張玉芹，張　燦，施新宇

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院質(zhì)控科，湖北 宜昌 443001)

苯環(huán)己哌啶對(duì)獼猴血液皮質(zhì)醇影響的研究

張玉芹※，張燦，施新宇

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院質(zhì)控科，湖北 宜昌 443001)

苯環(huán)己哌啶(phencyclidine,PCP)既可誘導(dǎo)出精神分裂癥的陽性癥狀(幻覺、妄想、行為紊亂等)，也可誘導(dǎo)出精神分裂癥的陰性癥狀(情感淡漠、行為呆板、思維貧乏等)[1-2]。因此,PCP是建立精神分裂癥模型比較理想的藥物[3]。精神分裂癥患者的下丘腦-垂體-腎上腺素(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)軸是亢進(jìn)的，其分泌的促腎上腺激素釋放激素(corticotropin releasing hormone，CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)及皮質(zhì)醇都會(huì)有不同程度的增加，從而從不同的方面影響患者的精神狀態(tài)。Dinan[4]在研究精神分裂癥患者為什么更易患糖尿病時(shí)發(fā)現(xiàn)，精神分裂癥患者的HPA軸亢進(jìn)，其唾液中腎上腺素及皮質(zhì)醇水平高于正常人，這些激素導(dǎo)致患者更易發(fā)生糖尿病。而Duman等[5]的研究也證實(shí)精神分裂癥患者血液中皮質(zhì)醇水平增高，其可能是導(dǎo)致大腦神經(jīng)元萎縮及細(xì)胞凋亡的原因之一。本研究利用PCP建立獼猴精神分裂癥模型后，通過檢測(cè)獼猴血液中的皮質(zhì)醇水平來評(píng)價(jià)模型的穩(wěn)定性。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料云南健康成年雄性恒河獼猴4只，由中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所提供，年齡均為5歲，體質(zhì)量3~5 kg，合格證號(hào)：中科動(dòng)管第053號(hào)，符合國家醫(yī)用動(dòng)物使用標(biāo)準(zhǔn)。獼猴經(jīng)1個(gè)月常規(guī)飼養(yǎng)無異常表現(xiàn)，心、肝、腎等重要器官血液生化指標(biāo)檢測(cè)正常,無神經(jīng)系統(tǒng)病史，肢體運(yùn)動(dòng)功能完整。4只獼猴編號(hào)為：1號(hào)猴、2號(hào)猴、3號(hào)猴、4號(hào)猴。

1.2實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)所用藥物為PCP(OMIGA公司生產(chǎn)，批號(hào)：B2011122001)，稱取一定量的PCP后加相應(yīng)量的0.9%氨化鈉注射液配制成1.2 mg/mL的PCP注射液，冷藏保存。以肌內(nèi)注射的方式給藥，常規(guī)選擇的注射部位為股外側(cè)肌。按0.3 mg/kg的劑量連續(xù)注射14 d，每日注射2次，注射時(shí)間為10:00和16:00。每次注射的PCP溶液量由PCP濃度及給藥劑量算得，每次注射的毫升數(shù)為1號(hào)猴1.5 mL，2號(hào)猴1.5 mL，3號(hào)猴1.7 mL，4號(hào)猴1.3 mL。給藥期間注意無菌操作，注意觀察獼猴飲水、進(jìn)食情況，同時(shí)觀察獼猴生命指征是否平穩(wěn)，若獼猴出現(xiàn)不適情況，立即停藥處理。

1.3血液皮質(zhì)醇的采集、處理及測(cè)定在PCP干預(yù)前和干預(yù)完成后第5日采集獼猴的血液測(cè)定皮質(zhì)醇。取血前獼猴必須為空腹?fàn)顟B(tài)，需應(yīng)提前告知飼養(yǎng)員9:00～14:00禁食(包括糧食、水果)，采血時(shí)間一般選在14:00進(jìn)行。用猴竿套住獼猴牽拉到操作間后反抓其手臂，保證獼猴束縛不得行動(dòng)，處于應(yīng)激狀態(tài)，注意反抓其手臂時(shí)要考慮動(dòng)物手臂不被固定疼痛或扭傷。采血部位為下肢的表淺靜脈，采血前剃毛，用酒精消毒，注意無菌操作。每只個(gè)體每次采血漿1~1.5 mL(3~4 kg個(gè)體)，共采集4次，分別在抓捕之后的0~5 min、15~20 min、25~30 min、35~40 min各采血1次，總量不超過6 mL；個(gè)體在7~8 kg者每次采集1.5~2 mL，總量不超過8 mL。血液在真空抗凝管中充分混合，常溫保存。全血采集后進(jìn)行離心，以8000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min。將血漿部分轉(zhuǎn)移至0.5 mL的離心管中-20 ℃保存，用于皮質(zhì)醇濃度的測(cè)定。

1.4皮質(zhì)醇的測(cè)定采用CortisolRIADSL-2000試劑盒，該試劑盒測(cè)定低濃度樣品時(shí)的組間和組內(nèi)變異系數(shù)分別為7.9%和6.5%，而測(cè)定高濃度樣品時(shí)的組間和組內(nèi)變異系數(shù)分別為9.3%和8.3%。放射性免疫測(cè)試的具體實(shí)驗(yàn)操作由昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院放免科的工作人員完成。

2結(jié)果

干預(yù)前與干預(yù)后的0~5 min、給藥前與給藥后的15~20 min以及給藥前與給藥后25~30 min血液中的皮質(zhì)醇水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但干預(yù)前與干預(yù)后的35~40 min比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

項(xiàng)目0~5min15~20min25~30min35~40min干預(yù)前869±98880±22782±87966±70干預(yù)后978±24985±62840±60956±58t10.2577.53612.5736.235P<0.05<0.05<0.05>0.05

3討論

HPA軸是一種應(yīng)激性的激素反應(yīng)鏈，其分泌可以分為兩種，一種是基礎(chǔ)分泌，而另一種是在應(yīng)激狀態(tài)下的增量分泌也稱為應(yīng)激分泌。此外，HPA軸還具有一定的晝夜節(jié)律性，因此在抽取血液樣本時(shí)，時(shí)間點(diǎn)必須固定。觀察HPA軸的分泌水平及其節(jié)律性是衡量其功能是否正常的一個(gè)重要指標(biāo)，血液皮質(zhì)醇在HPA亢進(jìn)及應(yīng)激狀態(tài)下會(huì)明顯升高。

本研究檢測(cè)了獼猴在PCP干預(yù)前后血液中皮質(zhì)醇的變化情況，結(jié)果顯示，在干預(yù)前與干預(yù)后的0~5 min、15~20 min以及25~30 min血液中的皮質(zhì)醇水平較干預(yù)前各時(shí)點(diǎn)有所升高(P<0.05)，但干預(yù)前與干預(yù)后35~40 min比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在0~5 min、15~20 min、25~30 min三個(gè)時(shí)間點(diǎn)所得到的皮質(zhì)醇監(jiān)測(cè)結(jié)果在給藥后是升高的，說明14 d的恒定量PCP干預(yù)能影響獼猴體內(nèi)血液皮質(zhì)醇的分泌，但是可能這種影響僅發(fā)生在應(yīng)激狀態(tài)的初期，當(dāng)獼猴應(yīng)激狀態(tài)趨于消失時(shí)，這種影響可能不太明顯，也就是說PCP對(duì)獼猴血液皮質(zhì)醇的基礎(chǔ)分泌影響不大而對(duì)其應(yīng)激分泌有較明顯影響。

但本實(shí)驗(yàn)還不完善，還需從以下兩個(gè)方面進(jìn)行改進(jìn)：①在檢測(cè)血液皮質(zhì)醇時(shí)，在干預(yù)前及干預(yù)后，特別是給藥后只進(jìn)行了一次血液皮質(zhì)醇檢測(cè)，而未進(jìn)行多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的連續(xù)檢測(cè)，血液皮質(zhì)醇可能只在給藥的某一段時(shí)間里上升，而在檢測(cè)的時(shí)間點(diǎn)時(shí)，獼猴可能已經(jīng)通過自身內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)恢復(fù)。因此在以后的研究中，需要對(duì)多個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)血液中的皮質(zhì)醇進(jìn)行檢測(cè)，以詳細(xì)了解整個(gè)給藥過程中獼猴血液皮質(zhì)醇的變化；②本實(shí)驗(yàn)PCP的給藥時(shí)間為14 d，所建擬的精神分裂癥模型屬于亞急性模型，而臨床上患者精神分裂癥的發(fā)病多緩慢，體內(nèi)內(nèi)分泌系統(tǒng)的變化也需較長時(shí)間，考慮到獼猴體內(nèi)內(nèi)分泌系統(tǒng)的自身恢復(fù)調(diào)節(jié)，給藥時(shí)間也是值得繼續(xù)研究的地方。在今后的實(shí)驗(yàn)中可增加給藥前后獼猴血液皮質(zhì)醇的檢測(cè)次數(shù)以及樣本量，以期獲得更多的數(shù)據(jù)。

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摘要：目的探討恒定量苯環(huán)己哌啶(PCP)干預(yù)后獼猴血液皮質(zhì)醇的變化情況。方法選取4只恒河獼猴為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，每日進(jìn)行恒定量的PCP干預(yù)，干預(yù)過程持續(xù)2周，分別于干預(yù)前及干預(yù)后第5日采集獼猴血液，并進(jìn)行皮質(zhì)醇檢測(cè)，觀察干預(yù)前、后獼猴血液中皮質(zhì)醇的變化。結(jié)果干預(yù)前與干預(yù)后的0~5 min、干預(yù)前與干預(yù)后的15~20 min以及干預(yù)前與干預(yù)后的 25~30 min血液中的皮質(zhì)醇水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但干預(yù)前與干預(yù)后的35~40 min 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論恒定量的PCP干預(yù)能增加獼猴應(yīng)急狀態(tài)下的血液皮質(zhì)醇分泌。

關(guān)鍵詞：苯環(huán)己哌啶；獼猴；皮質(zhì)醇

Study of Phencyclidine Effects on Blood Cortisol in MacaquesZHANGYu-qin,ZHANGCan,SHIXin-yu.(DepartmentofQualityControl,ThreeGorgesUniversityRenheHospital,Yichang443001,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the blood cortisol changes after a constant amount of phencyclidine(PCP) intervention in macaques. MethodsFour Ganges macaques were chosen as experimental objects, a constant daily amount of PCP intervention was given,and the entire intervention lasted two weeks, respectively,on the fifth day before administration and after administration the blood was collected for cortisol testing, and the blood cortisol changes were observed.ResultsFor each of the pair comparison of blood cortisol before administration and 0-5 min after administration, 15-20 min after administration, 25-30 min after administration,the differences were statistically significant(P<0.05),while the pair comparison of blood cortisol before administration and 35-40 min after administration showed no statistically significant difference(P>0.05).ConclusionConstant amount of PCP intervention can increase blood cortisol secretion of the macaques in emergency state.

Key words:Phencyclidine; Macaques; Cortisol

收稿日期：2014-01-06修回日期：2014-10-22編輯：辛欣

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.06.050

中圖分類號(hào)：R335

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)06-1090-02