喻 芳 任靜妮 龔肖清 張倍銘 朱 江 黃湘婷 王 馨 梁睿熙 辛麗梅

貴州省人口和計(jì)劃生育科學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)所（貴陽(yáng)，550004）

親子鑒定主要是通過(guò)對(duì)遺傳基因的檢測(cè)，根據(jù)孟德?tīng)栠z傳規(guī)律判定被檢者之間是否存在生物學(xué)親生關(guān)系。短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）的應(yīng)用極大地提高了親子鑒定能力［1］，已成為親子鑒定的主要手段［2］，但與傳統(tǒng)的遺傳標(biāo)記（如紅細(xì)胞血型、酶型和血清蛋白型等）相比，STR基因座突變率較高［2－3］，遺傳突變使親子之間的遺傳關(guān)系不符合遺傳規(guī)律；當(dāng)爭(zhēng)議父（母）與真父（母）有血緣關(guān)系時(shí)，爭(zhēng)議父（母）與孩子之間（如祖孫、叔侄、姨甥等）就會(huì)有同源基因，而且血緣越近，有同源基因的STR基因座就會(huì)越多。這種情況下就會(huì)給親子鑒定尤其是單親案件的分析鑒定帶來(lái)困難?，F(xiàn)就本單位受理的兩例典型案例作一淺析。

1 資料背景

1.1 資料

2例親子鑒定案例均系紀(jì)檢部門委托，案例1要求鑒定爭(zhēng)議父1和爭(zhēng)議父2與孩子的親生血緣關(guān)系，爭(zhēng)議父1和爭(zhēng)議父2是親兄弟；案例2要求鑒定父母與孩子親生血緣關(guān)系，有領(lǐng)養(yǎng)其親戚小孩的背景。

1.2 方 法

應(yīng)用無(wú)錫中德美聯(lián)公司 AGCU EX－22、21＋1加上性別基因共40個(gè)STR基因座，用Genomappe軟件將等位基因標(biāo)準(zhǔn)Ladder中的片段與樣本進(jìn)行比較，確定樣本的基因分型。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》（SF／Z JD0105001－2010），3個(gè)以上基因座不符合遺傳規(guī)律可排除親權(quán)關(guān)系，若基因座符合遺傳規(guī)律，計(jì)算親權(quán)指數(shù)PI，累計(jì)親權(quán)指數(shù)CPI≥10000支持親權(quán)關(guān)系存在；“二聯(lián)體親權(quán)指數(shù)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)”、“二聯(lián)體中存在不符合遺傳規(guī)律的遺傳標(biāo)記時(shí)親權(quán)指數(shù)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)”參照《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》和單親案鑒定的判斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。

2 結(jié)果

2.1 案 例1

STR基因座分型見(jiàn)表1。從表1檢測(cè)結(jié)果分析，AGCU EX22STR復(fù)合擴(kuò)增體系結(jié)果顯示爭(zhēng)議父1排除2個(gè)位點(diǎn)，不能下排除結(jié)論；爭(zhēng)議父2在vWA基因座不符合遺傳規(guī)律，通常會(huì)考慮發(fā)生突變，按突變基因座計(jì)算 PI值，CPI 3.2146E＋04＞10000，可下認(rèn)定親權(quán)關(guān)系。但因考慮到爭(zhēng)議父1、父2是親兄弟關(guān)系，僅做AGCU EX22STR復(fù)合擴(kuò)增體系下結(jié)論有風(fēng)險(xiǎn)，我們加做AGCU 21＋1體系，40個(gè)STR基因座分型結(jié)果顯示爭(zhēng)議父1排除3個(gè)位點(diǎn)以上，可排除爭(zhēng)議父1；爭(zhēng)議父2僅一個(gè)位點(diǎn)不符合，按突變基因座計(jì)算PI值，累計(jì)親權(quán)指數(shù) ＞10000，不排除親生關(guān)系，支持親權(quán)關(guān)系存在。

2.2 案 例2

STR基因座分型見(jiàn)表2。從表2檢測(cè)結(jié)果分析，爭(zhēng)議父很明顯排除親緣關(guān)系，爭(zhēng)議母在AGCU EX22體系中只排除2個(gè)位點(diǎn)，不能下排除結(jié)論。慮到爭(zhēng)議母和孩子親生母親有可能具有血緣關(guān)系，我們加做AGCU21＋1后排除位點(diǎn)達(dá)3個(gè)以上，可下排除結(jié)論。

表1 爭(zhēng)議父1、父2和孩子40個(gè)STR基因座分型結(jié)果

表2 爭(zhēng)議父、母和孩子40個(gè)STR基因座分型結(jié)果

3 討論

在單親親子鑒定時(shí)，由于父子（或母子）組合缺少母親（或父親）的遺傳信息，勢(shì)必在排除信息親權(quán)指數(shù) （似然率）和RCP值等方面都要低于父、母、子組合的親子鑒定，影響到親子鑒定的準(zhǔn)確性。而且，在實(shí)踐中經(jīng)常會(huì)遇到是爭(zhēng)議父（或母）和孩子親生父（或母）具有較近的血緣關(guān)系，若不注意咨詢委托方或當(dāng)事人，很可能將面臨的是具有血緣關(guān)系且是單親的親子鑒定，如果再遇上有突變位點(diǎn)，將面臨較大風(fēng)險(xiǎn)。

STR基因座具有高度多態(tài)性，有很高的非父排除率，同時(shí)STR的突變率也很高，使本來(lái)是親生的父子之間也會(huì)出現(xiàn)不符合遺傳規(guī)律的現(xiàn)象（即出現(xiàn)矛盾基因座），使得解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果變得困難。在實(shí)施親子鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)矛盾基因座現(xiàn)象時(shí)，需要設(shè)法確定是突變?cè)斐傻模€是被檢查者之間本來(lái)就不存在親生關(guān)系（特別是具有血緣關(guān)系單親案件），也是用STR進(jìn)行親子關(guān)系鑒定可能潛在錯(cuò)誤的原因之一。如果所檢驗(yàn)的男子（或者女子）與孩子的真父（母）可能有親緣關(guān)系時(shí)，會(huì)減少矛盾基因座的數(shù)量。有血緣關(guān)系時(shí)，爭(zhēng)議父（母）與孩子之間（如祖孫、叔侄、姨甥等）就會(huì)有同源基因，而且血緣越近有同源基因的STR基因座就會(huì)越多。本文案例1爭(zhēng)議父1和爭(zhēng)議父2在AGCU EX22STR復(fù)合擴(kuò)增體系有20個(gè)同源基因，因此，鑒定時(shí)要充分考慮到血緣關(guān)系的影響再下結(jié)論。

STR產(chǎn)生突變的機(jī)制是復(fù)制時(shí)的模板滑動(dòng)。突變時(shí)產(chǎn)生1個(gè)重復(fù)單位的變化占突變總數(shù)的90%以上［6］。如果在矛盾基因座上爭(zhēng)議父所能提供的等位基因和孩子的生父基因之間相差超過(guò)1個(gè)重復(fù)單位，更傾向于排除他們之間有親生關(guān)系。父系突變高于母系突變（相差約6倍），在母子親權(quán)鑒定時(shí)應(yīng)該應(yīng)用不同的策略。

因此，在受理親子鑒定司法案件時(shí)，盡量要求提供父、母樣本。單親親子鑒定應(yīng)檢驗(yàn)更多的STR基因座，若遇到有STR突變不要輕易下排除，有血緣關(guān)系時(shí)不要輕易下肯定。單親案在無(wú)法否定爭(zhēng)議父或爭(zhēng)議母是真父或真母的近親屬時(shí)，即使沒(méi)有發(fā)現(xiàn)矛盾基因座，也只作出“不排除親生關(guān)系”的結(jié)論。單親案鑒定起碼要檢測(cè)18個(gè)STR基因座以上，若發(fā)現(xiàn)矛盾基因座，要增加檢測(cè)至≥40個(gè)。按公式計(jì)算PI值＞10 000后，才可以做出“不排除親生關(guān)系”或“支持存在親生關(guān)系”的結(jié)論；若發(fā)現(xiàn)3個(gè)以上矛盾基因座，則應(yīng)作出否定“親生關(guān)系”的結(jié)論［4］。目前法醫(yī)學(xué)廣泛使用的 Powerplex、IdentifilerTM、SinofilerTM、DNATyper TM15Plus、ACGU EX22、基點(diǎn)20A復(fù)合擴(kuò)增體系均具有較高的個(gè)體識(shí)別率和非父排除率，通常檢測(cè)這些試劑盒的STR基因座已能基本滿足法醫(yī)物證中個(gè)體識(shí)別和親子鑒定的檢測(cè)要求，但在單親鑒定出現(xiàn)了突變、有血緣關(guān)系可能的案件中，我們的經(jīng)驗(yàn)通常若只單做一個(gè)STR試劑盒或加做以上常用STR試劑盒很難下結(jié)論，因?yàn)樗麄兌加?3個(gè)CODIS基因座重復(fù)，加做ACGU 21＋1擴(kuò)增體系，往往可提高系統(tǒng)效能，滿足鑒定需求［7］。

［1］ Collete D，Sabine F，ceclle F，et al.A comprehensive genetic map of the human genome based on 5264microsatellites［J］.Nature，1996，380（14）：152－154.

［2］ America Association of Blood Banks.Annual report summary for testing in 2002 ［DB／OL］.http：／／www.aabb.org／about＿the＿AABB／stds＿and＿Accred／ptannrpt02.pdf.2003－11－01.

［3］ Brinkman B，klintschar M，Neuhuber F，et al.Mutation rate in human microsatellites：influence of the structureand length of the tandem repeat［J］.Am J Hum Genet，1998，62（6）：1408－1415.

［4］ 伍新堯，童大躍，朱運(yùn)良，等.用STR分型技術(shù)作親權(quán)鑒定時(shí)判斷標(biāo)準(zhǔn)的研究 ［J］.中山大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，31（1）：1－6.

［5］ 侯一平，吳瑾，顏靜，等.考慮突變影響的親子鑒定父權(quán)指數(shù)計(jì)算［J］.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2008，25（2）：176－178.

［6］ 朱運(yùn)良，黃艷梅，伍新堯，等.單親案親權(quán)鑒定結(jié)果判定策略［J］.法醫(yī)學(xué)雜志，2006，22（4）：281－284.

［7］ 邵偉波，張素華，李莉，等.21個(gè)非CODIS STR基因座的遺傳多態(tài)性 ［J］.法醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（1）：36－38.