許華斌 張光滿 黃 琴

六安地區(qū)健康成人超敏C反應(yīng)蛋白參考區(qū)間研究

許華斌 張光滿 黃 琴

目的 建立六安地區(qū)成人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)的參考區(qū)間。 方法 按照CLSI文件C28-A3《臨床實(shí)驗(yàn)室如何確定和建立生物參考區(qū)間》要求，于2014年1～8月篩選前來(lái)六安市第二人民醫(yī)院進(jìn)行健康體檢者137名，采用顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法測(cè)定血清hs-CRP濃度。 結(jié)果 去除3例離群值后，134例六安地區(qū)健康成人血清hs-CRP明顯呈偏態(tài)分布，經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，男女之間無(wú)組間差別(Z

健康成人，六安；超敏C反應(yīng)蛋白；參考區(qū)間

C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein ,CRP)是急性時(shí)相蛋白之一，可以激活補(bǔ)體，加強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬而起到調(diào)理作用，從而清除入侵機(jī)體的病原微生物，以及損傷、壞死、凋亡的組織細(xì)胞，在機(jī)體的天然免疫過(guò)程中發(fā)揮重要的保護(hù)作用。超敏C-反應(yīng)蛋白(hyper sensitivity C-reactive protein, hs-CRP)與CRP是同一種蛋白，只是由于其測(cè)定方法更敏感而得名。采用臨床常規(guī)方法測(cè)定CRP時(shí)，檢測(cè)的線性范圍一般為3～200 mg/L，因檢測(cè)方法缺乏足夠的敏感性，無(wú)法測(cè)出血液中含量更低的CRP；而hs-CRP是采用乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法、顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法等技術(shù)使檢測(cè)的靈敏度得到了很大的提高，檢測(cè)低限延伸為0.005～0.100 mg/L[1]，使得低濃度CRP的測(cè)定更加準(zhǔn)確。在可靠的hs-CRP檢測(cè)方法建立之前，原先血清CRP檢測(cè)正常的人群，其未來(lái)發(fā)生心血管疾病的密切相關(guān)因素中包括了CRP的升高[2]。大量研究資料表明，動(dòng)脈粥樣硬化的血栓除了是脂肪堆積的過(guò)程也是一個(gè)慢性炎癥過(guò)程[3]；hs-CRP輕度升高與冠狀動(dòng)脈事件、中風(fēng)及周圍血管病相關(guān)[2,4-6]，hs-CRP已被證實(shí)是由慢性炎癥引發(fā)心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，檢測(cè)其濃度對(duì)心血管疾病的早期干預(yù)及預(yù)后判斷起重要作用[7]。2003年歐洲高血壓防治指南(ESH/ESC)[8]正式推薦, 高血壓患者需檢測(cè)hs-CRP 水平。各實(shí)驗(yàn)室由于儀器、試劑等原因所使用的正常參考范圍各異，因此有必要建立各自的hs-CRP參考區(qū)間，為臨床診治提供決策依據(jù)。本文對(duì)六安地區(qū)hs-CRP的正常參考區(qū)間進(jìn)行了調(diào)查，具體報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 依據(jù)CLSI C28-A3文件的指導(dǎo)原則，本實(shí)驗(yàn)室所篩選的參考人群應(yīng)滿足以下條件：無(wú)糖尿病、癲癇病、腫瘤、器質(zhì)性腦綜合征、高血壓、慢性感染、冠心病、物質(zhì)濫用、抑郁、狂躁；糖尿病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估為低風(fēng)險(xiǎn)、動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)篩查為低風(fēng)險(xiǎn)；沒(méi)有正在服藥、吃補(bǔ)品、特殊飲食習(xí)慣、近6個(gè)月做過(guò)手術(shù)、從事接觸化學(xué)試劑和放射源的工作、女性處于妊娠期的情況；身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index, BMI)控制在18.5～24.0 kg/m2；心電圖、彩超、胸透、內(nèi)外科檢查正常；實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)滿足以下條件：Glu≤6.11 mmol/L；Cr≤133 mmol/L；UA≤357 mmol/L；TP≤83 g/L；ALB≤55 g/L；GLB≤32 g/L；TB≤20 μmol/L；DB≤6.8 μmol/L；TC≤5.30 mmol/L；TG≤1.71 mmol/L；WBC：(3.97～9.15)×109/L；RBC：(4.09～5.74)×1012/L(男)、(3.68～5.13)×1012/L(女)；Hb：120～160 g/L(男)、110～150 g/L(女)；PLT：(100～300)×109/L，尿常規(guī)正常。

本研究從2014年1～8月收集六安市各縣區(qū)的健康體檢人群，職業(yè)涵蓋公務(wù)員、教師、醫(yī)生、警察、工人、農(nóng)民等。最終得到符合篩選標(biāo)準(zhǔn)且居住在六安地區(qū)的參考個(gè)體137名，其中男性55例，年齡18～77歲，平均40歲；女性79例，年齡18～75歲，平均43歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 采用日立7600-020全自動(dòng)生化分析儀，德國(guó)德賽診斷系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法hs-CRP試劑及其配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

1.2.2 標(biāo)本采集和處理 空腹采血，采血前一天受檢者無(wú)飲酒、無(wú)劇烈運(yùn)動(dòng)，坐姿，自肘靜脈采集靜脈血3～5 mL，不抗凝，離心后分離血清，4 h內(nèi)檢測(cè)完畢。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)均測(cè)定質(zhì)控物。

1.2.3 參考區(qū)間的計(jì)算 按照CLSI C28-A3文件[6]建議的Dixon法判斷離群值，若D/R≥1/3則該極值為離群值(D是極大或極小值與相鄰值的絕對(duì)差異；R是包含極值在內(nèi)的所有值中最大值與最小值之間的差)，應(yīng)棄之，反之則保留。按C28-A3文件推薦的方法計(jì)算Z值和Z*值，若Z>Z*則參考區(qū)間需要按性別進(jìn)行分組；反之，則無(wú)性別差異，男女可以通用一個(gè)參考區(qū)間。計(jì)算Z值時(shí)數(shù)據(jù)應(yīng)為正態(tài)分布，若是偏態(tài)分布則應(yīng)正態(tài)化后再計(jì)算。將有效參考個(gè)體的觀察值按從小到大的順序排列，應(yīng)用非參數(shù)法計(jì)算95%參考區(qū)間。

2 結(jié)果

2.1 參考人群的一般臨床特征描述 本研究以實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)合調(diào)查問(wèn)卷的形式，從生理、病理和生活習(xí)慣等方面排除了對(duì)hs-CRP有影響的因素，男、女各得到了1組可用于計(jì)算參考區(qū)間的參考人群，各組臨床特征見(jiàn)表1。

表1 不同性別參考人群的一般臨床特征描述

2.2 hs-CRP的正態(tài)性檢驗(yàn) 137例六安地區(qū)健康成人各年齡段hs-CRP的水平分布在0.172 7～6.882 4 mg/L之間，經(jīng)Dixon法判斷，有3個(gè)離群值出現(xiàn)，去除離群值后，hs-CRP的分布為0.172 7～2.532 4 mg/L，經(jīng)Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)P<0.01，表明hs-CRP結(jié)果不服從正態(tài)分布，同時(shí)頻數(shù)分布表也進(jìn)一步說(shuō)明該組數(shù)據(jù)成明顯偏態(tài)分布(圖1)。對(duì)hs-CRP結(jié)果取對(duì)數(shù)后，lg(hs-CRP)經(jīng)Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)P值為0.29，P>0.05，表明服從正態(tài)分布，頻數(shù)分布表見(jiàn)圖2。

2.3 hs-CRP濃度與性別的關(guān)系 134例健康成人根據(jù)性別不同分為兩組，經(jīng)對(duì)數(shù)處理后的數(shù)據(jù)，按照C28-A3文件推薦方法，計(jì)算Z值和Z*值，結(jié)果Z值比Z*值小(見(jiàn)表2)，因此，六安地區(qū)成人hs-CRP參考范圍不需要按性別進(jìn)行分組，可以將男女合并統(tǒng)計(jì)，非參數(shù)法計(jì)算其95%參考上限為2.066 mg/L。

表2 lg(hs-CRP)濃度與性別的關(guān)系

3 討論

目前hs-CRP主要采用乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法、顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法等技術(shù)檢測(cè)，檢測(cè)的靈敏度得到了很大提高，使得低濃度CRP的測(cè)定更加準(zhǔn)確。隨著對(duì)冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病(coronary heart disease, CHD)發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，目前認(rèn)為炎癥反應(yīng)是CHD發(fā)病與進(jìn)展的重要因素之一[7]；而通過(guò)高靈敏度方法測(cè)定的hs-CRP是研究的最廣泛的炎癥標(biāo)志物，直接參與CHD患者粥樣斑塊的發(fā)生、發(fā)展、不穩(wěn)定期及破裂的各個(gè)階段，對(duì)CHD的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后具有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值[9]。對(duì)于hs-CRP，目前各實(shí)驗(yàn)室普遍采用生產(chǎn)廠家的試劑盒所給出的參考范圍，是否適合本地區(qū)人群還需要進(jìn)行驗(yàn)證或調(diào)查。

本研究共收集134例六安地區(qū)健康成人，對(duì)其hs-CRP的參考范圍進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果顯示95%參考上限為2.0664 mg/L。低于文獻(xiàn)報(bào)道的歐洲人[10]和日本人[11]hs-CRP濃度，同時(shí)也比國(guó)內(nèi)報(bào)道的深圳地區(qū)人群[12]低，但比玉溪市人群[13]高。其原因一部分可能是不同種族以及不同生活環(huán)境、飲食習(xí)慣的人群之間hs-CRP血清濃度存在差異；另一部分原因可能是由于本次調(diào)查增加了BMI、糖尿病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、動(dòng)脈粥樣篩查等篩查條件，使得本次調(diào)查人群更接近于健康人群，從而使得hs-CRP檢測(cè)結(jié)果偏低。經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，lg(hs-CRP)結(jié)果符合正態(tài)分布，按照C28-A3文件推薦方法計(jì)算，結(jié)果Z

本次調(diào)查，我們?cè)谂懦惓５耐瑫r(shí)，又增加體重指數(shù)(BMI)排除指標(biāo)，使BMI控制在中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的正常體重指數(shù)范圍之內(nèi)(18.5～24.0 kg/m2)。BMI是體內(nèi)脂肪總量的密切相關(guān)指標(biāo)，簡(jiǎn)單、實(shí)用、可反映全身性肥胖和超重。血清hs-CRP水平與BMI水平相關(guān)[14]，在測(cè)量身體因超重而面臨心臟病、高血壓等風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，BMI比單純的以體重來(lái)認(rèn)定更具準(zhǔn)確性。因此增加BMI指標(biāo)可以更加準(zhǔn)確地去除由于脂肪組織過(guò)多導(dǎo)致的hs-CRP異?？赡?。同時(shí)本研究中還加入了白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)指標(biāo)，從而排除明顯炎癥的干擾。本次調(diào)查新引入的篩查指標(biāo)糖尿病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)篩查，是以往在hs-CRP參考范圍調(diào)查中沒(méi)有采用過(guò)的，目前已有大量文獻(xiàn)表明hs-CRP與糖尿病和冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病的發(fā)生關(guān)系密切[3-7，15]，同時(shí)hs-CRP的基線水平與未來(lái)急性心肌梗死的發(fā)生呈顯著正相關(guān)[2]。因此加入這兩項(xiàng)篩查指標(biāo)可以去除這部分高水平的hs-CRP結(jié)果，這也是我們此次調(diào)查的參考范圍偏低的主要原因。

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(2014-09-20 收稿 2014-12-08 修回)

Investigation of hs-CRP reference interval for healthy adults in Lu'an area

XuHuabin,ZhangGuangman,Huangqin

DepartmentofClinicalLaboratory,Secondpeople′shospitalofLu'an,Lu'an237000,China

Objective To establish the reference interval of high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP) for healthy adults in Lu’an area.MethodsBased on the CLSI Guideline C28-A3 Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory: Approved Guideline-Third Edition, the blood specimens were collected from 137 healthy individuals, including 55 males and 79 females, who had medical examinations in our hospital from Jan 2014 to Aug 2014. The serum concentration of hs-CRP was tested by particle enhanced immune transmission turbidimetry.ResultsExcluding outliers from the data set, the distribution of serum hs-CRP concentrations of 134 cases presented marked skewness. Analysis revealed that, after logarithmic transformation, there was no significant difference in the hs-CRP concentrations between male group and female group (Z

Healthy adult; Lu′an area; high-sensitivity C-reactive protein; Reference interval

安徽省高校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：KJ2013Z343)

237008 安徽省六安市第二人民醫(yī)院(皖西職業(yè)衛(wèi)生學(xué)院附屬醫(yī)院特檢科)

10.3969/j.issn.1000-0399.2015.02.007