羅晚媛 唐瑩 何本夫

血漿EBV-DNA表達水平與鼻咽癌分期的相關性分析

羅晚媛 唐瑩 何本夫

目的研究血漿EBV-DNA表達水平與鼻咽癌分期的相關性。方法選擇了55例鼻咽癌患者，同時選取同期住院治療的55例其他類型的腫瘤患者作為其他類腫瘤對照組及55例體檢健康者為健康對照組，比較分析鼻咽癌組與對照組患者的血漿EBV-DNA陽性檢出情況，鼻咽癌組患者與對照組血漿EBV-DNA濃度及血漿EBV-DNA陽性的鼻咽患者早期和晚期的拷貝數(shù)。結果鼻咽癌組血漿EBV-DNA檢出陽性率為72．7%，明顯高于其他類腫瘤對照組的陽性率(23．7%)以及健康對照組(10．9%)，具有統(tǒng)計學的意義(P＜0．05)。鼻咽癌組患者的血漿EBV-DNA濃度較高，達到了13654．5 copies/mL，而其他類腫瘤對照組及健康對照組的血漿EBV-DNA濃度均為0，具有統(tǒng)計學的意義(P＜0．05)。觀察還發(fā)現(xiàn)血漿EBV-DNA陽性的鼻咽患者晚期血漿EBV-DNA拷貝數(shù)較高，達到了(201．48±176．19)，明顯高于早期的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)(9．60±10．77)，兩組數(shù)據(jù)進行比較，具有統(tǒng)計學的意義(t=4．3312，P=0．0001)。結論熒光定量的PCR檢測血漿EBV-DNA是1種比較可靠的方法，能夠有效診斷鼻咽癌，且血漿EBV-DNA與鼻咽癌的分期關系密切，該方法適合廣泛地推廣。

血漿;EBV-DNA;鼻咽癌分期

(The Practical Journal of Cancer，2015，30:1116～1118)

鼻咽癌是多發(fā)于我國南方的一種惡性腫瘤，地域的特征比較典型，多分布于廣西廣東及福建省等地［1］。一部分的患者常發(fā)病隱匿，等到顯露癥狀時多為晚期，嚴重的影響生活質量，且在臨床上的治療較棘手，預后也極差，因此有必要對病癥進行準確有效的診斷及監(jiān)測［2］。相關的資料顯示，鼻咽癌和EB病毒之間存在密切的關系，鼻咽癌的患者血漿/血清中能夠檢測出腫瘤的源性EB病毒的DNA即EBV-DNA［3］。EB病毒(EBV)目前會使傳染性的單核細胞出現(xiàn)增多的癥狀，為嗜B淋巴的細胞中的病毒成員，據(jù)資料顯示，EBV和人類目前的多種惡性腫瘤均存在相關性，尤其和鼻咽癌有著密切的關系，患者外周血的EBV-DNA所處水平和病灶殘留、復發(fā)及轉移等均有顯著的關系［4］。近年來隨著定量PCR的技術發(fā)展，檢測血漿中EB-DNA也引起了學者的注意［5］。為此，我院對接受的鼻咽癌患者進行EBV-DNA表達水平與鼻咽癌分期的相關性進行研究，取得了不錯的效果，具體如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料

本次研究中選擇了自2013年11月至2014年11月在我院接受治療的55例鼻咽癌的患者，全部患者均經(jīng)鼻咽活檢病理檢查證實。本次研究是在患者的知情下實施，并經(jīng)我院倫理委員會的認可。鼻咽癌組中39例男性患者，16例女性患者，年齡為19～66歲，平均年齡為(41．0±5．4)歲，病理類型:3例泡狀核癌，4例中分化鱗癌及48例低分化鱗癌。臨床分期:10例Ⅰ期，15例Ⅱ期，20例Ⅲ期，10例Ⅳ期。同時選取同期住院治療的55例其他類型的腫瘤患者作為其他類腫瘤對照組，其中40例男性，15例女性，年齡為20～69歲，平均(42．9±4．7)歲;20例肺癌，13例胃癌，11例乳腺癌，7例淋巴癌及4例直腸癌。再選取55例體檢健康者為健康對照組，其中40例男性，15例女性，年齡為20～64歲，平均年齡為(40．1±4．9)歲，各個方面檢查均為正常者，見表1。

表1 三組研究對象的基本資料比較分析/例

1．2 方法

抽取所有研究對象3 mL血加入EDTA的抗凝管中，經(jīng)過1 600 g離心后，將上層的血漿進行分離，取出50 μL的血漿置于-20℃中凍存，使用Qiagen(德國)生產(chǎn)的試劑盒，按照說明書提示對血漿的DNA進行提取。采用熒光定量的PCR法對血漿EBV-DNA進行檢測，EBV基因的擴增試劑盒是由中山大學的達安診斷中心所提供，設備為Roche公司(德國)生產(chǎn)出Light-CyclerII型熒光定量的PCR儀，具體的檢測方法按照說明書來操作。

1．3 評價方法

計算血漿中的EBV-DNA:C=Qx(1/Vcxt)× (VDNA/VPCR)，其中C是待測血漿中EBV-DNA濃度(mL-1)，Q是PCR進行擴增后由計算機所檢測出原始DNA的拷貝數(shù)，VDNA抽提后所得DNA的稀釋液的體積，VPCR是用來PCR擴增后DNA的體積，Vcxt是抽提DNA時用到的血漿體積。檢測的極限是0 mL-1，≥0 mL-1為陽性［6］。

1．4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2．1 鼻咽癌組與對照組患者血漿EBV-DNA陽性檢出情況

觀察發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組患者血漿EBV-DNA檢出陽性率為72．7%，明顯高于其他類腫瘤對照組的陽性率(23．7%)及健康對照組陽性率(10．9%)，對數(shù)據(jù)進行比較具有統(tǒng)計學的意義(P＜0．05)。

2．2 鼻咽癌組與對照組血漿EBV-DNA濃度比較分析(表2)

觀察發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組患者的血漿EBV-DNA濃度較高，達到了13654．5 copies/mL，而其他類腫瘤對照組及健康對照組的血漿EBV-DNA濃度均為0 copies/ mL，進行比較，具有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)。

表2 鼻咽癌組患者與對照組血漿EBV-DNA濃度的比較分析(copies/mL)

2．3 血漿EBV-DNA陽性的鼻咽患者早期和晚期的拷貝數(shù)比較分析

觀察發(fā)現(xiàn)血漿EBV-DNA陽性的鼻咽患者晚期的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)較高，達到了(201．48± 176．19)，明顯高于早期的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)(9．60±10．77)，對兩組數(shù)據(jù)進行比較，具有統(tǒng)計學意義(t=4．3312，P=0．0001)。

3 討論

鼻咽癌為發(fā)生在鼻咽腔的頂部及側壁處的1種惡性腫瘤，是正常上皮組織經(jīng)過分化而產(chǎn)生的［7］。該疾病的發(fā)病與環(huán)境的因素、遺傳的易感性、飲食的習慣及EB病毒的感染等多種因素均有關系，不過與EB病毒間相關性更大［8］。目前我國NPC的發(fā)病率約占全世界的80%，因為解剖的位置較為特殊，往往不能夠通過手術進行切除治療，對患者的生活和生理上帶來了不利的影響，且易局部復發(fā)和轉移致使患者死亡，給患

者的生命危險帶來了威脅［9］。

當前，診斷NPC、病情的進展及預后可以通過影像學的檢查來完成，但是該檢查方法價格昂貴，且容易漏診［10］。資料又顯示在患者體內(nèi)能檢測出來多種的EB病毒抗體，抗體的指標能幫助鼻咽癌患者的篩查及輔助的診斷［11］。但是曹素梅等人在對NPC的患者進行放療治療中監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，當腫瘤開始縮小時，EBVDNA的水平出現(xiàn)迅速的下降，但抗體的水平卻無明顯的變化，顯示在對NPC患者的治療效果進行監(jiān)測時，比EB病毒抗體有更好的效果［12］。

臨床上發(fā)現(xiàn)使用熒光定量的PCR技術來對NPC診斷及檢測具有不錯的效果［13］。Tan等使用RT-PCR技術對游離的EBV-DNA片段進行檢測發(fā)現(xiàn)，患有鼻咽癌的人所檢出的陽性率比正常的人群明顯要高，在鼻咽癌的患者中DNA定量達到2043 copies/mL，要高于正常人群的0 copies/mL，說明血漿EBV-DNA對于鼻咽癌的診斷具有價值［14］。在本次研究中，也發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌患者中檢出的陽性率為72．7%，要高于其他類腫瘤患者的陽性率23．7及健康人群的陽性率10．9%。同時鼻咽癌患者的血EBV-DNA濃度較高，達到了13654．5 copies/mL，而其他類腫瘤患者及健康人群的血漿EBV-DNA濃度均為0 copies/mL，這與文獻內(nèi)容一致。

相關資料顯示，血漿EBV-DNA表達水平差異與鼻咽癌分期呈一定的相關性［15］。在本次研究也同樣發(fā)現(xiàn)血漿EBV-DNA拷貝數(shù)和鼻咽癌的分期有直接關系，患者晚期(Ⅲ、Ⅳ期)的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)達到了201．48±176．19(×104拷貝/mL)，多于患者早期(Ⅰ、Ⅱ期)的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)201．48±176．19 (×104拷貝/mL)。證明了在鼻咽癌的不同分期中，EBV-DNA的含量是有差異的，顯示出EBV-DNA的含量和患者體內(nèi)的腫瘤符合呈正相關，能夠用來評定療效及對病情進行檢測。

總之，血漿EBV-DNA檢測是1種比較可靠的研究方法，能夠有效的診斷鼻咽癌，且血漿EBV-DNA的表達水平的差異與鼻咽癌的分期關系密切，檢測血漿EBV-DNA能夠幫助患者發(fā)現(xiàn)鼻咽癌疾病的危險性。

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Correlation Analysis of Plasma EBV-DNA Expression and NPC Staging

LUO Wanyuan，TANG Ying，HE BenfuThe 421 Hospital of PLA，Guangzhou，510318

ObjectiveTo research the correlation between the expression level of plasma EBV-DNA and nasopharyngeal carcinoma(NPC)staging．Methods55 cases of NPC，55 cases of other types of cancer as tumor control group and 55 cases of healthy patients as healthy control group were selected，all patients were treated in our hospital at the same period．The positive rates and concentration of plasma EBV-DNA of the 3 groups，the plasma EBV-DNA copy number at early and last period of plasma EBV-DNA positive patients were compared and analyzed．ResultsThe positive rate of NPC group was 72．7%，which was significantly higher than of other types of tumors(23．7%)and healthy control group(10．9%)，there had statistical difference(P＜0．05)．The concentrations of plasma EBV-DNA in NPC patients reached13654．5 copies/mL，while that of other groups both were 0 copies/mL，there had statistical difference(P＜0．05)．Among the plasma EBV-DNA positive patients，the copies of plasma EBV-DNA at last period reached(201．48±176．19)，which was higher than at early period(9．60±10．77)，there had statistical difference(t=4．3312，P=0．0001)．ConclusionFluorescence quantitative PCR detection of plasma EBV-DNA is reliable，it can effectively diagnose NPC，and plasma EBV-DNA is closely related with NPC staging．It is worthy of promotion．

Plasma;EBV-DNA;Staging of nasopharyngeal carcinoma(NPC)

10．3969/j．issn．1001-5930．2015．08．003

R739．63

A

1001-5930(2015)08-1116-03

2015-03-29

2015-04-29)

(編輯:吳小紅)

廣東省科技計劃項目(編號:2012B031800408)

510318解放軍四二一醫(yī)院

何本夫