趙婷婷　刑鵬　李繼光

·論著·

新型接頭蛋白CARD10在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與意義

趙婷婷刑鵬李繼光

【摘要】目的檢測CARD10(caspase recruitment domain family member 10)蛋白在結(jié)直腸癌組織及其癌旁粘膜組織中的表達(dá)水平，結(jié)合臨床病理資料，探討CARD10與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。方法利用免疫組化方法檢測147例結(jié)直腸癌組織及其癌旁粘膜組織中的CARD10表達(dá)情況，使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果在結(jié)直腸癌組織和癌旁黏膜組織中，CARD10陽性表達(dá)分別為46例(31.29%)和10例(6.80%)，CARD10在結(jié)直腸癌中的表達(dá)上調(diào)(P<0.01)。CARD10在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與腫瘤的TNM分期(P<0.01)、浸潤深度(P<0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.01)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P<0.05)以及Ki-67表達(dá)明顯相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論CARD10在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著腫瘤促進(jìn)因子的作用。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸腫瘤；免疫組織化學(xué)；CARD10

作者單位：110000沈陽，中國醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所

結(jié)直腸癌是世界最常見的腫瘤之一，在所有腫瘤中，結(jié)直腸癌的死亡率位列第二[1]。盡管結(jié)直腸癌根治術(shù)和術(shù)前、術(shù)后放化療已被廣泛應(yīng)用，但結(jié)直腸癌的生存率仍不樂觀。因此，找到更多的結(jié)直腸癌的生物治療靶點十分必要。

轉(zhuǎn)錄因子NF-κB(nuclear factor kappa B)可以上調(diào)多種促癌基因進(jìn)而參與調(diào)控包括結(jié)直腸癌在內(nèi)的多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展[2-6]。溶血磷脂酸LPA(Lysophosphatidic acid)能夠通過結(jié)合G蛋白偶聯(lián)受體進(jìn)而激活核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性[7-8]。近年來有文獻(xiàn)報道新型接頭蛋白CARD10(caspase recruitment domain family,member10)能通過參與LPA-G蛋白偶聯(lián)受體激活NF-κB的過程，進(jìn)而調(diào)控NF-κB的靶基因表達(dá)，從而調(diào)控多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[9-10]。目前，已有文獻(xiàn)報道CARD10的異常表達(dá)與膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤的臨床分期相關(guān)[11-14]，但尚無文獻(xiàn)研究CARD10與結(jié)直腸癌的臨床特點的關(guān)系。因此，在本研究中，我們采用免疫組化技術(shù)檢測CARD10蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平，同時結(jié)合臨床病理資料，進(jìn)一步探討CARD10與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

資料與方法

一、一般資料

本研究收集2006年至2008年中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科切除的結(jié)直腸癌及其癌旁正常粘膜組織標(biāo)本各147例。全部患者均未接受術(shù)前放療或化療，并且有完整的臨床病理資料。組織學(xué)分類根據(jù)WHO組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)劃分，臨床分期根據(jù)第七版結(jié)直腸癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)劃分。所有標(biāo)本均采用武漢博士德公司的SABC法免疫組化試劑盒進(jìn)行染色。簡要過程如下：石蠟包埋組織，常規(guī)切片(4 um)，組織切片常規(guī)脫蠟、水化，雙氧水阻斷內(nèi)源性酶，緩沖液微波修復(fù)，室溫冷卻35分鐘，加入一抗抗人CARD10兔多克隆抗體(1：1000稀釋，Sigma，美國)或抗人Ki-67鼠單克隆抗體(1：500稀釋，Abcam，美國)于濕盒中37℃孵育4小時(PBS為陰性對照),加入二抗,置于濕盒中37℃孵育45分鐘,加入SABC液于濕盒中孵育30分鐘，最后加入后二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液顯色1～2 min,加入蘇木素復(fù)染液中復(fù)染4 min,鹽酸酒精分化,梯度酒精透明，中性樹膠封片。

二、免疫組化結(jié)果判定

CARD10免疫組化染色結(jié)果基于染色強(qiáng)度和染色陽性細(xì)胞比例進(jìn)行綜合評分。評分標(biāo)準(zhǔn)如下。染色強(qiáng)度：細(xì)胞無染色為0分；細(xì)胞呈淺黃色為1分；細(xì)胞呈深黃或深棕色為2分。陽性染色細(xì)胞比例：無陽性染色細(xì)胞為0分；陽性染色細(xì)胞比例1~5%為1分；陽性染色細(xì)胞比例6%~25%為2分；陽性染色細(xì)胞比例26%~75%為3分；陽性染色細(xì)胞比例75~100%為4分。上述兩種判斷標(biāo)準(zhǔn)得分乘積為最終計分結(jié)果：0~3分為陰性表達(dá)；4~8分為陽性表達(dá)。Ki-67免疫組化染色結(jié)果基于陽性染色細(xì)胞比例，陽性染色細(xì)胞比例≥40%為Ki-67陽性表達(dá)，<40%為Ki-67陰性表達(dá)。

三、統(tǒng)計學(xué)方法

利用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。利用卡方檢驗計算CARD10表達(dá)與臨床病理資料的關(guān)系，所有檢驗均以P<0.05為檢驗標(biāo)準(zhǔn)。

結(jié)　　果

免疫組化染色結(jié)果顯示，CARD10蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中(圖1)。在癌旁黏膜組織中，CARD10陽性表達(dá)為10例(6.80%)，與之相反，在結(jié)直腸癌組織中，CARD10陽性表達(dá)為46例(31.29%)。CARD10在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01)?？ǚ綑z驗結(jié)果表明，CARD10在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與腫瘤的TNM分期(P<0.01)、浸潤深度(P<0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.01)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P<0.05)以及Ki-67表達(dá)明顯相關(guān)(P<0.01)，而與性別、年齡、分化程度無明顯相關(guān)性(P>0.05，表1)。從表1可以看出，與CARD10陰性表達(dá)患者相比，CARD10陽性表達(dá)的患者TNM分期及T分期更晚，并且發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和Ki-67陽性的概率增加。

討　　論

大多數(shù)腫瘤均可以觀察到NF-κB的活化，并且活化的NF-κB可以調(diào)控腫瘤的進(jìn)展。據(jù)報道，NF-κB活化后可以調(diào)控腫瘤的增殖、侵襲、遷徙、血管生成、炎癥反應(yīng)、放化療抵抗等[15]。腫瘤中NF-κB活化的途徑是近年來研究的熱點，LPA通過結(jié)合G蛋白偶聯(lián)受體進(jìn)而激活NF-κB的活性是一條經(jīng)典的途徑[7-8]。近年來發(fā)現(xiàn)，CARD10能通過參與LPA-G蛋白偶聯(lián)受體激活NF-κB的過程，實現(xiàn)對NF-κB活性的調(diào)控，進(jìn)而調(diào)控NF-κB的靶基因的表達(dá)[9-11]。因此，研究者們開始注意到CARD10對腫瘤的調(diào)控作用。Xie等報道，在卵巢癌中上調(diào)CARD10的表達(dá)可以通過調(diào)控cyclin D1,cyclin E,and Bcl-2的表達(dá)進(jìn)而增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的增殖活性和化療抵抗能力[16]。Du等報道，在胰腺癌中，下調(diào)腫瘤細(xì)胞的CARD10表達(dá)可以降低細(xì)胞的增殖、遷徙和侵襲能力，并且這種調(diào)控作用是通過NF-κB的靶基因Bcl-10介導(dǎo)的[13]。更重要的是，研究者們發(fā)現(xiàn)了CARD10在腫瘤中的表達(dá)與患者的臨床病理特點有著緊密的聯(lián)系[11-14]。但目前尚無文獻(xiàn)報道CARD10在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與意義。

表1　CARD10的表達(dá)與臨床病理資料關(guān)系表

在本研究中，我們利用免疫組化在107例結(jié)直腸癌組織及癌旁粘膜組織檢測了CARD10的表達(dá)情況并且結(jié)合臨床病理治療進(jìn)行了細(xì)致地分析。我們發(fā)現(xiàn)與癌旁粘膜組織相比，CARD10在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)明顯上調(diào)，提示CARD10可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。進(jìn)而我們研究了CARD10在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況與臨床病理資料的關(guān)系，我們發(fā)現(xiàn)CARD10的表達(dá)與腫瘤的TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及Ki-67表達(dá)明顯相關(guān)。與CARD10陰性表達(dá)患者相比，CARD10陽性表達(dá)的患者TNM分期更晚，浸潤深度更深、并且發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和Ki-67陽性的概率增加。這個結(jié)果進(jìn)一步說明了CARD10參與了對結(jié)直腸癌進(jìn)展的調(diào)控，并且發(fā)揮著腫瘤促進(jìn)因子的作用。這個結(jié)果也提示了CARD10很有可能是結(jié)直腸癌的一個治療靶點。

眾數(shù)周知，TNM分期是結(jié)直腸癌最重要的分期系統(tǒng)，TNM分期與患者預(yù)后極其相關(guān)[17]。同樣，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及Ki-67的表達(dá)狀態(tài)亦是結(jié)直腸癌十分重要的預(yù)后因素[18-20]。鑒于本研究發(fā)現(xiàn)CARD10的表達(dá)與上述4個預(yù)后因素密切相關(guān)，我們推斷CARD10陽性表達(dá)患者與陰性表達(dá)患者有預(yù)后差異，并且CARD10很有可能是結(jié)直腸癌的獨立預(yù)后因素。我們將會在未來的研究中檢驗這一推斷。

CARD10在結(jié)直腸癌中的表達(dá)升高，并且與結(jié)直腸癌的TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及Ki-67表達(dá)明顯相關(guān)，提示CARD10在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著腫瘤促進(jìn)因子的作用。

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(本文編輯：馬天翼)

趙婷婷，刑鵬，李繼光.新型接頭蛋白CARD10在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與意義[J/CD].中華結(jié)直腸疾病電子雜志，2015，4(1)：58-61.

Expression and the significance of caspase recruitment domain family member10 in colorectal cancer

ZHAOTing-ting，XINGPeng，LIJi-guang

.TumorResearchInstituteofChinaMedicalUniversity，Shenyang110013，China.

Correspondingauthor：LIJi-guang，Email：13898829926@163.com.

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and the significance of CARD10(caspase recruitment domain family member 10)in colorectal cancer.MethodsThe expression of CARD10 was detected by immunohistochemistry.The statistic analysis was performed by SPSS 19.0.ResultsOverexpression of CARD10 was found in 46(31.29%)patients and 10(6.80%)patients in colorectal cancer tissues and tumor-adjacent mucosae,respectively.CARD10 was overexpressed in colorectal cancer(P<0.01).Overexpression of CARD10 in colorectal cancer correlated with TNM stage(P<0.01),tumor depth(P<0.05),nodal metastasis(P<0.01),distant metastasis(P<0.05),and Ki-67 status(P<0.01).ConclusionThis study demonstrated that CARD10 may play a role as tumor-promoting factor in colorectal cancer.

【Key words】Colorectal neoplasms；Immunohistochemistry；CARD10

(收稿日期：2015-01-20)

通訊作者：李繼光，Email：13898829926@163.com

基金項目:國家自然科學(xué)基金(81302125)

DOI：10.3877/cma.j.issn.2095-3224.2015.01.13