齊素芬，張華峰，姚 美，程 芳，王正齊，陳思雨

（陜西師范大學(xué)食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院/藥用資源與天然藥物化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/西北瀕危藥材資源開(kāi)發(fā)國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710062）

苯酚-硫酸法測(cè)定花椒葉多糖含量

齊素芬，張華峰*，姚 美，程 芳，王正齊，陳思雨

（陜西師范大學(xué)食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院/藥用資源與天然藥物化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/西北瀕危藥材資源開(kāi)發(fā)國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710062）

建立了一種靈敏、特異、精確定量分析花椒葉多糖的苯酚-硫酸法，采用該方法測(cè)定了陜西大紅袍花椒葉中多糖的含量。該方法選擇半乳糖作為標(biāo)準(zhǔn)單糖，484 nm為工作波長(zhǎng)。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化得到了較佳顯色反應(yīng)條件是加樣次序?yàn)楸椒?樣品-濃硫酸，顯色溫度為25℃，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚添加量為0.3 mL，濃硫酸添加量為3.5 mL，顯色時(shí)間為30 min。系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)顯示該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0127x-0.0076（R2=0.997），線性范圍為10.00～60.00 μg/mL，LOD和LOQ分別為2.08 μg/mL和6.30 μg/mL，日內(nèi)、日間精密度分別在0.49%～3.64%，5.17%～6.05%之間，平均回收率為101.19%。樣品溶液在顯色反應(yīng)后的2 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。測(cè)定發(fā)現(xiàn)陜西大紅袍花椒葉中w（多糖）在8.11～8.89 mg/g之間。該方法為花椒葉多糖的定量分析和花椒葉資源的開(kāi)發(fā)利用提供了參考。

花椒葉；多糖；苯酚-硫酸法；顯色反應(yīng)

蕓香科（Rutaceae）花椒屬（Zanthoxylum）植物花椒（Zanthoxylum bungeanum）的果皮是重要的傳統(tǒng)香料，在我國(guó)的種植面積約有21萬(wàn)hm2［1］。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)花椒果皮中揮發(fā)性芳香油、生物堿、香豆素、類黃酮等的開(kāi)發(fā)利用進(jìn)行了廣泛研究［2-3］，但是對(duì)花椒葉資源的研究相對(duì)較少［1］?；ń啡~中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪、維生素、類黃酮等多種營(yíng)養(yǎng)素和生物活性物質(zhì)，在陜西省渭南市等很多地區(qū)作為蔬菜食用，但是目前對(duì)花椒葉多糖的研究卻較鮮見(jiàn)［1］。我們實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)，花椒葉粗多糖具有抗氧化活性。準(zhǔn)確測(cè)定花椒葉多糖的含量，系統(tǒng)分析花椒葉多糖的生物活性，對(duì)于花椒資源的科學(xué)開(kāi)發(fā)和綜合利用具有一定的積極意義。植物多糖的定量分析方法包括苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法和地衣酚-硫酸法等，其中最常用的方法是苯酚-硫酸法［4-6］。該方法的原理是利用多糖在濃硫酸作用下水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛衍生物進(jìn)而和苯酚縮合成有色化合物，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)單糖在490 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行比色分析。該方法操作簡(jiǎn)便，快捷靈敏，無(wú)須大型儀器，但是其準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性受實(shí)驗(yàn)條件（如顯色反應(yīng)）的影響較大［5-6］。為了給花椒葉多糖的定量分析和花椒葉資源的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)，本研究對(duì)苯酚-硫酸法的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化，然后采用系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了方法學(xué)評(píng)價(jià)，最終建立了靈敏、特異、精確的花椒葉多糖定量分析方法，并運(yùn)用該方法測(cè)定了陜西大紅袍花椒葉中多糖的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

TU-1810型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；DL-4C型低速大容量離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；HH-2型恒溫水浴鍋，北京科偉永興儀器有限公司；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海安亭實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；BS224S型分析天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

葡萄糖、半乳糖、甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品，純度為99%，購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；無(wú)水乙醇、95%乙醇、丙酮、濃硫酸、苯酚等，分析純，國(guó)產(chǎn)試劑；蒸餾水，陜西師范大學(xué)自制。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集與處理

1.2.1.1 花椒葉的前處理

花椒葉2014年5～8月份采自陜西省渭南市?；ń啡~經(jīng)挑選（除去莖、葉柄和雜物）后清洗、晾干，然后粉碎、過(guò)篩（80～100目）、烘干（50～60℃），置密閉容器中避光保存。

1.2.1.2 花椒葉多糖的提取

準(zhǔn)確稱取10 g花椒葉粉末，置250 mL錐形瓶中，加入200 mL蒸餾水，浸泡過(guò)夜，然后置80℃水浴中提取4 h，抽濾并收集濾液，濾渣重復(fù)浸提2次，合并濾液。將所得濾液蒸發(fā)濃縮后加入4倍量體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，室溫下沉淀過(guò)夜，在4000r/min下離心10 min得到沉淀。將沉淀移至10 mL離心管中，依次用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇、95%的乙醇、無(wú)水乙醇和丙酮進(jìn)行漂洗，然后揮干溶劑，在30～40℃烘干至恒重，碾成粉末即得花椒葉多糖樣品。比色測(cè)定時(shí)將多糖樣品配制成ρ為0.05 mg/mL的水溶液（多糖溶液）。

1.2.2 方法建立與優(yōu)化

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)單糖和工作波長(zhǎng)的確定

按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%苯酚0.3 mL、多糖溶液1.0 mL、濃硫酸2.0 mL的比例加樣，混勻后在室溫下顯色20 min，在250～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描；分別用葡萄糖、半乳糖、甘露糖3種單糖溶液替代多糖溶液，顯色后進(jìn)行掃描。通過(guò)比較單糖、多糖的吸收光譜確定標(biāo)準(zhǔn)單糖和工作波長(zhǎng)。

1.2.2.2 加樣次序的確定

測(cè)定不同樣品添加順序（樣品-苯酚-濃硫酸、樣品-濃硫酸-苯酚、濃硫酸-樣品-苯酚、濃硫酸-苯酚-樣品、苯酚-樣品-濃硫酸、苯酚-濃硫酸-樣品）對(duì)吸光度的影響，以確定較佳加樣次序。加樣量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%苯酚0.3 mL、多糖溶液1.0 mL、濃硫酸2.0 mL。顯色溫度為室溫，顯色時(shí)間20 min。

1.2.2.3 顯色時(shí)間對(duì)吸光度的影響

按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%苯酚0.3 mL、多糖溶液1.0 mL、濃硫酸2.0 mL的比例依次加樣，混勻后在室溫下分別顯色5，10，20，25，30 min，測(cè)定吸光度。1.2.2.4 濃硫酸添加量對(duì)吸光度的影響

按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%苯酚為0.3 mL，多糖溶液為1.0 mL，濃硫酸分別為1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL的比例依次加樣?；靹蚝笤谑覝叵嘛@色25 min，測(cè)定吸光度。

1.2.2.5 苯酚添加量對(duì)吸光度的影響

在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚分別為0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL的條件下，依次加入多糖溶液1.0 mL、濃硫酸3.5 mL，室溫下顯色2 5min，測(cè)定吸光度。

1.2.2.6 顯色溫度對(duì)吸光度的影響

按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%苯酚0.2 mL、多糖溶液1.0 mL、濃硫酸3.5 mL的比例依次加樣，混勻后分別在10，20，30，40，50℃下顯色25 min，測(cè)定吸光度。

1.2.2.7 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)上述單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇顯色時(shí)間、濃硫酸添加量、質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%苯酚添加量、顯色溫度4個(gè)變量進(jìn)行四因素三水平正交試驗(yàn)，確定較優(yōu)組合條件。每組實(shí)驗(yàn)設(shè)2個(gè)重復(fù)。

1.2.3 方法考察與評(píng)價(jià)

1.2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確配制ρ分別為5.00，10.00，20.00，30.00，40.00，50.00，60.00 μg/mL的半乳糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%苯酚0.3 mL、半乳糖標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL、濃硫酸3.5 mL的比例加樣，混勻后在25℃顯色30 min，在484 nm處測(cè)定吸光度。每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)重復(fù)。

1.2.3.2 LOD和LOQ的測(cè)定

參照Rolim等［7］的方法測(cè)定LOD和LOQ。

1.2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

參照Shabir［8］的方法連續(xù)3天重復(fù)測(cè)定高、低兩種濃度花椒葉多糖溶液中多糖的含量，計(jì)算日內(nèi)精密度（n=5）和日間精密度（n=15）。

1.2.3.4 回收率實(shí)驗(yàn)

參照Rolim等［7］的方法將一定量的高、低兩個(gè)濃度水平的半乳糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（ρ分別為30.00、50.00 μg/mL）與已知濃度花椒葉多糖溶液混合，顯色后測(cè)定吸光度和總糖含量，計(jì)算加標(biāo)回收率。

1.2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取一定量的花椒葉多糖溶液，在最佳顯色反應(yīng)條件下比色測(cè)定吸光度。每隔1 min測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定10次以考察儀器穩(wěn)定性；每隔10 min測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定2 h以考察溶液穩(wěn)定性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)單糖與工作波長(zhǎng)的選擇

在250～600 nm波長(zhǎng)下掃描花椒葉多糖與葡萄糖、半乳糖、甘露糖3種單糖顯色后溶液的光譜曲線見(jiàn)圖1，可以發(fā)現(xiàn)花椒葉多糖的最大吸收峰對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)不是490 nm，而是484 nm。3種單糖中，半乳糖與花椒葉多糖的最大吸收波長(zhǎng)最為接近，因此選擇半乳糖作為標(biāo)準(zhǔn)單糖。由于花椒葉多糖在484 nm處有最大吸收峰，而半乳糖在484 nm處的吸光度也較高，因此選擇484 nm作為最佳吸收波長(zhǎng)。這樣就避免了傳統(tǒng)方法以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)單糖、以490 nm為工作波長(zhǎng)而使方法的特異性和靈敏度受到影響的弊端。

圖1 花椒葉多糖（下）與半乳糖（上）的掃描光譜Fig.1 Absorption spectra of polysaccharides from Zanthoxylum bungeanum leaves（lower spectrum）and galactose standard（upper spectrum）

2.2 顯色反應(yīng)條件的優(yōu)化

2.2.1 加樣次序

加樣次序?qū)ξ舛鹊挠绊懸?jiàn)圖2，加樣次序?qū)ξ舛染哂忻黠@影響。先加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚，再加入花椒葉多糖溶液，后加入濃硫酸，顯色后溶液的吸光度最高。故選擇苯酚-樣品-濃硫酸為較佳加樣次序。

2.2.2 顯色時(shí)間

在5～25 min范圍內(nèi)，隨著顯色時(shí)間的延長(zhǎng)吸光度呈現(xiàn)緩慢增加的趨勢(shì)，超過(guò)25 min時(shí)吸光度開(kāi)始緩慢下降，見(jiàn)圖3，因此顯色時(shí)間應(yīng)該保持在25 min左右。

2.2.3 濃硫酸添加量

濃硫酸添加量對(duì)吸光度的影響見(jiàn)圖4，當(dāng)濃硫酸添加量在1.0～3.5 mL區(qū)間時(shí)，吸光度隨著濃硫酸添加量的增加而增大，當(dāng)濃硫酸添加量為3.5 mL時(shí)吸光度最大，此后吸光度開(kāi)始減小，這可能是因?yàn)闈饬蛩嵩陲@色過(guò)程中的作用既是強(qiáng)酸，又是催化劑，如果添加量過(guò)多，則會(huì)引起被測(cè)物質(zhì)化學(xué)解離狀態(tài)及其顯色配合物組成的改變，從而影響有色配合物的吸收光譜。綜上，濃硫酸添加量控制在3.5 mL為宜。

圖2 加樣次序?qū)ξ舛鹊挠绊慒ig.2 Effect of addition sequences on absorbance

圖3 顯色時(shí)間對(duì)吸光度的影響Fig.3 Effect of hromogenic reaction timeon absorbance

2.2.4 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚添加量

苯酚添加量對(duì)吸光度的影響見(jiàn)圖5，苯酚添加量過(guò)多、過(guò)少都會(huì)使吸光度降低，當(dāng)苯酚添加量為0.2 mL時(shí)，吸光度最高，因此，苯酚添加量應(yīng)當(dāng)為0.2 mL左右。

2.2.5 顯色溫度

顯色溫度對(duì)吸光度的影響見(jiàn)圖6，當(dāng)溫度為30℃時(shí)吸光度最大，高于或低于30℃時(shí)吸光度均較小，其原因可能是溫度過(guò)低顯色反應(yīng)速度較慢，溫度過(guò)高顯色配合物的結(jié)構(gòu)容易遭到破壞，因此顯色溫度應(yīng)該維持在30℃左右。

圖4 濃硫酸添加量對(duì)吸光度的影響Fig.4 Effect of amount of concentrated sulfuric acid on absorbance

圖5 質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的苯酚添加量對(duì)吸光度的影響Fig.5 Effect of amount of 5%phenol on absorbance

表1 四因素三水平正交試驗(yàn)結(jié)果及極差分析Tab.1 Results and range analysis of orthogonal test of four factors at three levels

圖6 顯色溫度對(duì)吸光度的影響Fig.6 Effect of temperature of chromogenic reaction on absorbance

2.2.6 正交試驗(yàn)

測(cè)定的正交試驗(yàn)結(jié)果和分析見(jiàn)表1和表2。由表1的極差分析和表2的方差分析可知，顯色溫度（A）、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚添加量（B）、濃硫酸添加量（C）、顯色時(shí)間（D）對(duì)吸光度均有顯著影響（P＜0.01），影響大小依次為C＞B＞D＞A。

由極差分析可知，較優(yōu)組合條件為A1B3C2D3，即顯色溫度為25℃、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚添加量為0.3 mL、濃硫酸添加量為3.5 mL、顯色時(shí)間為30 min。在9組正交試驗(yàn)中，第9組實(shí)驗(yàn)的吸光度最高。理論優(yōu)化所得較優(yōu)組合條件（A1B3C2D3）與第9組實(shí)驗(yàn)條件（A3B3C2D1）中C、B兩個(gè)影響較大的因素均處于相同水平，提示較優(yōu)組合條件是符合邏輯的。由于較優(yōu)條件（A1B3C2D3）在9組正交試驗(yàn)中沒(méi)有出現(xiàn)，因此按照該條件進(jìn)行了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)吸光度顯著高于9組正交試驗(yàn)的吸光度（P＜0.05），說(shuō)明理論優(yōu)化得到的較優(yōu)組合條件（A1B3C2D3）是切實(shí)可行的。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果

以半乳糖標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、吸光度（y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖7，回歸方程為y=0.012 7x-0.007 6，相關(guān)系數(shù)R2=0.997（圖7）。當(dāng)半乳糖標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為5.00 μg/mL時(shí)，精密度和準(zhǔn)確度較差；標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù)分析見(jiàn)表3，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度在10.00～60.00 μg/mL時(shí)，精密度和準(zhǔn)確度較好。因此，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為10.00～60.00 μg/mL。

表2 正交試驗(yàn)方差分析Tab.2 Variance analysis of orthogonal test

圖7 半乳糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.7 Standard curve of galactose

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù)分析Tab.3 Analysis of standard curve

2.3.2 LOD和LOQ的確定結(jié)果

此方法的LOD和LOQ測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。由表4可知，LOD和LOQ分別為2.08 μg/mL和6.30 μg/mL。

表4 LOD與LOQTab.4 Limits of detection and quantification

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

方法的精密度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。由表5可知，當(dāng)花椒葉多糖溶液中多糖ρ在15.72～31.70 μg/mL范圍時(shí)，日內(nèi)精密度在0.49%～3.64%之間，日間精密度在5.17%～6.05%之間，可以滿足花椒葉多糖的定量分析要求。

2.3.4 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

不同濃度水平的加標(biāo)回收率在96.48%～ 105.90%之間（數(shù)據(jù)未顯示），平均回收率為101.19%，符合定量分析相關(guān)要求［8］。

2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

儀器穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表6和表7。由表6和表7可知，儀器穩(wěn)定性較高（RSD=0.80%），樣品溶液在顯色反應(yīng)后的2h內(nèi)也基本穩(wěn)定（RSD= 1.03%），說(shuō)明該方法可用于花椒葉多糖的精密、便捷檢測(cè)。

表5 精密度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Tab.5 Results of precision test

表6 儀器穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Tab.6 Results of instrument stability

表7 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Tab.7 Results of stability of colored sample solution

2.4 驗(yàn)證測(cè)定

為了驗(yàn)證本研究建立的苯酚-硫酸法的實(shí)用性，應(yīng)用該方法測(cè)定了陜西大紅袍花椒的頂端葉、中層葉和底部葉中多糖的含量，發(fā)現(xiàn)花椒葉中w（多糖）在8.11～8.89 mg/g之間，不同植株之間沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）。

表8 陜西大紅袍花椒葉多糖含量測(cè)定Tab.8 Determination of polysaccharides in leaves of Dahongpao（a cultivar of Z.bungeanum in Shaanxi province）

3 結(jié) 語(yǔ)

本研究通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化了顯色時(shí)間、濃硫酸添加量、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的苯酚添加量、顯色溫度等實(shí)驗(yàn)條件，采用系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)考察了新方法的LOD、LOQ、精密度和回收率等，建立了一種靈敏、特異、精確測(cè)定花椒葉多糖含量的新方法，并測(cè)定了陜西大紅袍花椒葉的多糖含量，為花椒葉多糖的精確定量和花椒葉資源的深度開(kāi)發(fā)提供了依據(jù)。

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Development and Application of Phenol-sulfuric acid Method for Determination of Polysaccharides in Zanthoxylum Bungeanum Leaves

QI Sufen，ZHANG Huafeng*，YAO Mei，CHENG Fang，WANG Zhengqi，CHEN Siyu
（College of Food Engineering and Nutritional Science/Key Laboratory of Ministry of Education for Medicinal Resources and Natural Pharmaceutical Chemistry/National Engineering Laboratory for Resources Development of Endangered Crude Drugs in Northwest China，Shaanxi Normal University，Xi'an 710062，China）

A sensitive，specific，accurate and precise phenol-sulfuric acid method was established for quantitative assay of polysaccharides in Zanthoxylum bungeanum leaves.And polysaccharides in leaves of Dahongpao，a cultivar of Z.bungeanum in Shaanxi province，were successfully determinated by the proposed phenol-sulfuric acid method.Galactose was used as standard monosaccharide and 484nm was chosen as working wavelength.The optimum conditions for chromogenic reaction were obtained by single factor experiments and orthogonal test:addition sequence，phenol-sample-concentrated sulfuric acid；temperature of chromogenic reaction，25℃；amount of 5%phenol，0.3 mL；amount of concentrated sulfuric acid，3.5 mL；and duration of chromogenic reaction，30 min.System suitability test indicated that regression equation of standard curve was y=0.012 7x-0.007 6（R2=0.997）and range with satisfactory accuracy and precision was 10.00-60.00 μg/mL.LOD and LOQ were 2.08 μg/mL and 6.30 μg/mL，respectively.Intra-and inter-day precision varied from 0.49%to 3.64%and from 5.17%to 6.05%，respectively.And mean recovery was 101.19%.The colored sample solution was stable within 2 h.The content of polysaccharides in Dahongpao leaves in Shaanxi province，was in the range of 8.11-8.89 mg/g. The developed colorimetric method provides a basis for quantification of polysaccharides from Z.bungeanum leaves and exploitation of leaf resources.

Zanthoxylum bungeanum leaves；polysaccharides；phenol-sulfuric acid method；chromogenic reaction

李 寧）

TS207.3

A

10.3969/j.issn.2095-6002.2015.04.008

2095-6002（2015）04-0040-07

齊素芬，張華峰，姚美，等.苯酚-硫酸法測(cè)定花椒葉多糖含量［J］.食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào)，2015，33（4）:40-46.

QI Sufen，ZHANG Huafeng，YAO Mei，et al.Development and application of phenol-sulfuric acid method for determination of polysaccharides in Zanthoxylum bungeanum leaves［J］.Journal of Food Science and Technology，2015，33（4）:40-46.

2014-07-14

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（GK201302048）；陜西省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（cx13063）。

齊素芬，女，學(xué)士，研究方向?yàn)樗幨硟捎弥参镔Y源開(kāi)發(fā)與利用；

*張華峰，男，副教授，博士，主要從事食品營(yíng)養(yǎng)與安全方面的研究。

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