鐘妍

（廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530021）

高效液相色譜法測定益母顆粒中鹽酸水蘇堿含量

鐘妍

（廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530021）

目的 建立測定益母顆粒中鹽酸水蘇堿含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱采用強陽離子交換（SCX100A）柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流動相為 15 mmol／L磷酸二氫鉀（含0．04%三乙胺，0．15%磷酸），檢測波長為192 nm。結(jié)果 鹽酸水蘇堿進樣量在0．258～5．160 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0．999 8，n=6)，平均加樣回收率為97．45%，RSD=0．81% （n=6)。結(jié)論 該法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強、重復(fù)性良好，可用于益母顆粒的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；益母顆粒；鹽酸水蘇堿

益母顆粒由益母草、當(dāng)歸、川芎、木香4味中藥材加工提取而 制成，具有活血調(diào)經(jīng)、行氣止痛功效，臨床用于氣滯血瘀、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀血腹痛等癥。方中益母草為君藥，活血化瘀效佳，因此對益母草藥味進行有效的質(zhì)量控制必不可少。其藥品標(biāo)準(zhǔn)目前收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第九冊）》中，原標(biāo)準(zhǔn)中未建立任何含量測定方法對其進行定量控制。益母草的質(zhì)量控制手段多采用薄層色譜掃描法[1]和高效液相色譜法測定鹽酸水蘇堿的含量，其中用高效液相色譜法測定含量分別采用了氨基柱[2]、C18柱[3]和離子交換色譜柱[4-6]作為色譜柱，另外還有采用蒸發(fā)光檢測器進行分析[7-8]。本試驗中采用高效液相色譜法對處方中益母草主要成分的鹽酸水蘇堿進行定量分析，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

美國 Waters 2695-2487型高效液相色譜儀；Milli-Q型純水發(fā)生器；Mikro 22R型高速冷凍離心機；德國 Mettler Toledo AB265-S型電子分析天平。鹽酸水蘇堿對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110712-200508，供含量測定用）；益母顆粒（三金集團桂林三金生物藥業(yè)有限責(zé)任公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗[9]

色譜柱：Luna SCX 100A柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：15 mmol／L磷酸二氫鉀(含0．04%三乙胺和0．15%磷酸)；檢測波長：192 nm；流速：1．0 mL／min；柱溫：35℃。該色譜條件下，鹽酸水蘇堿保留時間約為13 min，峰形良好，理論板數(shù)達(dá) 10 000以上，可滿足定量分析要求。色譜圖見圖1。

1．鹽酸水蘇堿A．對照品溶液 B．供試品溶液 C．陰性對照品溶液圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

取五氧化二磷減壓干燥12 h的鹽酸水蘇堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每 1 mL含0．10 mg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項下的本品，研細(xì)，取約3．5 g，置具塞三角瓶中，精密稱定，精密加入 50%乙醇 50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，加在中性氧化鋁柱(100～200目，5 g，干法裝柱，柱內(nèi)徑1．5 cm)上，用乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣用流動相溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量比例稱取缺益母草的各味藥材，按益母顆粒制備工藝制得陰性樣品，再按供試品溶液制備方法進行提取，即得陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗：取缺益母草陰性對照品溶液，按擬訂的色譜條件進樣測定。結(jié)果色譜圖中，在鹽酸水蘇堿的位置無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性樣品對測定無干擾。見圖1。

線性關(guān)系考察：精密稱取鹽酸水蘇堿對照品 10．32 mg，置20 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取貯備液0．5，1．0，2．0，3．0，5．0，10．0 mL，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液。分別精密吸取以上對照品溶液各 10 μL，注入液相色譜儀進行測定。以對照品進樣量為橫坐標(biāo)（X）、被測組分峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=2．366 9×105X-1．059 5×104，r=0．999 8(n=6)。結(jié)果表明,鹽酸水蘇堿進樣量在 0．258～5．160 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密量取同一份對照品溶液10 μL，按擬訂的色譜條件連續(xù)進樣5次。結(jié)果的 RSD=0．67%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批樣品，共6份，按供試品溶液制備方法操作，在擬訂色譜條件下進樣測定，分別計算含量。結(jié)果鹽酸水蘇堿平均含量為每袋 8．30 mg，RSD=1．78%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一份供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h時進樣測定。結(jié)果的 RSD=0．96%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗：稱取已知含量的樣品（鹽酸水蘇堿含量為0．59 mg／g）1．75 g，置具塞三角瓶中，精密稱定，共6份，分別按樣品鹽酸水蘇堿含量的50%，100%，150%精密加入對照品溶液，按供試品溶液制備方法提取、測定，并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸水蘇堿加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2．4 樣品含量測定[10]

取不同批號的樣品，按擬訂方法測定，計算鹽酸水蘇堿的含量。結(jié)果批號為090401，090402，090403的樣品中鹽酸水蘇堿含量分別為每袋9．20，9．45，9．38 mg。

3 討論

色譜柱的選擇：曾使用 PC HILIC色譜柱、C18柱和氨基柱進行試驗。結(jié)果PC HILIC親水性色譜柱和C18柱無法良好地分離被測成分與雜質(zhì)，氨基柱測得色譜峰峰形不佳。故選擇 Luna SCX 100A柱。

流動相的選擇：色譜柱為離子柱，流動相的離子濃度對測定影響較大，因此使用磷酸二氫鉀緩沖液，平衡離子交換。分別在流動相pH為3．3，2．8，2．4下測定鹽酸水蘇堿，結(jié)果發(fā)現(xiàn)pH越大，保留時間越提前，分離度越小，甚至pH為3．3時，被測成分峰與雜質(zhì)峰合并。因此，通過添加一定比例的磷酸和三乙胺調(diào)節(jié)流動相pH為2．2。

提取除雜方式的選擇：在考察提取方式過程中，曾使用732型陽離子交換樹脂柱、大孔樹脂D101柱、氧化鋁柱進行除雜質(zhì)。結(jié)果以732型陽離子交換樹脂柱、氧化鋁柱分離除雜效果較好。但732型陽離子交換樹脂柱原理與液相所采用色譜柱分離原理相同，且操作步驟煩瑣，綜合考慮最終選擇采用氧化鋁柱進行除雜。

[1]梁惠珍，李先榮，王瑞民．薄層掃描法測定復(fù)方腦清膠囊中鹽酸水蘇堿的含量[J]．中國藥事，2009，23(6)：575-576．

[2]李政海，蘇作林，廖展葦，等．HPLC法測定益母草顆粒（無蔗糖型）中鹽酸水蘇堿的含量[J]．中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，26(8)：70-72．

[3]楊曉云， 雪濤，張云麗．益母丸中鹽酸水蘇堿成分分析方法 [J]．中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25（1）：69-70．

[4]程立方，崔秀君．產(chǎn)舒康顆粒中鹽酸水蘇堿的高效液相色譜法定量[J]．中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2007，24（6）：496-498．

[5]洪 梅，施 法．HPLC法測定加味八珍益母顆粒中鹽酸水蘇堿的含量[J]．中國藥事，2009，23（11）：1 113-1 114．

[6]姜衛(wèi)東，賀亞玲，何世芬，等．HPLC測定益母草注射液中鹽酸水蘇堿含量[J]．中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007，8（5）：40-42．

[7]馮 旭，杜成智，梁臣艷，等．HPLC-ELSD測定益母顆粒中鹽酸水蘇堿的含量[J]．中成藥，2008，30（5）：附2-附3．

[8]林冬杰，張會球．HPLC-ELSD法測定益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的含量[J]．亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（2）：45-46．

[9]高曉波，張小勇，黃春清．HPLC測定益母草中鹽酸水蘇堿含量的色譜條件研究[J]．中醫(yī)藥信息，2009，26（4）：25-27．

[10]童 紅，何 斌．高效液相色譜法測定抗宮炎軟膠囊中鹽酸水蘇堿含量[J]．中國藥業(yè)，2007，16（14）：40-41．

Determination of Stachydrine Hydrochloride Content in Yimu Granules by HPLC

Zhong Yan
(Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute for Food and Drug Control,Nanning,Guangxi,China 530021)

Objective To establish a HPLC method for the determination of the stachydrine hydrochloride content in Yimu Granules．M ethods The strong cation exchange(SCX)column(250 mm×4．6 mm,5 μm)was used as the chromatographic column．The mobile phase was 15 mmol／L potassium dihydrogen phosphate (containing 0．04% triethylamine and 0．15% phosphoric acid)．The detection wavelength was 192 nm．Results The sample size of stachydrine hydrochloride within 0．258-5．160 μg showed good linearity(r= 0．999 8,n=6);the average recover rate was 97．45%,RSD=0．81%(n=6)．Conclusion This method is simple,accurate,strongly specific and better repeatable,and can be used for the quality control of Yimu Granules．

HPLC;Yimu Granules;stachydrine hydrochloride

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)05-0032-03

2014-07-12)