高 爽，李文成，劉加濤，于瀚卿，范璐璐，孫國平

miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞增殖、凋亡以及侵襲、遷移能力的影響

高 爽，李文成，劉加濤，于瀚卿，范璐璐，孫國平

摘要目的 研究miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲、遷移能力的影響及其可能機(jī)制。方法 將miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC瞬時轉(zhuǎn)入肝癌HepG2細(xì)胞內(nèi)，應(yīng)用噻唑鹽（MTT）法、流式細(xì)胞儀、Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞增殖、凋亡以及侵襲、遷移能力的影響，進(jìn)一步用Western blot法檢測各組Bcl-2蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 MTT實(shí)驗(yàn)表明miR-98過表達(dá)后，肝癌細(xì)胞的增殖能力明顯低于對照組；Annexin VFITC／PI凋亡實(shí)驗(yàn)證實(shí)上調(diào)miR-98表達(dá)后，細(xì)胞的凋亡率較對照組升高；Transwell小室實(shí)驗(yàn)表明上調(diào)miR-98可使肝癌細(xì)胞的侵襲、遷移能力減弱。而當(dāng)miR-98被抑制后，肝癌HepG2細(xì)胞的增殖及侵襲、遷移能力則明顯增強(qiáng)，凋亡率則下降。Western blot實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)miR-98過表達(dá)后，Bcl-2的表達(dá)降低。結(jié)論 miR-98可能在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著抑癌基因的作用；miR-98可能通過下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡。

關(guān)鍵詞miR-98；HepG2；增殖；凋亡；侵襲；遷移

2015-02-02接收

作者單位：安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科，合肥 230001

原發(fā)性肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界范圍內(nèi)常見的惡性消化系統(tǒng)腫瘤之一，在我國尤為高發(fā)［1］，目前手術(shù)切除仍是主要的治療手段，但手術(shù)切除風(fēng)險高、有效率低，且肝癌對放療不敏感，全身化療總體有效率也＜10%，因此，發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)已經(jīng)成為探索肝癌治療和預(yù)后的關(guān)鍵［2-3］。

自Murakami et al［4］首次報道在原發(fā)性肝癌中微小RNA（microRNA，miRNA）表達(dá)異常以來，多項(xiàng)研究均證實(shí)了miRNA的異常表達(dá)與原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，因此深入研究miRNA在HCC中的功能及相關(guān)作用機(jī)制，或許能為HCC的治療提供新的途徑。該研究通過建立瞬時轉(zhuǎn)染模型改變HepG2細(xì)胞中miR-98的表達(dá)水平，觀察miR-98對 HepG2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，初步探討miR-98在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用，為尋找新的分子靶向治療靶點(diǎn)奠定理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系 肝癌HepG2細(xì)胞株購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)院。

1.1.2 主要試劑 miR-98mimics、miR-98mimics陰性對照（mimics-NC）、miR-98inhibitor、miR-98inhibitor陰性對照（inhibitor-NC）、轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine3000、RNA提取試劑TRIzol以及逆轉(zhuǎn)錄所需相關(guān)試劑均購自美國Invitrogen公司，miR-98 Taqman探針熒光定量試劑盒、U6 Taqman探針熒光定量試劑盒購于上海生工生物有限公司，MTT、抗βactin多克隆抗體、抗Bcl-2多克隆抗體、山羊抗兔二抗、山羊抗小鼠二抗購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；Annexin V-FITC細(xì)胞雙染凋亡試劑購自上海貝博公司。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 Acpo-6100 CO2培養(yǎng)箱（美國DuPont公司）；YJ-1450型醫(yī)學(xué)凈化工作臺（蘇州凈化設(shè)備公司）；倒置式顯微鏡、正置熒光顯微鏡（日本Olympus公司）；普通PCR儀K960（杭州晶格科學(xué)儀器有限公司）；PIKOREAL96熒光定量PCR儀（美國Thermo公司）；Elx-800型酶標(biāo)儀（美國Bio-Tek儀器公司）；EPICS XL／XL-MCL流式細(xì)胞儀（美國Beckman Coulter公司）和ImageQuantTMLAS-4000型發(fā)光成像系統(tǒng)（日本通用電氣醫(yī)療集團(tuán)生命科學(xué)部）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代 將肝癌HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，放置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)，隔天換液，待細(xì)胞融合度大于80%后進(jìn)行傳代，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 建立瞬時轉(zhuǎn)染模型 取生長狀態(tài)良好并處在對數(shù)生長期的細(xì)胞，按照一定的細(xì)胞密度接種于細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞貼壁后利用Lipofectamine3000為載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)分5組：只加培養(yǎng)基的空白對照組、miR-98mimics組、mimics-NC

組、miR-98inhibitor組以及inhibitor-NC組。

1.2.3 運(yùn)用Taqman探針實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）測定轉(zhuǎn)染效率 為了驗(yàn)證HepG2細(xì)胞在轉(zhuǎn)染miR-98mimics、miR-98inhibitor后細(xì)胞內(nèi)miR-98的表達(dá)是否發(fā)生相應(yīng)地變化，轉(zhuǎn)染24 h后，收集細(xì)胞，經(jīng)過提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄，進(jìn)行Taqman探針實(shí)時熒光定量PCR，ΔCt＝CtmiR-98-CtU6，ΔΔCt＝（CtmiR-98-CtU6）轉(zhuǎn)染組-（CtmiR-98-CtU6）空白對照組，組間miR-98的相對表達(dá)水平用2-ΔΔCt計(jì)算。

1.2.4 MTT法檢測miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響 取對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞，以5.0× 103個／孔的細(xì)胞密度接種于96孔板中，每孔100 μl，培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞貼壁后，用Lipo-fectamine 3000轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)分5組，每組設(shè)5個復(fù)孔。轉(zhuǎn)染48 h后，每孔按1∶10的比例加入MTT溶液，37℃培養(yǎng)箱避光孵育3～4 h后加入DMSO 150 μl／每孔，用酶標(biāo)儀測定各孔在490 nm波長下吸光度（optical density，OD）值，并計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率（%）＝（OD實(shí)驗(yàn)組-OD空白組）／（OD對照組-OD空白組）× 100%。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡 將轉(zhuǎn)染48 h后各組細(xì)胞以及只加培養(yǎng)液的空白對照組細(xì)胞消化離心，冰PBS溶液洗滌2次，每孔細(xì)胞用400 μl結(jié)合緩沖液重懸，濾入流式管后依次加入5 μl Annein V 和10 μl PI染液，上機(jī)檢測，所有細(xì)胞分為4組，Q1：Annexin V-PI＋-壞死細(xì)胞；Q2：Annexin V＋PI＋-凋亡后繼發(fā)壞死細(xì)胞；Q3：Annexin V＋PI--早期凋亡細(xì)胞；Q4：Annexin V-PI--存活細(xì)胞。細(xì)胞凋亡率（%）＝（Annexin V＋PI＋細(xì)胞數(shù)＋Annexin V＋PI-細(xì)胞數(shù)）／10 000×100%。

1.2.6 Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn) 轉(zhuǎn)染48 h后將miR-98mimics組、mimics-NC組、miR-98inhibitor組、inhibitor-NC組以及空白對照組細(xì)胞加胰酶消化，吹打成單細(xì)胞懸液，PBS溶液洗滌細(xì)胞2次后，無血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為（1～2）×105個／ml，取100 μl接種于Transwell小室內(nèi)，向下室加入500 μl含10%胎牛血清的培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10～12 h，取出小室，用棉簽輕輕擦掉小室內(nèi)未穿過膜的細(xì)胞，用95%乙醇溶液固定15 min后以0.1%結(jié)晶紫染色10 min，PBS清洗2～3遍，空氣中自然風(fēng)干。將小室倒置于載玻片上，于正置熒光顯微鏡下隨機(jī)選取5個（×200）視野計(jì)數(shù)穿過膜的細(xì)胞數(shù)并進(jìn)行拍照。

1.2.7 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn) 用無血清培養(yǎng)基按1∶7將基質(zhì)膠稀釋，取50 μl于每一個小室內(nèi)，將鋪好基質(zhì)膠的小室放于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置4 h后方可使用。將各組細(xì)胞用胰酶消化后制成單細(xì)胞懸液，PBS洗滌細(xì)胞2次后，無血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為（1～2）×105個／ml，取100 μl懸液緩慢滴入鋪好基質(zhì)膠的上室內(nèi)，向下室加入500 μl含10%胎牛血清的培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10～12 h，取出小室，用棉簽輕輕擦掉未穿過膜的細(xì)胞，95%乙醇溶液固定15 min，0.1%結(jié)晶紫染色10 min，PBS清洗2 ～3遍，空氣中自然風(fēng)干。將小室倒置于載玻片上，于正置熒光顯微鏡下隨機(jī)選取5個（×200）視野計(jì)數(shù)穿過膜的細(xì)胞數(shù)并進(jìn)行拍照。

1.2.8 Western blot法觀察凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)將轉(zhuǎn)染后48 h各組細(xì)胞以及只加培養(yǎng)液的空白對照組細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出，冷PBS洗2遍，冰上裂解30 min后離心，取上清液，采用BCA法蛋白定量后；加入5×蛋白上樣緩沖液，沸水煮10 min，室溫下冷卻后置于-20℃保存；實(shí)驗(yàn)時經(jīng)過電泳分離蛋白、轉(zhuǎn)膜、封閉、洗膜等操作后，一抗4℃孵育過夜。次日，二抗室溫孵育2 h，最后加入電化學(xué)發(fā)光試劑，利用ImageQuantTMLAS-4000型發(fā)光成像系統(tǒng)檢測蛋白熒光信號并顯像，采用Image J軟件分別測量Bcl-2和β-actin條帶的積分光密度值，以Bcl-2／β-actin的值來反映Bcl-2的相對表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析和LSD法。

2　結(jié)果

2.1 轉(zhuǎn)染后HepG2細(xì)胞內(nèi)miR-98表達(dá)水平的變化 轉(zhuǎn)染24 h后，以空白對照組的表達(dá)量為基準(zhǔn)，2-ΔΔCt計(jì)算相對表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-98mimics組細(xì)胞內(nèi)miR-98的表達(dá)量約為空白對照組的（34.81±4.80）倍，而miR-98inhibitor組細(xì)胞內(nèi)miR-98的表達(dá)量約為空白對照組的（0.33±0.03）倍，表明轉(zhuǎn)染miR-98mimics可有效上調(diào)HepG2細(xì)胞內(nèi)miR-98的表達(dá)水平，而轉(zhuǎn)染miR-98inhibitor則能有效下調(diào)miR-98的表達(dá)，為后續(xù)進(jìn)一步試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)，見圖1。

2.2 miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響 轉(zhuǎn)染48 h后，空白對照組、miR-98mimics組、mimics-NC組、miR-98inhibitor組及inhibitor-NC組之間細(xì)胞存活率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝28.005，P＜0.05）。miR-98mimics組與空白對照組、mimics-NC組相比，細(xì)胞存活率分別下降24.31%、20.07%（P＜0.05）；而miR-98inhibitor組與空白對照組、inhibitor-NC組相比，細(xì)胞活力升高，細(xì)胞存活率分別升高15.37%、16.47%（P＜0.05）；而空白對照組、mimics-NC組、inhibitor-NC組間細(xì)胞存活率間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上結(jié)果表明，上調(diào)miR-98表達(dá)可抑制細(xì)胞活力，降低細(xì)胞存活率，見圖2。

2.3 miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的影響 轉(zhuǎn)染48 h后，空白對照組、miR-98mimics組、mimics-NC組、miR-98inhibitor組及inhibitor-NC組之間細(xì)胞凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝211.81，P＜0.05）。miR-98mimics組細(xì)胞凋亡率顯著高于空白對照組、mimics-NC組（P＜0.05）；miR-98inhibitor組細(xì)胞凋亡率則低于空白對照組以及inhibitor-NC組（P＜0.05）；mimics-NC組、inhibitor-NC組細(xì)胞凋亡率高于空白對照組（P＜0.05），見圖3。

2.4 miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞遷移能力的影響空白對照組、miR-98mimics組、mimics-NC組、miR-98inhibitor組及inhibitor-NC組之間細(xì)胞穿膜數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝67.02，P＜0.05）。過表達(dá)miR-98的肝癌細(xì)胞穿入到下層小室的數(shù)目與空白對照組、mimics-NC組相比分別減少44.11%、39.40%（P＜0.05）。而將miR-98干擾后，穿入到下層小室的肝癌細(xì)胞數(shù)目明顯多于空白對照組以及inhibitor-NC組，分別增加80.83%、101.8%（P＜0.05），但空白對照組、mimics-NC組、inhibitor-NC組間穿膜細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1、圖4。

2.5 miR-98對肝癌HepG2細(xì)胞侵襲能力的影響空白對照組、miR-98mimics組、mimics-NC組、miR-98inhibitor組及inhibitor-NC組之間細(xì)胞穿膜數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝42.40，P＜0.05）。miR-98mimics組細(xì)胞穿過基質(zhì)膠進(jìn)入到下層小室的數(shù)目與空白對照組、mimics-NC組相比分別減少59.83%、57.60%（P＜0.05）。miR-98inhibitor組細(xì)胞穿過基質(zhì)膠進(jìn)入到下層小室的肝癌細(xì)胞數(shù)目明顯

多于空白對照組以及inhibitor-NC組，分別增加73.80%、88.62%（P＜0.05），但空白對照組、mimics-NC組、inhibitor-NC組間穿膜細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1、圖5。

表1　各組中Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)穿膜細(xì)胞數(shù)（個／HP,±s）

表1　各組中Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)穿膜細(xì)胞數(shù)（個／HP,±s）

與空白對照組比較：*P＜0.05；與mimics-NC組比較：＃P＜0.05；與inhibitor-NC組比較：ΔP＜0.05

組別　　遷移　　侵襲空白對照100.2±10.640　45.8±9.039 mimics-NC　92.4±7.128　43.4±8.792 miR-98mimics　56.0±11.235*?！?8.4±4.393*＃miR-98inhibitor　181.2±16.634*＃Δ　79.6±7.893*＃Δinhibitor-NC　89.8±15.385　42.2±6.419

2.6 凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)水平 Western blot法檢測顯示，轉(zhuǎn)染48 h后，miR-98mimics組Bcl-2的表達(dá)水平明顯低于空白對照組、mimics-NC組（P＜0.05）。miR-98inhibitor組Bcl-2的表達(dá)水平明顯高于空白對照組以及inhibitor-NC組（P＜0.05），但空白對照組、mimics-NC組、inhibitor-NC組間Bcl-2的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖6。

3　討論

miRNA是一類長度為21～25個核苷酸組成的非編碼單鏈小分子RNA，廣泛存在于各種動植物中，抑制靶mRNA翻譯，對基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后翻譯和表達(dá)的調(diào)控，進(jìn)而參與生物體的生長發(fā)育及多種生理病理學(xué)過程的調(diào)控，包括細(xì)胞分化、增殖、凋亡。諸多肝癌相關(guān)的研究［5］表明，多種miRNA可通過調(diào)控不同的癌基因和抑癌基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)對肝癌發(fā)生發(fā)展過程的調(diào)控，包括肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移等。

let-7家族已經(jīng)被證實(shí)在肝癌組織中表達(dá)下調(diào)［6］，let-7可通過下調(diào)c-myc和上調(diào)p16（Ink4a）的表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞增殖［7］，還可通過抑制Bcl-2表達(dá)來增強(qiáng)索拉非尼誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［8］，此外，let-7對肝癌的轉(zhuǎn)移有明顯的抑制作用，與患者的生存期緊密相關(guān)［9］。miR-98是let-7家族的一員，研究［10］證實(shí)miR-98可靶向抑制ALK4、MMP11的表達(dá)，進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲以及血管生成。在人耐順鉑肺腺癌細(xì)胞株A549／DDP中，過表達(dá)的miR-98可以上調(diào)HMGA2的表達(dá)來增加肺腺癌細(xì)胞對順鉑的敏感性［11］。但目前國內(nèi)仍未有miR-98對肝癌

HepG2細(xì)胞系增殖及侵襲能力影響的報道。本研究結(jié)果表明上調(diào)肝癌HepG2細(xì)胞內(nèi)miR-98的表達(dá)，可以抑制細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，減弱細(xì)胞的侵襲遷移能力，對于相關(guān)機(jī)制，本研究也進(jìn)行了初步的探索，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-98可能通過下調(diào)Bcl-2的表達(dá)促進(jìn)HepG2細(xì)胞的凋亡。

Bcl-2屬于Bcl-2家族，是一種抗凋亡基因Bcl-2家族在線粒體凋亡信號的調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。研究［12-13］表明在HCC中miRNA主要通過Bcl-2家族來影響細(xì)胞凋亡。miR-125b通過抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡；miR-221則可抑制Bmf的表達(dá)發(fā)揮抗凋亡的作用；miR-122也能通過抑制Bcl-w的表達(dá)抑制凋亡；此外miR-224也可通過直接調(diào)節(jié)Bcl-2的表達(dá)發(fā)揮抗凋亡的作用［14-15］。且已有相關(guān)研究［11］表明在人肺腺癌細(xì)胞中，上調(diào)miR-98的表達(dá)后，可引起B(yǎng)cl-2、Bcl-xL的表達(dá)下調(diào)進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，因此本研究對改變miR-98的表達(dá)后HepG2細(xì)胞內(nèi)Bcl-2的表達(dá)水平進(jìn)行進(jìn)一步觀察，Western blot結(jié)果顯示，上調(diào)miR-98表達(dá)后，可引起B(yǎng)cl-2表達(dá)下調(diào)，抑制miR-98的表達(dá)，Bcl-2表達(dá)上調(diào)，表明miR-98可能通過下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

綜上所述，本研究證實(shí)miR-98在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著抑癌基因的作用，但是miR-98影響這些生物學(xué)行為相應(yīng)的靶基因、信號通路仍需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

［1］ 陳建國，張思維，陳萬青.中國2004-2005年全國死因回顧抽樣調(diào)查肝癌死亡率分析［J］.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2010，44 （5）：383-9.

［2］ Zahreddine H，Borden K L.Mechanisms and insights into drug resistance in cancer［J］.Front Pharmacol，2013，4：28.

［3］ Gardner B M，Pincus D，Gotthardt K，et al.Endoplasmic reticulum stress sensing in the unfolded protein response［J］.Cold Spring Harb Perspect Biol，2013，5（3）：a013169.

［4］ Murakami Y，Yasuda T，Saigo K，et al.Comprehensive analysis of microRNA expression patterns in hepatocellular carcinoma and non-tumorous tissues［J］.Oncogene，2006，25（17）：2537-45.

［5］ Law P T，Wong N.Emerging roles of microRNA in the intracellular signaling networks of hepatocellular carcinoma［J］.J Gastroenterol Hepatol，2011，26（3）：437-49.

［6］ Gramantieri L，F(xiàn)erracin M，F(xiàn)ornari F，et al.Cyclin G1 is a target of miR-122a，a microRNA frequently down-regulated in human hepatocellular carcinoma［J］.Cancer Res，2007，67（13）：6092 -9.

［7］ Lan F F，Wang H，Chen Y C，et al.Hsa-let-7g inhibits proliferation of hepatocellular carcinoma cells by downregulation of c-Myc and upregulation of p16（INK4A）［J］.Int J Cancer，2011，128 （2）：319-31.

［8］ Shimizu S，Takehara T，Hikita H，et al.The let-7 family of microRNAs inhibits Bcl-xL expression and potentiates sorafenib-induced apoptosis in human hepatocellular carcinoma［J］.J Hepatol，2010，52（5）：698-704.

［9］ Mott J L.MicroRNAs involved in tumor suppressor and oncogene pathways：implications for hepatobiliary neoplasia［J］.Hepatology，2009，50（2）：630-7.

［10］Siragam V，Rutnam Z J，Yang W，et al.MicroRNA miR-98 inhibits tumor angiogenesis and invasion by targeting activin receptorlike kinase-4 and matrix metalloproteinase-11［J］.Oncotarget，2012，3（11）：1370-85.

［11］Xiang Q，Tang H，Yu J，et al.MicroRNA-98 sensitizes cisplatinresistant human lung adenocarcinoma cells by up-regulation of HMGA2［J］.Pharmazie，2013，68（4）：274-81.

［12］Gramantieri L，F(xiàn)ornari F，F(xiàn)erracin M，et al.MicroRNA-221 targets Bmf in hepatocellular carcinoma and correlates with tumor multifocality［J］.Clin Cancer Res，2009，15（16）：5073-81.

［13］Zhang Y，Takahashi S，Tasaka A，et al.Involvement of microRNA-224 in cell proliferation，migration，invasion，and anti-apoptosis in hepatocellular carcinoma［J］.J Gastroenterol Hepatol，2013，28（3）：565-75.

［14］Zhao A，Zeng Q，Xie X，et al.MicroRNA-125b induces cancer cell apoptosis through suppression of Bcl-2 expression［J］.J Genet Genomics，2012，39（1）：29-35.

［15］Lin C J，Gong H Y，Tseng H C，et al.miR-122 targets an antiapoptotic gene，Bcl-w，in human hepatocellular carcinoma cell lines［J］.Biochem Biophys Res Commun，2008，375（3）：315-20.

Effect of miR-98 on proliferation，apop tosis，invasion and migration of hepatocellular carcinoma HepG2 cells

Gao Shuang，Li Wencheng，Liu Jiatao，et al
（Dept of Oncology，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230001）

AbstractObjective To investigate the potential mechanism of miR-98’s effects on proliferation，apoptosis，and invasion／migration of HepG2 hepatocellular carcinoma（HCC）cells.Methods miR-98mimics，mimics-NC，miR-

98 inhibitor and inhibitor-NC were transiently transfected into HepG2 cells.Effects of miR-98 on proliferation，apoptosis，invasion／migration of HepG2 cells were determined by MTT assay，flow cytometer，and Transwell assay.Western blot was then performed to determine Bcl-2 expression levels in each group.Results MTT assay demonstrated that proliferation rate of HepG2 cells in miR-98 overexpressing group was significantly lower compared with control groups.Annexin V-FITC／PI revealed that apoptosis was more prominent in miR-98 overexpressing group compared with control groups.Transwell assay revealed that invasion and migration were significantly attenuated in miR-98 overexpressing group compared with control groups.Western blot demonstrated that Bcl-2 expression level was lower in miR-98 overexpression group compared with control groups.Conclusion miR-98 serves as a suppressor in the development of HCC；miR-98 promotes apoptosis of HCC cells by down regulating expression of Bcl-2.

Key wordsmiR-98；HepG2；proliferation；apoptosis；invasion；migration

作者簡介：高 爽，女，碩士研究生；孫國平，男，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：sunguoping＠ahmu.edu.cn

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（編號：81272739）；安徽省科技攻關(guān)項(xiàng)目（編號：12010402122）

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號1000-1492（2015）05-0594-06

中圖分類號R 735.7