陳彩琴 劉紅秀 戴 孟

(浙江衢化氟化學有限公司質(zhì)檢中心，浙江 衢州 324004)

藥用輔料HFA-134a國家標準純度分析方法研究

陳彩琴 劉紅秀 戴 孟

(浙江衢化氟化學有限公司質(zhì)檢中心，浙江 衢州 324004)

研究了藥用輔料HFA-134a國家標準純度分析方法，分析了標準操作條件的不足之處，優(yōu)化了氣相色譜操作條件，考察了該方法的檢出限、線性回收率和精密度，結(jié)果證明優(yōu)化后的方法具有較好的分離度和較高的準確率。

藥用輔料HFA-134a；國家標準；色譜條件；進樣量

0 前言

四氟乙烷，化學名為1,1,1,2-四氟乙烷，英文名為1,1,1,2-Tetrafluoroethane，分子式C2H2F4，分子質(zhì)量102.3，CAS號811-97-2，熔點-101 ℃，沸點-26.2 ℃，相對密度1.206(298.15 K,液體)。水中溶解度(298.15 K,101.3×103Pa)為0.15%。四氟乙烷在常溫下是一種無色、有輕微醚類氣味的氣體，一般情況下均壓縮成液態(tài)儲存于鋼瓶中。該產(chǎn)品作為藥用輔料簡稱為HFA-134a，作為制冷劑簡稱為HFC-134a。

國家藥品標準四氟乙烷WS5-FG-003-2013于2014年2月28日正式實施，但在實施過程中發(fā)現(xiàn)測定純度的氣相色譜條件有些缺陷，如柱溫低、出峰慢，主峰拖尾，進樣量大，雜質(zhì)峰被主峰覆蓋，分析時間長，實施起來有困難。因此,對國家標準方法進行了優(yōu)化和驗證。采用優(yōu)化后的國家藥品標準測定四氟乙烷主含量和有關(guān)物質(zhì)，分離度更高，峰形美觀，分析時間更短，主含量的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 4，有關(guān)雜質(zhì)的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.997 0，回收率為96.3%～102.5%，精密度標準偏差小。該方法能滿足藥用輔料檢測的需要。

1 實驗部分

1.1 試劑和材料

藥用輔料HFA-134a；配制雜質(zhì)用純物質(zhì)：二氟乙烯(HFC-1132)、五氟氯乙烷(HCFC -115)、三氟甲烷(HFC-23)、1,1,1-三氟乙烷(HFC-143a)、四氟二氯乙烷(HCFC-114/114a)、五氟乙烷(HFC-125)、四氟氯乙烷(HCFC-124)、三氟氯乙烷(HCFC-133a)、三氟二氯乙烷(HCFC-123)。

1.2 儀器和設(shè)備

6890氣相色譜儀，配PLOT Al2O3色譜柱(50 m×0.53 mm×15 μm)，氫火焰離子化檢測器。

1.3 氣相色譜條件

氣化室溫度170 ℃，檢測器溫度250 ℃，柱箱溫度80 ℃，保持10 min，以10 ℃/min升溫至150 ℃，保持5 min，柱流量2.0 mL/min，分流比5 ∶1。

1.4 試驗方法

按要求調(diào)試好氣相色譜條件，等儀器達到設(shè)定狀態(tài)后，取0.2 mL樣品注入氣相色譜儀進行分析，分析結(jié)束后，儀器自動顯示分析報告。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

按四氟乙烷國家藥品標準中規(guī)定，選取氧化鋁為固定相(PLOT Al2O3)的50 m×0.53 mm×15 μm石英毛細管色譜柱為試驗對象。

2.2 色譜操作條件的選擇

2.2.1 國家藥品標準規(guī)定的操作條件驗證試驗

根據(jù)選定的氣相色譜柱，按國家藥品標準規(guī)定的操作條件，補充了缺失的柱流量8 mL/min，按照國標操作條件：進樣器溫度170 ℃，恒流模式，載氣流量2.0 mL/min，分流比為5 ∶1，柱溫初始溫度50 ℃保持2 min，以2 ℃/min從50 ℃升溫至100 ℃，再以10 ℃/min從100 ℃升溫至150 ℃保持15 min，檢測器 (FID)溫度250 ℃，氫氣流量30 mL/min，進樣量為1.0 mL。配制一個混合樣，在此操作條件下進行試驗，試驗結(jié)果見圖1。

圖1 四氟乙烷色譜圖(國家藥品標準推薦的操作條件)

由于進樣量大，柱溫條件不合適，主峰峰寬過寬，部分雜質(zhì)被主峰覆蓋，不能有效分離，整個分析過程需要50 min，分析時間長，因此需要重新優(yōu)化氣相色譜條件。

2.2.2 柱溫的優(yōu)化

采用同一樣品，在不同柱溫條件下按常規(guī)氣體進樣量為0.2 mL進行試驗，試驗結(jié)果見圖2～圖5。

圖2 50 ℃溫度保持10 min，以10 ℃/min升溫至150 ℃，保持5 min

圖3 60 ℃溫度保持10 min，以10 ℃/min升溫至150 ℃，保持5 min

圖4 80 ℃溫度保持10 min，以10 ℃/min升溫至150 ℃，保持5 min

圖5 100 ℃溫度保持10 min，以10 ℃/min升溫至150 ℃，保持5 min

通過比較，圖2～圖4的操作條件均能使雜質(zhì)較好地分離，圖5出峰過快，雜質(zhì)含量高時峰不易分開，綜合分離效果以及分析時間等因素，最終確定了圖4作為最佳操作條件：進樣口溫度170 ℃、檢測室溫度250 ℃、柱流量2 mL/min、分流比5 ∶1，柱溫初始溫度80 ℃保持10 min，以10 ℃/min從80 ℃升溫至150 ℃，保持5 min。測定一個樣品的時間由50 min縮短至22 min。在此條件下，最難分離的物質(zhì)對1,1,2,2-四氟-1,2-二氯乙烷和1,1,1,2-四氟-2,2-二氯乙烷的分離度為3.2，五氟乙烷和四氟乙烷的分離度為1.16，兩峰完全分離。

2.2.3 進樣量的選擇

選取0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.8 mL、1.0 mL不同的進樣量，按優(yōu)化后的操作條件，分別對同一樣品進行試驗，結(jié)果表明：進樣量在0.05～1.0 mL時，其線性相關(guān)系數(shù)為0.994 1，進樣量在0.05～0.8 mL時，其線性相關(guān)系數(shù)為0.994 7，進樣量在0.05～0.5 mL時，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 4。因此，進樣量在0.05～0.5 mL時有較好的線性，以下試驗進樣量按0.2 mL進行，試驗結(jié)果見表1。

表1 不同進樣量與峰面積的對應(yīng)關(guān)系

2.2.4 優(yōu)化后的氣相色譜操作條件

通過操作條件的優(yōu)化，確定了驗證試驗的氣相色譜操作條件：進樣口溫度170 ℃、檢測室溫度250 ℃、柱流量2 mL/min、分流比5 ∶1，柱溫初始溫度80 ℃保持10 min，以10 ℃/min從80 ℃升溫至150 ℃，保持5 min，進樣量0.2 mL，以下試驗均按此條件進行。

2.3 各有機雜質(zhì)檢出限的測定

采用優(yōu)化后的氣相色譜操作條件進行試驗。在已抽過真空的配制瓶中加入含量為10×10-6的各雜質(zhì)標準品，用干凈空氣作平衡氣，混勻后制成標準樣品，進行檢出限的測定。1,1-二氟-2-氯乙烯的檢出限采用國家藥品標準中給出的相對校正因子計算出混合樣中的含量，采用空氣逐級稀釋法測得其檢出限。各雜質(zhì)組分的信噪比見表2，試驗結(jié)果見圖6。

表2 各雜質(zhì)組分的信噪比測定值

表2顯示，各雜質(zhì)組分的S/N≥2，各雜質(zhì)組分的檢出限符合國家藥品標準的要求。

圖6 有機雜質(zhì)檢出限譜圖(除1,1-二氟-2-氯乙烯)

2.4 主含量及有關(guān)雜質(zhì)的線性試驗

2.4.1 藥用輔料四氟乙烷的線性試驗

在分流條件下，毛細管色譜柱的進樣量一般為 0.1～1 mL，通常為0.5 mL以下，本次試驗選擇0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.8 mL、1.0 mL 8個不同的進樣量，按優(yōu)化后的操作條件，分別對同一樣品進行試驗，結(jié)果表明：進樣量在0.05～0.5 mL時有較好的線性，其線性相關(guān)系數(shù)為0.999 4。試驗結(jié)果見圖7。

圖7 主含量不同進樣量的線性關(guān)系圖

2.4.2 有關(guān)雜質(zhì)的線性試驗

配制10×10-6、20×10-6、30×10-6、40×10-6、50×10-65個分別含二氟乙烯、五氟氯乙烷、三氟甲烷、1,1,1-三氟乙烷、1,1,2,2-四氟-1,2-氯乙烷和1,1,1,2-四氟-2,2-氯乙烷、五氟乙烷、1,1,1,2-四氟-2-氯乙烷、1,1,1-三氟-2-氯乙烷、1,1,1-三氟-2,2-二氯乙烷各有關(guān)雜質(zhì)的標準樣品，按優(yōu)化后的操作條件分別進行測定，各雜質(zhì)的線性相關(guān)系數(shù)見表3，結(jié)果表明各雜質(zhì)具有很好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)均在0.997 0以上。

表3 各有關(guān)雜質(zhì)的線性相關(guān)系數(shù)

2.5 各有機雜質(zhì)的回收率試驗

配制雜質(zhì)含量分別為0.002 0%和0.003 0%的兩個標準樣品，按優(yōu)化后的色譜操作條件，注入色譜儀中進行測定，根據(jù)各有機組分含量及峰面積計算標準樣品0.002 0%中各組分的相對校正因子，以標準樣品0.0030%為加標樣進行回收率的計算。計算結(jié)果見表4，其回收率為96.3%～102.5%，結(jié)果表明本方法準確性高。

表4 各雜質(zhì)組分的回收率試驗

2.6 精密度試驗

采用連續(xù)3個批次的樣品分別進行8平行試驗，試驗結(jié)果見表5。

從表5可以看出：該方法重復性穩(wěn)定，標準偏差小，能滿足分析的需要。

表5 1,1,1,2-四氟乙烷含量的精密度試驗(質(zhì)量分數(shù)/%)

3 結(jié)論

通過驗證試驗，發(fā)現(xiàn)國家藥品標準在關(guān)于含量及有關(guān)物質(zhì)的色譜操作條件選擇不是很合適，我們按試驗結(jié)果重新確定了主含量及有關(guān)雜質(zhì)的最佳操作條件。采用優(yōu)化后的國家藥品標準測定主含量和有關(guān)物質(zhì)，分離度更高，檢出限低(除三氟甲烷外，各雜質(zhì)均小于3×10-6)，主含量的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 4，有關(guān)雜質(zhì)的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.997 0，回收率在96.3%～102.5%之間，精密度標準偏差小。該方法能滿足藥用輔料檢測的需要。

[1] WS5-FG-003-2013, 國家藥品標準四氟乙烷[S]. 國家食品藥品監(jiān)督管理總局, 2013.

Research on the Method of Pharmaceutical HFA-134a of National Standard

Chen Caiqin, Liu Hongxiu, Dai Meng

(Zhejiang Quhua Fluoro-Chemistry Co., Ltd., Quzhou 324004, China)

To study the pharmaceutical HFA-134a standards for purity analysis method, analyzed the shortcomings of operating conditions, to optimize the operation conditions of chromatography, investigated the method of detection limit, linear recovery rate and precision. The results show that the optimized method has better resolution and higher accuracy.

pharmaceutical HFA-134a; national standard; chromatographic operating conditions; sample injection

陳彩琴(1977—)，女，工程師，從事氟制冷劑系列產(chǎn)品質(zhì)量檢驗管理工作。