)，2014，23（1）：55-58.

［7］Steben M, Duarte-France E. Human papillomavirus infection：epidemiology and pathophysiology［J］. Gynecol oncol，2007，（107）：2-5.

［8］ 馮陽(yáng)春，張園，黃艷春.高危型人類乳頭狀瘤病毒負(fù)荷量對(duì)宮頸上皮細(xì)胞DNA倍體的影響［J］.中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2012，7（1）：5-7.