劉　炎, 范江濤, 李大海

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 婦科, 廣西 南寧, 530021)

YKL-40蛋白檢測在卵巢癌診斷中的應(yīng)用

劉炎, 范江濤, 李大海

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 婦科, 廣西 南寧, 530021)

摘要:目的檢測卵巢癌患者血清人軟骨糖蛋白-39(YKL-40)及糖類抗原125(CA125)水平，以及卵巢癌組織YKL-40表達(dá)，探討YKL-40蛋白檢測在卵巢癌診斷中的應(yīng)用。方法選擇惡性卵巢癌患者17例，交界性卵巢腫瘤患者16例，以及良性卵巢腫瘤患者19例，另選取非卵巢癌對照患者20例，檢測患者術(shù)前血清CA125水平及YKL-40水平，術(shù)后YKL-40水平，免疫組化檢測卵巢組織YKL-40蛋白表達(dá)情況。結(jié)果術(shù)前血清YKL-40水平隨腫瘤惡性程度增加而顯著升高(P<0.05或P<0.01)，卵巢癌患者手術(shù)前后YKL-40水平具有顯著性差異(P<0.01)。隨腫瘤惡性程度增加，腫瘤組織YKL-40表達(dá)量增加。YKL-40聯(lián)合CA125檢測診斷惡性卵巢癌的靈敏度顯著高于單獨檢測其中之一。結(jié)論YKL-40蛋白表達(dá)可作為卵巢癌的診斷標(biāo)志物，血清YKL-40水平聯(lián)合CA125水平檢測可提高對卵巢癌診斷的靈敏度。

關(guān)鍵詞:人軟骨糖蛋白-39; 糖類抗原125; 卵巢癌; 免疫組織化學(xué)

卵巢癌是婦科三大常見惡性腫瘤之一，病死率高達(dá)47%。卵巢癌早期癥狀無異常，很難被發(fā)現(xiàn)，而大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已是晚期，錯過了最佳治療時期。目前治療方法的進(jìn)步使腫瘤能被最大限度抑制，但5年生存率依然低于40%[1]。因此，臨床一直致力于尋找特異而靈敏的腫瘤標(biāo)志物，以提高卵巢癌早期診斷。糖類抗原125(CA125)最常見于上皮性卵巢腫瘤(漿液性腫瘤)患者的血清中，其診斷的敏感性較高，但特異性較差[2]。近幾年來，人軟骨糖蛋白-39(YKL-40)越來越受人們關(guān)注，研究表明其可作為判斷部分腫瘤預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志[3]。本研究通過免疫組織化學(xué)檢測YKL-40在卵巢組織中的表達(dá)，聯(lián)合檢測血清CA125與YKL-40水平，探討YKL-40在卵巢癌診斷中的意義。

1資料與方法

1.1一般資料

收集2010年10月—2013年10月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院的接受治療的經(jīng)病理檢查確診的52例卵巢癌患者手術(shù)切除的卵巢癌組織，包括卵巢上皮性惡性腫瘤17例，其中腺癌低分化癌9例、漿液性癌5例、黏液性癌1例、交界性癌2例；交界性漿液性瘤10例、交界性黏液瘤6例；卵巢良性腫瘤19例，其中黏液性瘤6例、漿液性瘤8例、腺瘤囊腺瘤5例。另選取非卵巢癌患者手術(shù)切除的卵巢組織標(biāo)本20例作為對照。所有入選患者具有完整的臨床和病理資料，各組患者均否認(rèn)近期服藥史、內(nèi)分泌疾病或其他腫瘤病史。各組年齡無顯著差異(P>0.05), 具有可比性。

1.2方法

1.2.1血清學(xué)指標(biāo)測定：所有患者術(shù)前3 d以及術(shù)后7 d空腹抽取外周靜脈血3～5 mL保存于真空干燥管內(nèi)，室溫靜置1～2 h, 3 000 r/min離心15 min, 取上清，分裝保存于-80 ℃?zhèn)溆?。根?jù)YKL-40 ELISA試劑盒(上海藍(lán)基生物科技有限有限公司)說明書測定血清樣本吸光度值。血清CA125水平使用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ECLI)進(jìn)行檢測。

1.2.2免疫組織化學(xué)：病理組織標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定6 h后，常規(guī)石蠟包埋，3.0 μm連續(xù)切片，滴加一抗(小鼠抗YKL-40單克隆抗體，美國bioscientific公司)，常規(guī)洗脫，加入二抗(通用型二步法檢測系統(tǒng)PV-9000，北京中杉金橋生物有限公司)孵育，作DAB(DAB顯色試劑盒，北京中杉金橋生物有限公司)染色，蘇木素復(fù)染、氨水返藍(lán)5 min, 封片、鏡檢。用膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3結(jié)果判定

1.3.1血清學(xué)檢查：觀察術(shù)前患者血清CA125水平，CA125>35 U/mL為陽性[4]。根據(jù)Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線計算血清YKL-40含量，YKL-40陽性是以正常對照組的均值+1.96個標(biāo)準(zhǔn)差，即95%置信區(qū)間上限值[5]。

1.3.2免疫組化結(jié)果：免疫組化鏡檢結(jié)果由2名高級病理醫(yī)師進(jìn)行計數(shù)，細(xì)胞質(zhì)顯示呈棕黃或棕褐色顆粒染色，為陽性反應(yīng)，評分方式結(jié)合陽性細(xì)胞染色強(qiáng)弱及陽性細(xì)胞百分比兩種記分方法記錄結(jié)果。按染色強(qiáng)度：陰性記為0分、弱陽性計1分、中陽性計2分、強(qiáng)陽性計3分。按陽性細(xì)胞數(shù)：在400倍視野下每例標(biāo)本隨機(jī)選取不重復(fù)5個視野，計算陽性細(xì)胞所占總細(xì)胞的百分比，少于1%記為0分、1%～10%記為1分、11%～50%為2分、超過50%為3分。2種積分結(jié)果相乘，定義0～3分為YKL-40正常表達(dá)，4～9分為過量表達(dá)。

2結(jié)果

2.1YKL-40在血清中的表達(dá)

術(shù)前，各組之間兩兩比較，YKL-40水平隨腫瘤惡性程度增加而顯著升高(P<0.05或P<0.01)。術(shù)后, 4組患者血清YKL-40水平無顯著差異(P>0.05)。良性卵巢瘤、交界性腫瘤組及惡性腫瘤組術(shù)前血清YKL-40水平與術(shù)后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

μg/L

與對照組比較, *P<0.05, **P<0.01。

與良性腫瘤組比較, ##P<0.01。

與交界性腫瘤組比較, ▲P<0.05。

與同組術(shù)前相比, △P<0.01, △△P<0.05。

2.2YKL-40在卵巢癌組織中的表達(dá)

卵巢癌組織標(biāo)本中YKL-40的表達(dá)見圖1。YKL-40在對照組正常表達(dá)，卵巢良性腫瘤組織中過表達(dá)率26.32%(5/19), 交界性腫瘤組織中過表達(dá)率50.00%(8/16), 而在卵巢惡性腫瘤組織中成過量表達(dá)率82.36%(14/17)。良惡性腫瘤組織中YKL-40表達(dá)量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

A. 良性腫瘤組織, YKL-40正常表達(dá); B. 卵巢惡性上皮性腫瘤組織, YKL-40過度表達(dá)

圖1卵巢良惡性腫瘤組織中YKL-40蛋白表達(dá)情況免疫組化染色200倍

2.3患者術(shù)前血清YKL-40、CA125單獨和

聯(lián)合檢測陽性率統(tǒng)計結(jié)果

YKL-40、CA125單獨和聯(lián)合檢測在不同分組中的陽性檢出率見表2。惡性腫瘤組YKL-40陽性率高于CA125陽性率。二者聯(lián)合可使惡性腫瘤組陽性檢出率提高至88.23%，對交界性腫瘤的陽性檢出率提高至62.50%。以對照組織為參照，YKL-40、CA125單獨檢測及二者聯(lián)合應(yīng)用對惡性腫瘤診斷的靈敏度分別為82.35%、70.59%、88.23%, 陽性預(yù)測值分別為93.33%、92.31%、93.76%, 陰性預(yù)測值分別為86.36%、79.17%、90.45%。二者聯(lián)合檢測時，檢測敏感性高于單獨檢測其中的任何一項。

表2　4組患者血清中YKL-40和CA125陽性檢出率[n(%)]

3討論

YKL-40是哺乳動物18糖蛋白家族中的一員，研究[6-7]表明其在炎癥、惡性腫瘤增殖浸潤、腫瘤周圍血管發(fā)生、細(xì)胞外基質(zhì)的重塑等過程中發(fā)揮重要作用[8]，是腫瘤生長因子的一種，多種惡性腫瘤患者血清YKL-40高表達(dá)[9]。其已被作為一種潛在的腫瘤血清學(xué)標(biāo)記物[10], 可用于評估卵巢癌等多種人類惡性腫瘤的發(fā)展和預(yù)后，研究[11]發(fā)現(xiàn)其對早期卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等診斷靈敏度高于CA125, 水平升高的早期卵巢癌患者明顯預(yù)后不良。Choudhuri等[12]也對Ⅲ期卵巢癌患者血清中YKL-40進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)血漿YKL-40>130 ng/mL的Ⅲ期卵巢癌患者生存時間明顯縮短，可作為卵巢癌的一個獨立預(yù)后因素。本研究顯示卵巢良惡性交界性腫瘤組YKL-40水平均高于對照組，且隨著惡性程度增加YKL-40水平也顯著增加，提示其可作為臨床分期的參考。且手術(shù)前后YKL-40差異顯著，表明其可作為臨床手術(shù)療效的判斷指標(biāo)。

本研究中免疫組化結(jié)果證實血清學(xué)檢查的結(jié)果，即組織YKL-40表達(dá)越高，血清學(xué)表達(dá)越高。良性卵巢腫瘤組織YKL-40表達(dá)量最低，惡性卵巢癌組織中YKL-40表達(dá)量最高。但由于間質(zhì)細(xì)胞也不同程度表達(dá)YKL-40，且隨病理分期增加，卵巢癌組織浸潤及轉(zhuǎn)移更廣泛，腫瘤間質(zhì)更豐富[13]，因此免疫組化結(jié)果產(chǎn)生的假陽性率較高，應(yīng)結(jié)合YKL-40血清學(xué)分析，以進(jìn)一步確定病理檢查結(jié)果。

CA125在正常卵巢組織中不存在, 80%的卵巢惡性腫瘤患者血清CA125升高，但近半數(shù)的早期病例并不升高，故不單獨用于卵巢惡性癌的早期診斷，且90%患者血清CA125與病程進(jìn)展無關(guān)，具有較高的假陽性率[14]，主要用于輔助診斷惡性漿液性卵巢癌、上皮性卵巢癌，同時也是卵巢癌術(shù)后、化療后療效觀察的指標(biāo)。本研究顯示CA125診斷良性、交界性、惡性卵巢腫瘤的靈敏度均低于YKL-40，而二者結(jié)合診斷對良性、交界性、惡性卵巢腫瘤的診斷靈敏度進(jìn)一步提高。表明YKL-結(jié)合其他檢查(如CA125)有望進(jìn)一步提高對惡性卵巢癌的診斷水平。與國外的研究結(jié)果基本一致[15-16]。

綜上所述，YKL-40蛋白表達(dá)可作為卵巢癌的診斷標(biāo)志物，血清YKL-40水平聯(lián)合CA125水平檢測在惡性卵巢癌的診斷等方面有較高的臨床價值，可提高對卵巢癌診斷的靈敏度[17-18]。

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Application of YKL-40 protein detection

in the diagnosis of ovarian cancer

LIU Yan, FAN Jiangtao, LI Dahai

(DepartmentofGynecology,TheFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedical

University,Nanning,Guangxi, 530021)

ABSTRACT:ObjectiveTo detect the serum levels of human cartilage glycoprotein-39 (YKL-40) and carbohydrate antigen 125 (CA125) and the expression of YKL-40 in patients with ovarian cancer so as to explore the application of YKL-40 protein detection in diagnosis of ovarian cancer. MethodsA total of 17 patients with malignant ovarian cancer, 16 pateitns with borderline ovarian cancer, 19 patients with benign ovarian cancer and 20 patients with non-ovarian cancer were selected. The levels of serum CA125 and YKL-40 level before operation and YKL-40 level after operation were detected. Immunohistochemical method was used to detect TKL-40 protein expression in tissues of ovarian cancer. ResultsYKL-40 level increased along with the malignant severity of ovarian cancer before operation (P<0.05 or P<0.01), and there was significant difference of YKL-40 level before and after operation (P<0.01). The expression of YKL-40 in tumor tissue increased with the degree of malignancy deterioration. The sensitivity of YKL-40 combined with CA125 detection was significantly higher than that of YKL-40 or CA125 detection. ConclusionExpression of YKL-40 protein can be used as a diagnostic marker for ovarian cancer, and combined detection of YKL-40 and CA125 can improve the diagnostic sensitivity for patients with ovarian cancer.

KEYWORDS:human cartilage glycoprotein-39; carbohydrate antigen 125; ovarian cancer; immunohistochemistry

通信作者:范江濤, Email: Jiangtaofan1969@163.com

收稿日期:2014-10-19

中圖分類號:R 737.31

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)03-088-04

DOI:10.7619/jcmp.201503026