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        有機(jī)磷農(nóng)藥高效降解微生物的篩選與鑒定

        2015-02-23 08:36:30張六六夏森玉丁亞欣
        安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年36期

        張六六,夏森玉,丁亞欣,吳 燕,劉 佳

        (1. 江蘇省微生物研究所有限責(zé)任公司,江蘇無錫 214000;2. 江蘇納克生物工程有限公司,江蘇盱眙 211700;3. 無錫市濱湖區(qū)農(nóng)林局,江蘇無錫 214000)

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        有機(jī)磷農(nóng)藥高效降解微生物的篩選與鑒定

        張六六1,2,夏森玉2,丁亞欣3,吳 燕1,劉 佳1

        (1. 江蘇省微生物研究所有限責(zé)任公司,江蘇無錫 214000;2. 江蘇納克生物工程有限公司,江蘇盱眙 211700;3. 無錫市濱湖區(qū)農(nóng)林局,江蘇無錫 214000)

        摘要[目的]篩選對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有高效降解能力的微生物菌種。[方法]在有機(jī)磷農(nóng)藥富集地區(qū)采樣,利用選擇培養(yǎng)的方式篩選對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有高效降解能力的微生物菌種,對(duì)篩選到的微生物進(jìn)行鑒定,并研究其降解特性。[結(jié)果]在長(zhǎng)期受有機(jī)磷農(nóng)藥污染的環(huán)境下采集56份土壤及污水樣本,從中篩選到可高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥的菌株JWDP-16,其對(duì)氧化樂果的最高降解率達(dá)59.80%,該菌對(duì)其他有機(jī)磷農(nóng)藥具有廣譜降解能力,同時(shí)表現(xiàn)出良好的遺傳穩(wěn)定性,通過分類鑒定確定該菌為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。[結(jié)論]菌株JWDP-16對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有高效降解能力,可進(jìn)一步研究與開發(fā)。

        關(guān)鍵詞有機(jī)磷農(nóng)藥;微生物降解;分離篩選;菌種鑒定

        作為一類高效、廣譜的農(nóng)藥產(chǎn)品,自20世紀(jì)40年代發(fā)明第1個(gè)產(chǎn)品“1605對(duì)硫磷”以來,有機(jī)磷農(nóng)藥(OPs)被廣泛應(yīng)用在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上,大幅提高了農(nóng)作物的產(chǎn)量[1],目前我國(guó)的OPs使用量已占所有農(nóng)藥使用量的70%~80%[2]。隨著OPs在農(nóng)業(yè)上的大規(guī)模使用,其引起的一系列問題逐漸凸顯,所帶來的危害越來越被人們重視:造成病蟲害產(chǎn)生抗藥性,導(dǎo)致農(nóng)藥使用量逐漸加大,使得農(nóng)業(yè)生產(chǎn)力大幅下降,形成惡性循環(huán);造成嚴(yán)重的農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留,直接威脅人類健康;嚴(yán)重污染土壤、水體及大氣環(huán)境,降低了周圍生物種群的多樣性,破壞生態(tài)系統(tǒng)的平衡[3-4]。同時(shí)由于OPs的自然降解周期長(zhǎng),使得研究人為加速其降解速度是目前急需解決的關(guān)鍵技術(shù)[5]。由于大部分有機(jī)磷農(nóng)藥均為高毒類農(nóng)藥,長(zhǎng)期過量使用對(duì)人類健康和生活環(huán)境造成嚴(yán)重危害,因此,包括有機(jī)磷農(nóng)藥在內(nèi)的化學(xué)農(nóng)藥降解問題已成為目前研究的熱點(diǎn)之一[14]。

        由于微生物具有繁殖速度快、代謝能力強(qiáng)、不產(chǎn)生二次污染等特點(diǎn),因此,利用微生物進(jìn)行農(nóng)藥的降解是目前解決上述問題的重要手段[6]。農(nóng)藥的微生物降解是指利用微生物的代謝過程使農(nóng)藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,使其由有害的大分子化合物降解為無害的小分子化合物直至CO2、H2O,實(shí)現(xiàn)無害化降解的過程[7]。研究表明,微生物降解農(nóng)藥具有降解速度快、降解效果徹底、環(huán)境影響小、處理成本低等特點(diǎn)[8]。筆者在有機(jī)磷農(nóng)藥富集地區(qū)采樣,利用選擇培養(yǎng)的方式篩選了對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有高效降解能力的微生物菌種,并對(duì)篩選到的微生物進(jìn)行了鑒定,以期為有機(jī)磷農(nóng)藥的降解研究及微生物菌劑的開發(fā)提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 培養(yǎng)基。營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(NB):蛋白胨10 g/L,牛肉膏3 g/L,氯化鈉5 g/L,pH 7.2。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(NA):蛋白胨10 g/L,牛肉膏3 g/L,氯化鈉5 g/L,瓊脂15~20 g/L,pH 7.2[9]。液體選擇培養(yǎng)基:普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基經(jīng)過滅菌后,冷卻至50 ℃左右加入1 g/L有機(jī)磷農(nóng)藥。固體選擇培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基經(jīng)過滅菌后,冷卻至50 ℃左右加入1 g/L有機(jī)磷農(nóng)藥。

        1.1.2 試劑。TaqDNA聚合酶和PfuDNA聚合酶均為Fermentas產(chǎn)品;細(xì)菌基因組DNA快速抽提試劑盒及PCR產(chǎn)物純化試劑盒均購(gòu)自生工生物工程(上海)有限公司。其他試劑均購(gòu)自國(guó)藥試劑公司。

        1.1.3藥劑。氧化樂果、甲胺磷、甲拌磷由江蘇揚(yáng)農(nóng)化工集團(tuán)有限公司生產(chǎn);水胺硫磷由湖北仙隆化工股份有限公司生產(chǎn);二嗪磷由河南地衛(wèi)士生物科技有限公司生產(chǎn);甲基嘧啶磷由先正達(dá)公司生產(chǎn);毒死蜱由海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司生產(chǎn)。敵敵畏、敵百蟲、對(duì)硫磷由江蘇納克生物工程有限公司惠贈(zèng)。

        1.1.4主要儀器。Biophotometer plus分光光度計(jì)(德國(guó)Eppendorf公司)、C1000核酸電泳系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad公司)、ChemiDoc MP全能型凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad公司)、AL104型電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)、PHS-3CT實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)(上海今邁儀器有限公司)。

        1.2方法

        1.2.1 樣本的采集。采樣地點(diǎn):① 江蘇蘇北地區(qū)某有機(jī)磷農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)污水處理區(qū)及工廠、倉(cāng)庫(kù)周邊土壤;② 無錫附近地區(qū)經(jīng)常噴灑有機(jī)磷農(nóng)藥或最近噴灑過有機(jī)磷農(nóng)藥的大田、果園、蔬菜大棚等。采樣方法:① 對(duì)于土壤樣品的采集,用預(yù)先滅菌的小鏟子取表土及地表下5~10 cm處的土樣1 000 g左右,盛于預(yù)先滅菌的牛皮紙袋中,扎緊[10];② 對(duì)于廢渣等樣品,用預(yù)先滅菌鑷子夾入滅菌的牛皮紙袋中,扎緊;③ 對(duì)于污染水樣,用滅菌帶蓋小玻璃瓶盛約100 ml水樣。所有采集得到的樣品均標(biāo)明時(shí)間、地點(diǎn)和環(huán)境等情況。

        1.2.2 樣本中菌種的分離與純化。稱取1 g(或1 ml)采集獲得的樣本加入到10 ml PBS緩沖液中,振蕩分散2 h。取1 ml振蕩后的溶液加入到100 ml液體選擇培養(yǎng)基中,37 ℃、200 r/min條件下培養(yǎng)24 h。將培養(yǎng)后的菌液涂布于固體選擇培養(yǎng)基上,37 ℃培養(yǎng)并定期觀察,挑取在選擇培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)且菌落形態(tài)不同的菌株進(jìn)行劃線分離直至單菌落,保藏。

        1.2.3 高活性、高有機(jī)磷農(nóng)藥降解能力菌株的篩選。

        1.2.3.1初篩。以菌落在相同條件下菌落生長(zhǎng)水解圈的大小和生長(zhǎng)繁殖能力作為初篩依據(jù)。首先將分離到菌株點(diǎn)樣接種在固體選擇培養(yǎng)基中央,37 ℃培養(yǎng)48 h,觀察其生長(zhǎng)情況并測(cè)量水解圈的大小,3次重復(fù)。同時(shí)用接種環(huán)挑取菌株接種于液體選擇培養(yǎng)基中,每組3次重復(fù),37 ℃、200 r/min條件下培養(yǎng)48 h,測(cè)定其OD600值。

        1.2.3.2復(fù)篩。采用分光光度計(jì)測(cè)定菌株對(duì)氧化樂果的降解能力[11]。磷含量(x)與吸光度(y)之間的線性關(guān)系良好,標(biāo)準(zhǔn)線性方程(圖1)為:y=0.558 2x+0.016 5,R2=0.999 2。

        圖1 磷含量對(duì)吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線

        將初篩獲得的菌株接種至液體選擇培養(yǎng)基中,以不接種菌的空液體選擇培養(yǎng)基作為對(duì)照,試驗(yàn)進(jìn)行5次重復(fù),37 ℃、200 r/min條件下培養(yǎng)72 h。采用分光光度法分別測(cè)定培養(yǎng)前后培養(yǎng)液中有機(jī)磷含量,按照公式:有機(jī)磷農(nóng)藥降解率=(M2-M1)/M1×100%(其中,M1為培養(yǎng)后的有機(jī)磷含量,M2為培養(yǎng)前的有機(jī)磷含量),計(jì)算有機(jī)磷降解率,考察各菌株對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的降解能力。

        1.2.4菌種有機(jī)磷農(nóng)藥降解特性研究。

        1.2.4.1有機(jī)磷農(nóng)藥廣譜降解能力的研究。選擇甲胺磷、胺硫磷、甲拌磷、敵敵畏、敵百蟲、二嗪磷、甲基嘧啶磷、對(duì)硫磷、氯吡硫磷(毒死蜱)9種常見的有機(jī)磷農(nóng)藥,分別與營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基配制成1 g/L的液體選擇培養(yǎng)基,采用“1.2.3”復(fù)篩方法研究復(fù)篩獲得的菌株對(duì)9種有機(jī)磷農(nóng)藥的廣譜降解能力。

        1.2.4.2菌種降解能力的遺傳穩(wěn)定性研究。對(duì)復(fù)篩獲得的菌種進(jìn)行傳代培養(yǎng),采用“1.2.3”復(fù)篩方法分別測(cè)定初始菌株(F0)、第5代菌株(F5)和第10代菌株(F10)對(duì)氧化樂果的降解能力,確定菌種對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥降解能力的遺傳穩(wěn)定性。

        1.2.5 有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌的分類鑒定。

        1.2.5.1菌落形態(tài)及顯微結(jié)構(gòu)觀察。將篩選獲得的有機(jī)磷農(nóng)藥高效降解菌涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,觀察菌落形態(tài)。采用結(jié)晶紫對(duì)其細(xì)胞進(jìn)行染色,觀察菌種的顯微結(jié)構(gòu)。

        1.2.5.2生理生化鑒定。根據(jù)菌落形態(tài)及顯微結(jié)構(gòu)鑒定的結(jié)果,按《常用細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[12]和《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[13]上的鑒定指標(biāo)對(duì)降解菌進(jìn)行生理生化鑒定。

        1.2.5.3分子鑒定。采用16S rDNA的方法對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥高效降解菌進(jìn)行分子鑒定,設(shè)計(jì)的引物為5′-AGAGTTTATCTGCCG-3′和5′-GGTTACCTTGTTACGATT-3′。采用細(xì)菌基因組DNA快速抽提試劑盒提取降解菌基因組,并進(jìn)行PCR試驗(yàn),PCR反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性1 min,52 ℃退火1 min,72 ℃延伸2 min,共30個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min,4 ℃保存。PCR產(chǎn)物采用PCR產(chǎn)物純化試劑盒進(jìn)行純化,純化產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳(1.4%瓊脂糖)驗(yàn)證,并送生工生物工程(上海)有限公司測(cè)序,將測(cè)序結(jié)果與序列庫(kù)進(jìn)行比對(duì)并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

        2 結(jié)果與分析

        2.1初篩結(jié)果通過對(duì)樣本中菌種的分離和純化,共獲得25株可在含有1 g/L氧化樂果的選擇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌株,將其依次編號(hào)為JWDP-01~JWDP-25。再經(jīng)過生長(zhǎng)繁殖能力及水解圈大小的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)JWDP-05、JWDP-09、JWDP-10、JWDP-16、JWDP-24 5株菌對(duì)氧化樂果的耐藥性較強(qiáng),在含藥的選擇培養(yǎng)基上可產(chǎn)生較大的水解圈,同時(shí)OD600值也明顯大于其他菌株(表1),表明其生長(zhǎng)繁殖能力較高。因此,選用該5株菌作為復(fù)篩的出發(fā)菌株,測(cè)定其對(duì)氧化樂果的降解能力。

        2.2復(fù)篩結(jié)果由圖2可知,與對(duì)照組相比,初篩分離到的JWDP-05、JWDP-09、JWDP-10、JWDP-16、JWDP-24 5株菌對(duì)氧化樂果的降解能力有大幅提高,表明其對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥均有一定的降解作用,其中以JWDP-09和JWDP-16最突出,因此,選用JWDP-09和JWDP-16作為進(jìn)一步研究的菌種,對(duì)菌株的有機(jī)磷農(nóng)藥降解特性進(jìn)行研究。

        2.3菌種有機(jī)磷農(nóng)藥降解特性的研究結(jié)果

        2.3.1廣譜降解能力。由表2可知,JWDP-16菌株對(duì)9種不同的有機(jī)磷農(nóng)藥均有良好的降解作用,降解能力表現(xiàn)為更好的廣譜性,而JWDP-09菌株對(duì)敵敵畏、甲基嘧啶磷和對(duì)硫磷幾乎無降解作用,對(duì)其他幾種有機(jī)磷農(nóng)藥的降解能力也普遍弱于JWDP-16菌株。

        表1 初篩結(jié)果

        圖2 復(fù)篩結(jié)果

        有機(jī)磷農(nóng)藥種類校正農(nóng)藥降解率*∥%JWDP-09JWDP-16甲胺磷40.0233.95水胺硫磷31.1340.21甲拌磷12.8836.46敵敵畏3.4521.63敵百蟲10.5618.77二嗪磷27.9861.09甲基嘧啶磷0.2627.45對(duì)硫磷1.4538.04氯吡硫磷(毒死蜱)50.6746.67

        注:*校正農(nóng)藥降解率=(處理組農(nóng)藥降解率-對(duì)照組農(nóng)藥降解率)/(1-對(duì)照組農(nóng)藥降解率)×100%。

        2.3.2降解能力的遺傳穩(wěn)定性。由表3可知,JWDP-09和JWDP-16 2株菌分別經(jīng)過5代次和10代次的傳代培養(yǎng)后,對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的降解能力均表現(xiàn)出良好的遺傳穩(wěn)定性。綜合該2株菌對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的廣譜降解能力與遺傳穩(wěn)定性,確定JWDP-16菌株為進(jìn)一步研究發(fā)酵及生產(chǎn)的出發(fā)菌株,并對(duì)其進(jìn)行分類鑒定。

        表3  有機(jī)磷農(nóng)藥降解能力的遺傳穩(wěn)定性

        2.4降解菌JWDP-16的分類鑒定結(jié)果

        2.4.1 菌落形態(tài)及顯微結(jié)構(gòu)的觀察。結(jié)果表明,在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h后,JWDP-16菌落直徑達(dá)到0.5~0.8 cm,乳白色,不透明,有臍狀突出,迎光觀察呈白蠟狀,邊緣不整齊,有褶皺。顯微結(jié)構(gòu)觀察顯示:經(jīng)過結(jié)晶紫染色后,JWDP-16為長(zhǎng)桿狀,長(zhǎng)2.5~3.5 μm,寬0.8~0.9 μm,以成對(duì)或鏈狀排列,有明顯的橢圓形芽孢,芽孢中生或次端生,無莢膜。根據(jù)觀察結(jié)果初步確定該菌種為芽孢桿菌類菌株。

        2.4.2 生理生化鑒定結(jié)果。根據(jù)生理生化鑒定結(jié)果(表4),對(duì)比細(xì)菌鑒定手冊(cè)上的指標(biāo),初步判斷JWDP-16為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。

        表4 JWDP-16菌株生理生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果

        注:“+”表示陽(yáng)性反應(yīng);“-”表示陰性反應(yīng)。

        2.4.3 分子鑒定結(jié)果。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳,獲得1 400~1 600 bp長(zhǎng)度的基因序列(圖3)。將PCR產(chǎn)物純化后進(jìn)行測(cè)序,結(jié)果表明該基因序列的長(zhǎng)度為1 533 bp。將序列在NCBI上進(jìn)行比對(duì),證實(shí)JWDP-16菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis),并構(gòu)建了相應(yīng)的發(fā)育樹(圖4)。

        注:M. DNA Marker; 1、2. JWDP-16菌株。圖3  JWDP-16菌株的16S rDNA電泳圖譜

        圖4  JWDP-16菌株系統(tǒng)發(fā)育樹

        3 結(jié)論與討論

        該研究表明,在農(nóng)藥廠、果園、蔬菜地等經(jīng)常接觸有機(jī)磷農(nóng)藥的地區(qū)采集到56份樣本,從中篩選到25株農(nóng)藥降解菌,其中JWDP-16菌株對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥氧化樂果的降解能力最強(qiáng),培養(yǎng)72 h的最高降解率達(dá)到59.80%。通過對(duì)JWDP-16菌株降解特性的研究表明,該菌對(duì)甲胺磷、水胺硫磷、甲拌磷等9種有機(jī)磷農(nóng)藥具有良好的廣譜降解能力。同時(shí)傳代試驗(yàn)表明,第5代、第10代與初始菌株間的降解能力無明顯差異,表現(xiàn)出良好的遺傳穩(wěn)定性。經(jīng)過多步鑒定,確定JWDP-16菌株為枯草芽孢桿菌??莶菅挎邨U菌具有生長(zhǎng)繁殖能力強(qiáng)、易于工業(yè)化生產(chǎn)、抗逆性強(qiáng)、易于在土壤中生存、對(duì)人畜及環(huán)境無害等特點(diǎn),一直以來是微生物領(lǐng)域研究和應(yīng)用的重點(diǎn)。

        由于微生物在生長(zhǎng)繁殖能力方面的優(yōu)勢(shì),使得微生物降解農(nóng)藥技術(shù)成為解決農(nóng)藥降解問題的關(guān)鍵手段[15]。段海明[16]研究表明從有機(jī)磷農(nóng)藥及土壤樣本中分離到的3株蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥甲基對(duì)硫磷、毒死蜱和三唑磷均具有良好的降解效果;楊慧[17]從有機(jī)磷農(nóng)藥生產(chǎn)車間土壤中分離到2株對(duì)氧化樂果具有降解能力的菌株,一株為假單胞菌屬(Pseudomonassp.),另一株為氣球菌屬(Aerococcussp.)??梢姡谟袡C(jī)磷農(nóng)藥污染嚴(yán)重的區(qū)域仍有大量微生物存在,這些微生物主要以分解代謝有機(jī)磷農(nóng)藥獲得相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量供其生長(zhǎng)繁殖,從而達(dá)到降解農(nóng)藥的目的。目前,農(nóng)藥降解菌主要有2種應(yīng)用方式:一是采用固定化技術(shù),該技術(shù)可以維持較高的生物活性和酶活性[18]。趙仁邦等[19]研究了草酸青霉ZHJ6固定化后對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥甲胺磷的降解作用,結(jié)果表明降解率從原來的60%提高到70%。二是制成性質(zhì)穩(wěn)定的微生物菌劑,該方法主要是將微生物菌體與惰性載體進(jìn)行混合造粒。王連祥等[20]利用枯草芽孢桿菌制成的復(fù)合微生物菌劑研究對(duì)農(nóng)藥的降解作用,結(jié)果表明該微生物菌劑對(duì)土壤使用3 d后,農(nóng)藥降解率最高達(dá)90%以上。同時(shí)將可降解農(nóng)藥的微生物菌種與能解磷解鉀、固氮等作用的土壤功能性菌種進(jìn)行結(jié)合,制成具有多種功能的復(fù)合微生物菌劑,也是農(nóng)用微生物菌劑開發(fā)的一個(gè)重要研究方向。該研究通過篩選對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥具有高效降解能力的微生物菌種,獲得1株可高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥的菌株JWDP-16,并確定其為枯草芽孢桿菌,為微生物菌劑開發(fā)提供了材料。

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        Screening and Identification of Microorganisms with High Performance of Organophosphorus Pesticides Degrading

        ZHANG Liu-liu1,2, XIA Sen-yu2, DING Ya-xin3et al (1. Jiangsu Institute of Microbiology Co., Ltd, Wuxi, Jiangsu 214000; 2. Jiangsu Nake Biological Engineering Co., Ltd, Xuyi, Jiangsu 211700; 3. Binghu District Bureau of Agriculture and Forestry of Wuxi City, Wuxi, Jiangsu 214000)

        Abstract[Objective] To screen out microorganisms with high performance of organophosphorus pesticides degrading. [Method] We collected samples from rich area of organophosphorus pesticides, isolated and identified microorganisms with high performance of organophosphorus pesticides degrading, and studied the strains’ degradation characteristics. [Result] After screening of strains from 56 samples which were collected from soil and water seriously polluted by organophosphorus pesticides, a strain JWDP-16 with high degrading ability was obtained. The stain JWDP-16 had the highest degradation rate of 59.80% to omethoate. Degradation characteristics showed that the strain JWDP-16 had broad spectrum degradation ability for other organophosphorus pesticides, and also had genetic stability. The strain JWDP-16 was identified asBacillussubtilis. [Conclusion] The strain JWDP-16 has high degradation ability of organophosphorus pesticides and is worth further studying.

        Key wordsOrganophosphorus pesticides; Microbial degradation; Screening; Strain identification

        收稿日期2015-11-25

        作者簡(jiǎn)介張六六(1973-),男,江蘇泗洪人,高級(jí)工程師,從事農(nóng)業(yè)微生物研究。

        基金項(xiàng)目江蘇省無錫市農(nóng)業(yè)科技支撐-生物農(nóng)業(yè)技術(shù)專項(xiàng)(309058-916018)。

        中圖分類號(hào)S 482

        文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

        文章編號(hào)0517-6611(2015)36-212-04

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