張靜平　洪　穎

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150例宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)患者HPV感染型別的研究及隨診

張靜平洪穎

[摘要]目的探討南京鼓樓醫(yī)院宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)(CINⅠ)人乳頭瘤病毒(HPV)感染的分型情況及其轉(zhuǎn)歸。方法回顧性研究2010年至2012年在南京鼓樓醫(yī)院確診的CINⅠ患者，采用凱普核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)對(duì)HPV進(jìn)行分型。定期隨診(每半年1次，持續(xù)2年)，隨診項(xiàng)目包括宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(TCT)、第二代基因雜交捕獲(HC-II)檢測(cè)HPV(人乳頭瘤病毒)。結(jié)果①CINⅠ患者以HPV單一高危型感染為主，150例CINⅠ患者，HPV陽性的患者134例(89.33%),HPV檢測(cè)陰性16例(10.67%)。單一高危型別感染86例(57.33%)，多重感染46例(30.67%)，單一低危型別感染2例(1.33%)。②CINⅠ中HPV陽性的患者134例，其中單一感染者88例(65.67%)，雙重感染30例(22.39%)，三重感染10例(7.46%)，四重感染6例(4.48%)；③HPV52、58、16感染率最高，分別占HPV陽性患者中的27.61%、17.16%、15.67%。④隨訪過程中，150例CINⅠ患者1年轉(zhuǎn)陰率達(dá)62.00%，2年轉(zhuǎn)陰率達(dá)80.00%，病程持續(xù)2年及病理升級(jí)的占20.00%，其中病理升級(jí)者占所有患者的12.67%。 結(jié)論HPV以單一高危型感染為主，其中以HPV52、58、16亞型感染率最高。但在病變持續(xù)及進(jìn)展病例中，以HPV16及18亞型感染率最高。HPV多重感染可能會(huì)導(dǎo)致病毒清除時(shí)間的延長，是否增加病理升級(jí)的風(fēng)險(xiǎn)，需待大樣本進(jìn)一步調(diào)查研究。

[關(guān)鍵詞]人乳頭瘤病毒分型；宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)；隨診

宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性健康的婦科惡性腫瘤之一。近年來，宮頸癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)且發(fā)病年齡趨于年輕化[1]。宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是與子宮頸浸潤癌密切相關(guān)的一組宮頸病變，包括CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ，反映了子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程，通過篩查發(fā)現(xiàn)CIN，及時(shí)治療高級(jí)別病變，是預(yù)防子宮頸癌行之有效的措施。人乳頭瘤病毒(HPV)的持續(xù)感染是導(dǎo)致癌前病變，形成宮頸癌的主要病因[2]，人乳頭狀瘤病毒感染是宮頸癌發(fā)生的先決必要條件[3]，接近90%的CIN和99%以上的宮頸癌伴有人乳頭瘤病毒感染[4]。在某些發(fā)達(dá)國家，宮頸癌篩查已逐步開始向HPV檢測(cè)與細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合篩查轉(zhuǎn)化。由于多數(shù)HPV感染為一過性，可以被機(jī)體自動(dòng)清除，因此，以HPV-DNA檢測(cè)為基礎(chǔ)的篩查必然造成一定程度的假陽性，引起HPV陽性婦女的恐慌和衛(wèi)生資源的浪費(fèi)。目前，國內(nèi)外已開始使用其他生物標(biāo)志物分流HPV陽性人群[5-7]。本文對(duì)鼓樓醫(yī)院婦科經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為C1NⅠ的150例患者進(jìn)行HPV分型檢測(cè)，研究不同亞型HPV感染在CINⅠ中的發(fā)生率及其對(duì)CINⅠ患者轉(zhuǎn)歸的影響，以明確CINⅠ病變持續(xù)及進(jìn)展的高危亞型，盡早做出診治，預(yù)防子宮頸癌的發(fā)生。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2010年1月1日至2012年7月1日在南京市鼓樓醫(yī)院婦產(chǎn)科，經(jīng)組織病理學(xué)確診為CINⅠ的150名患者為研究對(duì)象(去除妊娠者，此前宮頸手術(shù)者)，年齡23～73歲，平均(42.2±3.45)歲，回顧分析其HPV分型。

1.2方法取樣避開月經(jīng)期，3 d內(nèi)沒有陰道內(nèi)用藥或沖洗，24 h內(nèi)無性生活；擴(kuò)陰器充分暴露宮頸，棉拭子擦去宮頸口過多的分泌物，宮頸刷在宮頸口順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈，取出放入專用HPV采樣管中；4℃保存，在2周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。HPV-DNA分型測(cè)定采用凱普生物工程有限公司提供的人乳頭瘤病毒分型檢測(cè)試劑盒。

通過提取臨床樣本病毒DNA，經(jīng)過PCR擴(kuò)增，利用導(dǎo)流雜交平臺(tái)，在已經(jīng)固定好核酸探針的低密度基因芯片上雜交、顯色、診斷脫落細(xì)胞標(biāo)本中的21種HPV病毒DNA分子的存在。21種常見型別精確分型檢測(cè)包括，15種高危型別：HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,53，56,58,59,66,68；6種低危型別：HPV6,11,42,43,44，CP8304(81)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中部分采用統(tǒng)計(jì)學(xué)描述的方法，計(jì)數(shù)資料用率表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1CINⅠ中HPV感染率150例CINⅠ患者，HPV陽性的患者134例(89.33%)，HPV檢測(cè)陰性16例(10.67%)。HPV陽性的患者中單一感染者88例(88/150，58.67%)，其中單一高危型別感染86例(86/150，57.33%)，單一低危型別感染2例(2/150，1.33%)；多重感染46例(46/150，30.67%)，其中雙重感染30例(30/150，20.00%)，三重感染10例(10/150，6.67%)，四重感染6例(6/150，4.00%)。多重感染主要是高-低及高-高危HPV亞型組合，本研究未發(fā)現(xiàn)低-低危HPV亞型混合感染。所有病例中，以HPV高危亞型單一感染為主，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2CINⅠ中HPV亞型分布不論是單一HPV感染還是復(fù)合感染(多重感染重復(fù)計(jì)數(shù))，HR-HPV(高危型HPV),HPV52、58、16感染率最高，累計(jì)分別占HPV陽性患者中的27.61%(37/134)、17.16%(23/134)、15.67%(21/134)。LR-HPV(低危型HPV)以CP8304為主，占10.45%(14/134)。HR-HPV中未發(fā)現(xiàn)HPV35(+)及HPV59(+)；HPV45(+)發(fā)現(xiàn)稀少。LR-HPV中，未發(fā)現(xiàn)HPV6(+)。亞型分布見表1。

表1　150例CINⅠ HPV感染情況及亞型分布

注：﹡復(fù)合感染重復(fù)計(jì)數(shù)

2.3CINⅠ患者病變持續(xù)2年及病理升級(jí)的主要型別病變持續(xù)2年及病理升級(jí)的患者共30例，其中，單一HPV16(+)及HPV18(+)患者分別有7例及4例；復(fù)合HPV16(+)及HPV18(+)分別有5例及2例，分別占各自感染率的57.14%(12/21)和60%(6/10)。占HPV高危亞型感染的前2位，和其他型別比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.803，P<0.05)

2.4單一感染和多重感染對(duì)CINⅠ轉(zhuǎn)歸的影響本實(shí)驗(yàn)CINⅠ患者，88例HPV單一感染者，半年內(nèi)單一HPV感染逆轉(zhuǎn)率18.18%(16/88),1年內(nèi)逆轉(zhuǎn)率45.45%(40/88)，2年內(nèi)逆轉(zhuǎn)率13.64%(12/88)，病變持續(xù)2年及病理升級(jí)的患者占單一感染的22.73%(20/88)； 46例HPV復(fù)合感染患者中，半年內(nèi)復(fù)合HPV感染逆轉(zhuǎn)率15.22%(7/46)，1年內(nèi)逆轉(zhuǎn)率30.43%(14/46),2年內(nèi)逆轉(zhuǎn)率32.61%(15/46),病變持續(xù)2年及病理升級(jí)的患者占復(fù)合感染的21.74%(10/46)。 除2年陰轉(zhuǎn)病例，單一感染和復(fù)合感染差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.758，P<0.05),余皆無。說明HPV復(fù)合感染可能會(huì)導(dǎo)致病毒清除時(shí)間延長，但并不增加病理升級(jí)的風(fēng)險(xiǎn)。CINI患者轉(zhuǎn)歸情況見表2。

表2　150例CINⅠ患者轉(zhuǎn)歸情況[n(%)]

3討論

HR-HPV病毒感染是宮頸癌及癌前病變發(fā)病的必要條件,主要病因。本研究中150例確診CINⅠ的患者中，HPV分型檢測(cè)陽性134例，檢出率為89.33%，單一高危型別感染86例(57.33%)，多重感染46例(30.67%)，無論單一感染還是多重感染，均以高危型HPV感染為主。既往觀點(diǎn)認(rèn)為，宮頸高級(jí)別病變主要由高危型HPV感染引起，宮頸低級(jí)別病變主要由低危型HPV感染引起[8]。但近年來李曉紅等[9]及湯惠如等[10]的研究表明，宮頸低級(jí)別病變，大部分由高危型HPV感染所致。這與本文分析結(jié)果一致。

在不同國家和地區(qū)，HPV感染率及亞型分布存在一定差異[11]。北京地區(qū)高危型HPV感染，以16,58型為主；上海地區(qū)高危型HPV感染，以16，52，58，33，31型為主；云南地區(qū)以16，52，33型為主；大連地區(qū)以16，58，52型為主。本實(shí)驗(yàn)CINⅠ感染以52,58,16型為主。HPV16和18是最主要的高危致癌亞型，導(dǎo)致了全世界范圍內(nèi)大約70%的宮頸癌[12,13]。HPV52和HPV58是亞洲人感染HPV的主要兩個(gè)基因亞型，在中國、日本等亞洲國家有較高的檢出，而在世界其他地區(qū)很少或者沒有檢出[14]。 HPV感染常無臨床癥狀，平均持續(xù)時(shí)間為8～12個(gè)月，其中低危型平均清除時(shí)間為5～6個(gè)月，高危型平均清除時(shí)間為8～14個(gè)月，約50%～90%的HPV感染可在數(shù)月至2年內(nèi)被機(jī)體清除，而HPV16或18型持續(xù)感染的時(shí)間會(huì)更長[15]。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果顯示，CINⅠ患者的逆轉(zhuǎn)率半年為22%，1年為62%，2年達(dá)到80%，與上述文獻(xiàn)報(bào)道HPV清除率基本一致。

本實(shí)驗(yàn)HPV單一感染和多重感染對(duì)CINⅠ轉(zhuǎn)歸的影響，除2年陰轉(zhuǎn)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，余皆無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。亦支持多重感染不增加宮頸癌的發(fā)病率，但引起病變持續(xù)的風(fēng)險(xiǎn)的觀點(diǎn)[16]，還需大樣本進(jìn)一步調(diào)查研究。

對(duì)CINⅠ的隨診，主要是防止對(duì)高級(jí)別病變的漏診和宮頸癌的發(fā)生，通過本實(shí)驗(yàn)，我們了解到高危型HPV在疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用，并認(rèn)識(shí)到CINⅠ的主要HPV感染亞型以及HPV16及18型的危害，對(duì)其加以重視，定期檢查，將宮頸癌的發(fā)生盡量降到最低。

參考文獻(xiàn)

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Study and follow-up of 150 cases of CINⅠ with HPV infection type

ZhangJingping，HongYing

GulouSchoolofClinicalMedicine,NanjingMedicalUniversity,Nanjing210008,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the cervical intraepithelial neoplasia grade I (CINⅠ) points in human papilloma virus (HPV) infection situation and its outcome in this hospital.MethodsA retrospective study was performed in patients with CINⅠform 2010 to 2012 in this hospital,HPV was classified with cape nucleic acids rapid diversion hybridization of HPV gene chip technology.The regular follow-up was once every half a year,in two years.Follow-up projects included TCT,HPV HC-II.Results①Patients with CINⅠwere mainly with single high-risk HPV type infections; of 150 patients with CINI,HPV positive was in 134 cases (134/150,89.33%) and negative in 16 cases (16/150,10.67%).There were 86 cases of single high-risk pattern infection,(86/150,57.33%) ,46 cases of multiple infections (46/150,30.67%),and 2 cases of single low-risk type infection (2/150,1.33%).②CINⅠHPV positive was in 134 cases,in which a single infection was in 88 cases (88/134,65.67%),dual infection in 30 cases(30/134,22.39%),triple infection was in 10 cases (10/134,7.46%),and quadruple infection was in 6 cases (6/134,4.48%).③In turn,HPV52,58,16 infection rate was the highest,which was respectively 27.61%,17.16%,15.67% of HPV positive patients.④In the process of follow-up,1 year negative conversion rate of 150 patients with CINⅠwas 62.00%; two years conversion rate was 80.00%.Course for two years and pathological upgrade accounted for 20.00%,and the pathological upgrade accounted for 12.67% of all patients.ConclusionA single high-risk HPV infection is the main type,with the highest infection rate of HPV52,58,16 subtypes.But in cases of disease duration and progression,HPV16 and 18 subtypes has highest infection rate.Multiple HPV infections can lead to viral clearance extension of time.Large sample for further investigation is still in need with regard to whether to increase the risk of pathological upgrade.

[Key words]Human papilloma virus classification; Cervical intraepithelial neoplasia grade I; Follow-up

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.01.007

通信作者：洪穎，hongyingwjm@sina

基金項(xiàng)目：江蘇省科技廳科技支撐計(jì)劃-社會(huì)發(fā)展課題(BE2012606)
作者單位： 210008江蘇南京南京醫(yī)科大學(xué)鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院(張靜平，洪穎)，南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院婦產(chǎn)科(洪穎)