李　杰，邢　輝

(1.鐘祥市人民醫(yī)院 檢驗科，湖北 鐘祥431902；2.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院 檢驗科，湖北 武漢430022)

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高白細胞標本對儀器法網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的干擾

李杰1*，邢輝2

(1.鐘祥市人民醫(yī)院 檢驗科，湖北 鐘祥431902；2.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院 檢驗科，湖北 武漢430022)

摘要：目的觀察高白細胞標本對儀器法網(wǎng)織紅細胞計數(shù)(%)及未成熟網(wǎng)織紅細胞組份計數(shù)(IRF%)測定的干擾。方法使用血液分析儀對30例高白細胞標本(>300×109/L)進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)，然后以稀釋液對標本進行不同濃度的稀釋后再進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)，同時將不同濃度標本進行手工法網(wǎng)織紅細胞計數(shù)。結(jié)果30例標本中有11例標本儀器網(wǎng)織紅細胞計數(shù)結(jié)果及未成熟網(wǎng)織紅細胞組份計數(shù)結(jié)果與手工法結(jié)果相比偏高，在稀釋到一定濃度(100×109/L左右或更低)后網(wǎng)織紅細胞濃度與未成熟網(wǎng)織紅細胞組份比例明顯下降，計數(shù)結(jié)果與手工法結(jié)果相符。結(jié)論高白細胞血樣進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)時會受到白細胞的干擾，通過對標本進行稀釋后再進行測定可得到正確的網(wǎng)織紅細胞結(jié)果及未成熟網(wǎng)織紅細胞組份比例。

(ChinJLabDiagn,2015,19:1114)

網(wǎng)織紅細胞計數(shù)是臨床檢驗的常規(guī)項目之一，其濃度測定對疾病的診斷及治療效果判斷有重要意義，故結(jié)果的準確性十分重要。目前網(wǎng)織紅細胞計數(shù)多使用自動化的血液分析儀進行測定，儀器使用熒光染料對標本進行處理后自動分析，除提供網(wǎng)織紅細胞的濃度外還提供其分級參數(shù)如高熒光強度網(wǎng)織紅細胞、中熒光強度網(wǎng)織紅細胞、低熒光強度網(wǎng)織紅細胞、未成熟網(wǎng)織紅細胞組份等，這些參數(shù)已被廣泛的應(yīng)用到各種疾病的診斷和治療之中[1-4]。但我們在工作中發(fā)現(xiàn)高白細胞濃度血樣在進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)時結(jié)果會受到白細胞的干擾，通過對標本進行稀釋后再測定可得到正確的網(wǎng)織紅細胞及組份結(jié)果。

1材料與方法

1.1　儀器與試劑

日本SYSMEX公司XE-5000型全自動血液分析儀及配套試劑。網(wǎng)織紅細胞染液(貝索公司)，雙目顯微鏡(奧林巴斯公司)。

1.2　標本來源

鐘祥市人民醫(yī)院血液科2013年9月-12月血常規(guī)檢驗高白細胞標本共30例，其白細胞濃度均大于>100×109/L。

1.3　測試方法

儀器每日開機后均使用高、中、低配套質(zhì)控物進行測試，測試結(jié)果合格后再進行標本測試。首先進行原倍標本CBC+DIFF+RET測試，然后用配套稀釋液將標本進行不同濃度稀釋后再進行CBC+DIFF+RET測試，觀察其結(jié)果中網(wǎng)織紅細胞濃度(%)變化及各組份的變化。同時將各濃度標本按全國臨床檢驗操作規(guī)程進行手工法網(wǎng)織紅細胞計數(shù)[5]。

1.4　統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1　實驗結(jié)果

儀器測定30例標本中有11例標本在稀釋到一定濃度(100×109/L左右或更低)時網(wǎng)織紅細胞濃度明顯下降。受干擾的病例稀釋前后測試結(jié)果見下表1。

從上表可以看出，11例標本網(wǎng)織紅細胞及未成熟網(wǎng)織紅細胞組份測試結(jié)果隨標本稀釋到一定濃度時(100×109/L左右或更低)明顯下降,與稀釋前相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

±SD)

2.2　儀器法散點圖分析

從儀器散點圖可見，X軸側(cè)向熒光(FSC)紅細胞區(qū)與血小板區(qū)可明顯區(qū)分，但Y軸前向散射光(SFL)散點與正常圖形相比，末端出現(xiàn)許多白色散點與網(wǎng)織紅細胞散點混淆。在提示信息中均提示“RET Abn Scg”，提示散點圖異常(圖1)。異常的散點圖及提示信息在標本稀釋后測定時不再出現(xiàn)(圖2)。

圖1白細胞偏高異常網(wǎng)織紅細胞散點圖圖2白細胞偏高標本稀釋后正常網(wǎng)織紅細胞散點圖

2.3　儀器法與手工方法結(jié)果相比

除11例標本外，各標本原倍及稀釋后標本網(wǎng)織紅計數(shù)結(jié)果兩種方法相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。11例標本計數(shù)結(jié)果偏高，兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(儀器：9.22±5.57%，手工2.13±1.59%，P<0.001)。但當對標本進行稀釋后(100×109/L左右或更低)兩種結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(儀器：1.91±0.97%，手工2.13±1.59%，P>0.05)。

3討論

XE-5000血液分析儀測定網(wǎng)織紅細胞計數(shù)采用熒光染色和激光測量的原理，使用聚次甲基染料對細胞RNA進行染色，同時使用噁嗪對細胞DNA進行染色。由于白細胞所含DNA量遠遠大于網(wǎng)織紅細胞所含RNA量，故白細胞熒光強度遠大于網(wǎng)織紅細胞的熒光范圍而網(wǎng)織紅細胞的熒光強度又遠大于成熟紅細胞，儀器可對白細胞，網(wǎng)織紅細胞，成熟紅細胞進行準確的區(qū)分計數(shù)。儀器除了能客觀地計數(shù)網(wǎng)織紅細胞外，還能根椐其RNA含量計算網(wǎng)織紅細胞的成熟程度并對網(wǎng)織紅細胞分群，客觀地將網(wǎng)織紅細胞分成高熒光強度網(wǎng)織紅(HFR)、中熒光強度網(wǎng)織紅(MFR)、低熒光強度網(wǎng)織紅(LFR)等組份，同時還能提供網(wǎng)織紅細胞中血紅蛋白含量(Ret-He)等參數(shù)。與手工顯微鏡法網(wǎng)織紅細胞測定相比，儀器法具有分析速度快，分析精度高，報告參數(shù)多等優(yōu)點[6，7]，目前得到了廣泛的應(yīng)用。

一般情況下從儀器散點圖可以看出，網(wǎng)織紅細胞與成熟紅細胞由于熒光強度不同，散點圖可以明顯區(qū)分，無異常干擾。但在11例受干擾標本的散點圖中可以看到X軸側(cè)向熒光(FSC)紅細胞區(qū)與血小板區(qū)可以區(qū)分，但Y軸前向散射光(SFL)散點與正常圖形相比，末端出現(xiàn)許多白色散點與網(wǎng)織紅細胞散點混淆，網(wǎng)織紅細胞散點圖末端為高熒光強度網(wǎng)織紅細胞，出現(xiàn)這些異常散點導(dǎo)致網(wǎng)織紅細胞計數(shù)結(jié)果偏高且對網(wǎng)織紅細胞分群產(chǎn)生影響，導(dǎo)致高熒光強度網(wǎng)織紅細胞及網(wǎng)織紅細胞總數(shù)結(jié)果異常偏高。這些異常散點在白細胞數(shù)量正常標本及高白細胞標本稀釋后測定散點圖中未見出現(xiàn)，故異常散點的出現(xiàn)應(yīng)為標本中高白細胞干擾所致。

從本研究結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn)，部分高白細胞血樣儀器法網(wǎng)織紅細胞測試結(jié)果偏高。由于此類標本均為血液病患者標本，而網(wǎng)織紅細胞計數(shù)對血液系統(tǒng)疾病患者的診斷及治療均具有重要意義，保證結(jié)果的準確性尤為重要。目前對網(wǎng)織紅細胞結(jié)果復(fù)核一般是當數(shù)量大于預(yù)定程度或散點圖異常時進行鏡檢[8-10]，本研究中11例標本網(wǎng)織紅細胞計數(shù)結(jié)果均達到鏡檢標準需人工鏡檢，但人工鏡檢耗時較長，分析精度低。因此在臨床工作中對白細胞高值標本可使用稀釋液對標本進行稀釋，在白細胞含量<100×109/L時再進行儀器法網(wǎng)織紅細胞測試也可以保證結(jié)果的準確性且較手工法測試方便快捷，值得推廣。

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關(guān)鍵詞：白細胞；血液分析儀；網(wǎng)織紅細胞；未成熟網(wǎng)織紅細胞組份

The interference of high leukocyte samples on the reticulocyte count with hematology analyzerLIJie1，XINGHui2.(1.DepartmentofClinicalLaboratory，ThePeople'sHospitalofZhongxiang,Zhongxiang431902,China;2.DepartmentofClinicallaboratory，theUnionHospital,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the interference of high leukocyte samples on the reticulocyte count (%) and immature reticulocyte fraction (IRF%) count with hematology analyzer.Methods30 cases of high leukocyte samples (>300×109/L) were analyzed with hematology analyzer of reticulocyte count,and then to be reanalyzed after these samples were diluted with dilution to different concentrations,and reticulocyte count of different concentrations samples were analyzed by manual methods at the same time.ResultsReticulocyte count (%) and immature reticulocyte count (IRF%) of 11 cases in the 30 cases specimens with hematology analyzer were high than manual method results,when these samples were diluted to different concentrations(100×109/L or lower),the results of the hematology analyzer decreased significantly,and the results were closed to the results of manual method.ConclusionThe reticulocyte count with hematology analyzer can be interfered by white blood cells in high leukocyte samples,and the interference can be get corrected by the dilution of the samples.

Key words:Leukocyte；Blood analyzer；Reticulocyte；Immature reticulocyte fraction

(收稿日期：2014-06-11)

文獻標識碼：A

中圖分類號：R446.11+3

文章編號：1007-4287(2015)07-1114-03

*通訊作者