王 爭(zhēng)，王曙東，劉文雅，任海祥

（中國(guó)人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京 210002）

高效液相色譜法測(cè)定通塞益腦口服液中β-細(xì)辛腦含量

王 爭(zhēng)，王曙東，劉文雅，任海祥

（中國(guó)人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京 210002）

目的建立測(cè)定通塞益腦口服液中石菖蒲所含 β-細(xì)辛腦含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為 Hedera-ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 βm），流動(dòng)相為甲醇-水（55∶45），檢測(cè)波長(zhǎng)257 nm。結(jié)果β-細(xì)辛腦質(zhì)量濃度在10.5～105 βg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好（r=0.999 9），平均加樣回收率為99.49%，RSD為2.45%（n=6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好，分離度好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于通塞益腦口服液中β-細(xì)辛腦的含量測(cè)定。

通塞益腦口服液；高效液相色譜法；β-細(xì)辛腦

通塞益腦口服液是由石菖蒲及其他中藥組成的復(fù)方制劑，源于南京軍區(qū)著名老中醫(yī)于德勇教授的臨床經(jīng)驗(yàn)方，具有開竅豁痰、醒腦益智等功效，用于急性缺血性腦損傷及中風(fēng)的治療，療效肯定、安全可靠，深受患者歡迎[1～2]。方中石菖蒲具有免疫、抑菌、抗癌、抗突變等藥理作用[3-4]。石菖蒲中的揮發(fā)油成分α-細(xì)辛腦具有鎮(zhèn)靜催眠、抗驚厥等作用，對(duì)心血管及呼吸系統(tǒng)均有活性[5]。本試驗(yàn)中建立了同時(shí)測(cè)定通塞益腦口服液中α-細(xì)辛腦含量的高效液相色譜法，供制劑的質(zhì)量控制參考。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，包括 Waters 1525型雙泵，Waters 2487型紫外檢測(cè)器，Waters 717型自動(dòng)進(jìn)樣器，Waters Empower色譜軟件；Mettler Toledo AE240型十萬分之一電子天平；KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。通塞益腦口服液（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科自制，批號(hào)為20130215，20130220，20130222）；α-細(xì)辛腦對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為100298-200001）；甲醇為色譜純，水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[6]

色譜柱：Hedera-ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（55∶45）；檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按α-細(xì)辛腦峰計(jì)算不低于2 000。

2.2 溶液制備

取α-細(xì)辛腦對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含105 μg的對(duì)照品溶液。精密吸取樣品5 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲30 min，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。另按處方量，稱取除石菖蒲外的其余藥材，按制劑工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖1?？梢?，在此色譜條件下，陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液（105 μg/mL）1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 10 μL，注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，以峰面積積分值（A）對(duì)對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=89 402 414 C-58 941，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，α-細(xì)辛腦質(zhì)量濃度在 10.5～105 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一 α-細(xì)辛腦對(duì)照品溶液（42 μg/mL）10 μL，在相同色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次。結(jié)果峰面積的 RSD為1.24%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密吸取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果α-細(xì)辛腦平均含量的 RSD為2.24%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時(shí)依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果 α-細(xì)辛腦含量的 RSD為2.03%（n=6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品共6份，精密稱定，置5 mL容量瓶中，分別加入對(duì)照品貯備液1.0，1.2，1.4 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 β-細(xì)辛腦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

稱取3批樣品，精密稱定，依法制備供試品溶液并以外標(biāo)法測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20130215，20130220，20130222的樣品中α-細(xì)辛腦含量分別為39.45，39.29，39.11 μg/mL。

3 討論

在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[7]中，細(xì)辛腦的含量測(cè)定采用分光光度法，采用給定的吸收系數(shù)，根據(jù)吸光度值來測(cè)定含量。由于實(shí)驗(yàn)儀器和實(shí)驗(yàn)環(huán)境的差異，測(cè)得的含量存在較大誤差，可靠性不如高效液相色譜法。

關(guān)于流動(dòng)相的確定，曾嘗試了流動(dòng)相為乙腈-水（44∶56），結(jié)果α-細(xì)辛腦于18 min左右出峰，但與相鄰兩色譜峰的分離度較低。考慮換成甲醇溶液以改善峰形[8-13]，調(diào)整流動(dòng)相為甲醇 -水（55∶45），此時(shí)峰形變窄、分離良好，且峰形對(duì)稱、重復(fù)性好。

方法學(xué)考察表明，所建立的方法具有良好的線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性，且回收率高，可對(duì)通塞益腦口服液中α-細(xì)辛腦的含量進(jìn)行有效、準(zhǔn)確地定量，從而對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行有效的質(zhì)量控制。

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Content of α-Asarone in Tongsaiyinao Oral Solution by HPLC

Wang Zheng,Wang Shudong,Liu Wenya,Ren Haixiang
(Department of Preparation,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Area Command,Nanjing,Jiangsu,China 210002)

Objective To establish a method for the content determination of α-asarone in Tongsaiyinao Oral Solution.M ethods The Hedera-ODS-2 C18culumn(250 mm×4.6mm,5 μm）column was used.The mobile phases consisted of methanol and water(55∶45) and the detection wavelength was at 257 nm.Results α-asarone showed a linear relationship within the concentration range of 10.5～105 μg/mL(r=0.999 9).The average recovery was 99.49%,and RSD=2.45%(n=6).Conclusion The proposed method appered to be simple,rapid,reliable,sensitive and accurate.It is available to the content determination of Tongsaiyinao Oral Solution.

Tongsaiyinao Oral Solution;HPLC;α-asarone

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)19-0044-02

王爭(zhēng)(1989-)，女，江蘇南京人，大學(xué)本科，藥師，現(xiàn)從事中藥制劑研究工作，(電話)025-8086316(電子信箱) wangzheng198921＠163.com；任海祥，碩士研究生，副主任藥師，現(xiàn)從事中藥制劑研究工作，本文通訊作者，(電話)025-80861297 (電子信箱)RHX1111＠sin.com。

2015-01-27；

2015-03-30)