邵云龍，張萬山

(1.黑龍江省龍江縣廣厚鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)綜合服務(wù)站 161122；2.黑龍江省杜蒙縣大山種羊場(chǎng) 166269)

核酸探針在畜禽疾病診斷中的應(yīng)用

邵云龍1，張萬山2

(1.黑龍江省龍江縣廣厚鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)綜合服務(wù)站 161122；2.黑龍江省杜蒙縣大山種羊場(chǎng) 166269)

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)水平的上升，生物科學(xué)技術(shù)也不斷發(fā)展進(jìn)步，在各個(gè)領(lǐng)域當(dāng)中的應(yīng)用越來越廣泛。在畜禽的疾病診斷過程中，使用生物技術(shù)制備的核酸探針也越來越多，核酸探針具有非常多的優(yōu)勢(shì)，幫助畜禽疾病的診斷工作更加精確、可靠。本文主要分析核酸探針的診斷特點(diǎn)及其實(shí)際應(yīng)用。

核酸探針；畜禽；疾病診斷；實(shí)際應(yīng)用

當(dāng)前，生物醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展進(jìn)步，在畜禽疾病診斷領(lǐng)域當(dāng)中得到非常廣泛的應(yīng)用，使畜禽疾病的診斷方式發(fā)生巨大轉(zhuǎn)變。使用生物核酸探針技術(shù)對(duì)畜禽疾病進(jìn)行診斷，具有特異性強(qiáng)、敏感度高以及簡(jiǎn)單快捷的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)還能夠避免由于培養(yǎng)困難或者是混合污染的現(xiàn)象，能夠快速直接的對(duì)畜禽的體液、分泌物等進(jìn)行檢測(cè)，不僅為相關(guān)工作人員的工作提供方便，同時(shí)對(duì)于畜禽疾病早期診斷與控制具有非常重要的意義，幫助獸醫(yī)選擇最佳的方式進(jìn)行治療，杜絕大面積傳染病的發(fā)生。

1 核酸探針在畜禽疾病診斷中的特點(diǎn)

1.1 特異性強(qiáng)

使用核酸探針進(jìn)行檢測(cè)是基于病原微生物的核酸堿基配對(duì)原理，通過核酸序列與標(biāo)本中的另外的核酸發(fā)生互補(bǔ)以及結(jié)合，所以不會(huì)發(fā)生雜交的現(xiàn)象，更不會(huì)出現(xiàn)假陽性或者是假陰性，所以其特異性非常強(qiáng)，不會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)和其他干擾現(xiàn)象。

1.2 靈敏性強(qiáng)

相較于傳統(tǒng)的放射免疫等方式，DNA或者是RNA探針具有更強(qiáng)的靈敏度，能夠檢測(cè)出10～12g的抗原含量，在很早以前，美國(guó)基因探針公司生產(chǎn)的軍團(tuán)菌探針就已經(jīng)能夠在0.4mg的肝臟組織中檢測(cè)出4000個(gè)以上的細(xì)菌。有學(xué)者使用通過生物素標(biāo)記的流產(chǎn)布氏桿菌全基因組的DNA探針能夠在質(zhì)量為1g的大鼠肝混合物當(dāng)中檢測(cè)出105個(gè)細(xì)菌，同時(shí)還能夠檢測(cè)出通過試驗(yàn)接種的小鼠質(zhì)量為1g的組織中存在的107個(gè)布氏桿菌。

1.3 檢測(cè)速度快

使用常規(guī)的方式需要經(jīng)過病原分離、培養(yǎng)等方式耗費(fèi)大量的時(shí)間才能夠得出檢測(cè)結(jié)果，但是使用核酸探針可以在45分鐘之內(nèi)就能夠得到結(jié)果。有學(xué)者使用探針進(jìn)行斑點(diǎn)免疫印跡雜交測(cè)試，在感染初期，家禽體內(nèi)開始血清學(xué)應(yīng)答前能夠檢出體內(nèi)的敗血霉形體，采樣之后最多4天就能夠得到試驗(yàn)結(jié)果，如果使用培養(yǎng)的方式則需要更長(zhǎng)的時(shí)間。

1.4 方法簡(jiǎn)單

核酸探針檢測(cè)能夠?qū)π笄莼铙w、死體甚至是體液和分泌物等進(jìn)行檢測(cè)，不需要進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)，更不需要使用其他設(shè)備輔助觀察，流程非常簡(jiǎn)單。

2 核酸探針在畜禽疾病診斷中的實(shí)際應(yīng)用

2.1 雞傳染性法氏囊病毒(IBDV)的檢測(cè)

早前有學(xué)者使用生物素對(duì)合成寡合苷酸探針進(jìn)行標(biāo)記，將雞法氏囊組織在硝酸纖維膜上進(jìn)行印記，然后與被生物素標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交，隨后對(duì)人工方式感染雞的機(jī)體進(jìn)行檢測(cè)，取得非常滿意的效果。之后又有學(xué)者使用26CI探針進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，對(duì)血清1型和2型的不同IBDV實(shí)施檢測(cè)，結(jié)果顯示探針沒有與病毒發(fā)生交叉反應(yīng)。且該探針檢測(cè)病毒與核酸的最小量可以達(dá)到1mg，同時(shí)能夠檢測(cè)出注射疫苗2～3天之后雞體內(nèi)法氏囊病毒以及組織當(dāng)中存在的IBDV。

2.2 雞馬立克氏病毒的檢測(cè)

我國(guó)生物研究者使用光敏的生物素對(duì)特定基因文庫(kù)中的L片斷進(jìn)行標(biāo)記，制備出雞馬立克氏病毒的光敏核酸探針，然后對(duì)培養(yǎng)物當(dāng)中的病毒實(shí)施檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)探針對(duì)病毒中的血清1型馬立克氏病毒中的DNA分子發(fā)生雜交，而2型和3型都不發(fā)生雜交反應(yīng)。然后使用血清1型和血清2型對(duì)雛雞進(jìn)行接種，在第14天及30天使用斑點(diǎn)雜交法實(shí)施病毒DNA的檢測(cè)，結(jié)果血清1型的結(jié)果呈現(xiàn)陽性，而血清2型的結(jié)果呈現(xiàn)陰性，證明制備的核酸探針能夠?qū)﹄u馬立克氏病毒的強(qiáng)毒株進(jìn)行診斷。

2.3 雞減蛋綜合癥病毒的檢測(cè)

研究在使用制備的光敏性生物素探針對(duì)雞減蛋綜合癥病毒感染的鴨胚尿囊液提取物實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，結(jié)果能夠證實(shí)該探針對(duì)于雞減蛋綜合癥病毒具有很強(qiáng)的特異性，同時(shí)能夠檢測(cè)到至少1pg的雞減蛋綜合癥病毒DNA；但是在正常的鴨胚尿囊液的提取物不會(huì)與無質(zhì)粒的受體菌DNA發(fā)生雜交反應(yīng)。

2.4 雞新城疫病毒的檢測(cè)

國(guó)外的相關(guān)研究人員使用人工合成的寡合核苷酸DVA制備的探針進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)環(huán)境及其他條件非常嚴(yán)格，然后試試狹縫印跡雜交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示該探針能夠識(shí)別出被檢出的15個(gè)NDV。該探針的序列來源于雞新城疫病毒基因組高度保守區(qū)域，具有非常強(qiáng)的特異性。