衛(wèi)艷芬王健

EGF在子癇前期患者胎盤組織中的表達及意義

衛(wèi)艷芬王健

【摘要】目的探討EGF在子癇前期患者胎盤組織中的表達及其意義。方法采用化學組織免疫的方法，對正常孕婦34例(對照組)和42例有子癇前期的患者(其中輕度子癇前期患者25例，重度子癇前期患者17例)的胎盤組織中EGF的表達水平進行檢測。結果在正常妊娠和子癇前期各組織中EGF都有表達，且更明顯的部位的表達是在滋養(yǎng)細胞胞漿中，比較正常妊娠組與輕度子癇前期組，在胎盤組織中EGF的表達顯著增強，其差異有統(tǒng)計學意義( P＜0．01) ;比較重度子癇前期組與正常妊娠組，EGF在重度子癇前期的胎盤組織中的表達顯著增強，差異有統(tǒng)計學意義( P＜0．01) ;比較輕度子癇前期組與重度子癇前期組，EGF在胎盤組織中的表達變化不顯著，其差異無統(tǒng)計學意義( P＞0．05)。結論EGF對正常妊娠的維持起到了一定的保護作用; EGF在胎盤組織中的表達明顯下降，滋養(yǎng)細胞的浸潤能力受到了影響，與子癇前期的發(fā)病可能有關。

【關鍵詞】子癇前期;胎盤組織;免疫組化;表皮生長因子;妊娠高血壓疾病

作者單位: 050051石家莊市，河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院第一手術室(衛(wèi)艷芬)，婦產(chǎn)科(王健)

子癇前期是產(chǎn)科的一個并發(fā)癥，而且它是最常見及最嚴重的，它有極其復雜的病因，圍產(chǎn)兒和孕產(chǎn)婦病死率升高的主要原因就是由于子癇前期導致的。研究發(fā)現(xiàn)，滋養(yǎng)細胞在子癇前期的浸潤表淺、螺旋動脈在子

癇前期的重鑄障礙是由于患者胎盤滋養(yǎng)細胞在子癇前期凋亡增加導致的［1］，子癇前期的發(fā)病與其緊密關聯(lián)，其尚未完全清楚其中的病理原因。表皮生長因子( epidermal growth factor，EGF)在人類多種組織中都有，它是一種多肽，具有廣泛生物學活性，其主要被頜下腺、十二指腸及胰腺分泌。胎兒、胎盤在生長發(fā)育過程中，增加了表皮生長因子和其EGFR(即受體)的含量，對胎盤和胎兒的生長發(fā)育的過程有著非常重要的作用，對胎盤功能的影響、影響調控著床、滋養(yǎng)細胞合成分泌及其分化有促進作用，如在妊娠期間EGF的含量下降可導致早期流產(chǎn)、胎盤發(fā)育不良、妊娠期高血壓疾病( HDCP)等各種病理懷孕。此文章憑借檢驗測試在患者胎盤組織中尤其是在子癇前期中EGF的表達，探討在子癇前期疾病發(fā)病機制中EGF所起的的作用。

1　資料與方法

1．1一般資料選擇自2009年1月份到2011年3月份在本院住院且妊娠分娩的42例子癇前期患者作為其研究對象，其中輕度子癇前期患者25例，平均年齡( 28．25±1．37)歲;平均孕周( 38．03±1．42)周;重度子癇前期17例，平均年齡( 29．34±2．03)歲;平均孕周( 36．4±1．58)周。選擇同期正常孕婦34例患者(因狹窄骨盆、胎兒宮內窘迫、產(chǎn)程的異常、臀位等指征需要做剖宮產(chǎn)分娩)作為對照組，平均年齡( 26．35 ±2．25)歲;平均孕周( 38．6±2．10)周。進行診斷子癇前期的標準以《婦產(chǎn)科學》(第7版)作為依據(jù)［1］。將2組孕婦中的孕周、孕次和年齡進行比較，差異無統(tǒng)計學意義( P＞0．05)，有可比性。

1．2試劑抗兔抗人表皮生長因子多克隆抗體——是從美國SNTA公司買來的試劑，鼠抗人ICAM-1單克隆抗體組化免疫SP試劑盒和DAB顯色劑——是從北京中山生物技術有限公司買來的。

1．3采集標本及制作各標本剖宮產(chǎn)手術后等娩出胎盤后，在胎盤母體面的中央分別迅速取胎盤組織約1 cm×1 cm×1 cm大小，而且不能有壞死灶及鈣化灶，先沖洗(用0．9%氯化鈉溶液)干凈后再固定(用中性甲醛)，最后經(jīng)過脫水處理后常規(guī)進行包埋(必須用石蠟)，這樣石蠟包塊就做成了。

1．4檢測定性組化免疫在各組胎盤組織中進行對EGF的表達染色，其過程及結果依照SP試劑盒上的說明執(zhí)行，采用已知的陽性標本做陽性對照，陰性對照采用PBS代替一抗。

1．5判定標準在光鏡下棕黃色顆粒存在于細胞內且在排除非特異性著色情況下，為EGF的陽性表達。此過程由兩名病理醫(yī)師來完成，他們采用雙盲法閱片來共同完成。半定量分析的進行按照Fromowitz等的組化免疫綜合計分法。采用高倍鏡( 1×40) ( 5個)，且用不設任何條件，隨意的視野的陽性細胞的百分比平均數(shù)作為陽性細胞的百分比。表示著色強度用多數(shù)陽性細胞的染色的情況計算得分。首先，打分根據(jù)陽性細胞占細胞總數(shù)的百分數(shù)進行:記0分代表沒有陽性細胞;記1分代表陽性細胞占細胞總數(shù)的1%～25%，記2分代表陽性細胞占細胞總數(shù)的26%～49%;記3分代表陽性細胞占細胞總數(shù)≥50%。然后再根據(jù)其染色的深淺程度進行打分即陽性細胞的染色強度，記0分為陰性;記1分代表淺黃色;記2分為棕黃色;記3分表示棕褐色。最后把二者的分數(shù)進行相加，(－)為0～1分; ( + )為2分; ( + + )為3～4分; 5 ～6分為( + + + )。其中以(－)、( + )視為低表達，( + + )、( + + + )視為高表達。

1．6統(tǒng)計學分析將應用SPSS 13．0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

EGF在妊娠高血壓疾病各組和正常妊娠組的胎盤組織中都有顯著陽性表達，其染色特別是在滋養(yǎng)細胞胞漿中尤其很明顯，而在細胞核中卻沒有明顯染色。比較正常妊娠組與輕度子癇前期組，胎盤組織中EGF的表達也顯著增強，差異有統(tǒng)計學意義( P＜0．01) ;將正常妊娠組與重度子癇前期組作比較，胎盤組織中表皮生長因子的表達顯著增強，差異有統(tǒng)計學意義( P ＜0．01) ;將輕度子癇前期組與重度子癇前期組作比較，在胎盤組織中EGF的表達沒有明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義( P＞0．05)。見表1。

表1　EGF在3組胎盤組織中的表達，其結果的比較例( %)

3　討論

HDCP是妊娠常見并發(fā)癥之一，其母嬰健康受到嚴重威脅，其有復雜的病因和發(fā)病機制，到現(xiàn)在為止還無明確概念，而可以基本上認可的觀點是:胎盤或滋養(yǎng)細胞缺血是子宮失血的實質，其原因是重鑄的螺旋小動脈數(shù)量明顯降低，阻礙了螺旋小動脈的重鑄過程，而且大部分僅限于只是在管徑只有正常妊娠的1/ 2的蛻膜層內部血管進行重鑄，而在子宮淺肌層的螺旋動脈內，滋養(yǎng)細胞的浸潤并不發(fā)生，胎盤的灌流量明顯降低了。HDCP即妊娠期高血壓疾病患者的胎盤滋養(yǎng)細胞的浸潤表淺、螺旋動脈的重鑄過程被限制，導致

子宮-胎盤發(fā)生缺氧和缺血，此病理變化是妊高征的特征性病理變化之一［2］。人類胎盤從無到有的發(fā)生，是滋養(yǎng)細胞吸附在已經(jīng)蛻膜化了的子宮內膜上，碰撞上了子宮小螺旋動脈，緊接著入進到血管腔反向轉移，其順著血管內皮細胞，然后子宮肌層和蛻膜的淺1/3 ～1/2也同時跟著浸潤，然后血管內皮細胞分化而且被更換掉，進而導致血管的低電阻高流量的的形態(tài)變化的促成，胎兒的血流供應因此而也大大地在幅度上增加了，這樣保證提供給了胎兒所需要的營養(yǎng)物質，所以理論上說的“生理重鑄螺旋小動脈”的過程就是這樣發(fā)生的，在固定胎兒母體和胎盤間血液循環(huán)起著舉足輕重的作用［3］。在正常妊娠時，螺旋動脈被滋養(yǎng)細胞侵入，繼而發(fā)生生理性血管重鑄，此過程發(fā)生在位于蛻膜和子宮肌層內1/3段的螺旋動脈，提供了絨毛間隙的血液流動量;通過滋養(yǎng)細胞母體和胎兒進行有規(guī)律的交換著充足的氧氣、營養(yǎng)物及其代謝產(chǎn)物，維持著整個有機循環(huán)。

EGF屬于一種由53個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，其分子質量相對為6 045 Da，它在人體多種組織中都存在，人體胃腸道腺體、頜下腺、生殖器官以及多種腫瘤組織等都有EGF。它是細胞生長調節(jié)因子，且是最重要的細胞生長調節(jié)因子之一，刺激細胞增生和分化，表皮的生長和角化是其最主要的功能。孕婦在妊娠期間及胎兒許多組織和尿、血漿、羊水中都有EGF的表達，并具有生理作用多種如促進滋養(yǎng)細胞增殖、分化、胚胎著床及胎兒器官發(fā)育和功能成熟等等，其在胎兒、胎盤的生長發(fā)育過程中起著極其重要的作用［4］。另外有研究證明EFG作為胎盤分泌的生長因子，EGF必須與其受體( EGFR)結合，其生物學效應才能發(fā)揮，兩者之間具有高度特異性以及其親和力，在滋養(yǎng)細胞中由于低表達的EGFR使得表皮生長因子不能更有效地發(fā)揮其正常的生物學之效應，因而滋養(yǎng)細胞的增殖、分化和侵入被大大地影響了［5］。在正常細胞分裂增殖和惡性轉化中EGF和EGFR具有重要作用［6］。臨床研究表明，先兆子癇發(fā)病的重要因素之一就是絨毛外細胞滋養(yǎng)層細胞對子宮螺旋動脈的侵入不足以及滋養(yǎng)層細胞的異常凋亡［7，8］，Leach等［9］發(fā)現(xiàn)，采用原位雜交技術和組化免疫方法，HB-EGF蛋白及其mRNA在先兆子癇胎盤組織中的表達較在正常妊娠者中下降將近5倍。Sawicki等［10］通過作實驗，檢測在胎盤表面滋養(yǎng)細胞的代謝產(chǎn)物，按照組織化學免疫的方法，發(fā)現(xiàn)表皮生長因子的正常表達能夠促使滋養(yǎng)細胞的增殖速度加快，把細胞滋養(yǎng)細胞分化誘導成合體滋養(yǎng)細胞。由于在胚泡的植入以及滋養(yǎng)層細胞的增殖、分化和侵入的所有過程中EGF都參與在其中，因此各種病理情況如早期流產(chǎn)、妊娠期高血壓疾病及胎盤發(fā)育不良等的發(fā)生就是由于EGF功能缺陷或表達過度導致的。EGF的表達低水平，影響降低了滋養(yǎng)細胞表面整合素的表達水平，緊接著滋養(yǎng)細胞的遷移及侵蝕的過程也受到了影響，分化程度不好的滋養(yǎng)細胞，重鑄過程受阻的螺旋動脈，都不能正常地發(fā)揮作用，阻礙了子宮胎盤的血流供應，因此導致了HDCP的發(fā)生。本研究結果表明，EGF在子癇前期患者胎盤組織中的表達強度均顯著低于對照組( P＜0．01)。這表明，表皮生長因子表達水平的下降，阻礙了滋養(yǎng)細胞的浸潤能力，進而螺旋小動脈的生理重鑄過程發(fā)生了障礙，繼而降低了胎盤的灌注量，滋養(yǎng)細胞的失血進一步加重，最終胎盤淺著床形成了，導致子癇前期的發(fā)生，構成了子癇前期的發(fā)病機制之一。

綜上所述，EGF對維持正常妊娠起著重要作用，且在胎兒生長發(fā)育過程中也有著至高無上的作用，滋養(yǎng)細胞浸潤能力受其嚴重影響著，EGF通過各種途徑發(fā)揮其效應，EGF在子癇前期患者胎盤組織中表達降低，“胎盤淺著床”形成了，子癇前期的發(fā)病與其可能相關密切。所以，臨床上為預防及治療子癇前期的發(fā)生可以采用通過實施一定的方法來促使表皮生長因子的表達水平達到正常，并隨即一直保持來達到預期的目的，即對子癲前期的發(fā)生達到預防和治療的目的。

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·論著·

收稿日期:( 2014－08－29)

通訊作者:王健，050051河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院婦產(chǎn)科; E-mail: leeaik2004@163．com

doi:10．3969/j．issn．1002－7386．2015．04．029

【中圖分類號】R 714．245

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002－7386( 2015) 04－0556－03