廖興隆，劉才英

（重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，重慶 400012）

療骨膠囊提取工藝優(yōu)選

廖興隆，劉才英

（重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，重慶 400012）

目的：優(yōu)選療骨膠囊的最佳提取工藝。方法：以浸膏得率、黃芪和秦艽薄層色譜以及烏頭堿限量檢測(cè)結(jié)果為考察指標(biāo)，采用L9 （34）正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝。結(jié)果：制川烏、制草烏的提取工藝為提取兩次，第1次加水10倍，煎煮2．5h，第2次加水8倍，煎煮2h。黃芪等藥材加水量10倍，每次煎煮1h，煎煮3次，薄層色譜斑點(diǎn)清晰，烏頭堿限量符合要求。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定可行，可用于療骨膠囊的大生產(chǎn)。

療骨膠囊；提取工藝；正交試驗(yàn)；TLC

4 漏 乳

楊某，女，28歲，2014年2月19日就診。1個(gè)月前生育第2胎后即乳汁自出，經(jīng)中西醫(yī)反復(fù)調(diào)治無效。曾于受孕后是否繼續(xù)妊娠糾結(jié)不已。分娩之初并無乳汁，行人工喂養(yǎng)，半月后才有乳汁分泌，始行混合喂養(yǎng)。時(shí)時(shí)乳汁自出，乳量卻不能滿足乳兒之需。體質(zhì)尚佳，面色紅赤，肌膚濕潤(rùn)，乳房作脹，時(shí)有噯氣。脈艱澀有力，舌質(zhì)紅苔薄干。診為漏乳，辨證氣機(jī)郁滯，乳行逆亂。以疏肝理氣，通經(jīng)行乳為治。遣化裁之柴胡疏肝散。藥用柴胡15g，枳殼12g，香附20g，青皮15g，黨參15g，白芍15g，當(dāng)歸15g，川芎15g，甘草10g。每日1劑，每劑之初需將藥物以適量水液浸泡30min，再煎煮致沸后15min，過濾取汁后，再將其藥加適量清水煎煮，如此煎煮3次，將3次所得藥汁混勻，分3次溫?zé)峥诜B服4劑。2月25日復(fù)診，服藥2劑之后，漏乳之癥即已大減，4劑服畢已無漏乳。仍感乳房作脹，時(shí)有噯氣。面紅潤(rùn)，舌淡紅苔白，脈平。藥用柴胡15g，枳殼12g，香附20g，黨參15g，白芍15g，當(dāng)歸15g，川芎15g，浮小麥20g，甘草10g。每日1劑，煎服法同前，再連服3劑。1個(gè)月后隨訪病愈，母子俱健。

5 體 會(huì)

通因通用即用通利的藥物治療具有實(shí)性通泄癥狀的病證［1］。多汗例以四逆散加味收功。是切合肝郁氣滯的病機(jī)，結(jié)合病變?cè)诟文懫⑽讣捌浣?jīng)絡(luò)、官竅、五體，即可［2］?；贸料闵⒛苁柽_(dá)肝氣，行下焦之氣血而通利水道［3］。經(jīng)行吐衄遣越鞠丸愈病和漏乳用柴胡疏肝散蘊(yùn)含行氣、解郁、活血、通絡(luò)等“通”意于中。各例用方均由其證治特點(diǎn)所確定，乃因“只有在辨證論治的基礎(chǔ)上，依據(jù)一定的法則，才能組成有效的方劑”［4］。

“通因通用”意義在通，然有生理之通、病理之通、治法之通和通固相因。對(duì)此了然于心，方可游刃無阻。人體是“行塞互護(hù)”、“泄攝共存”、“吐納相助”的有機(jī)整體，通中有固，固中有通，肝心脾肺腎各系莫不如此。氣機(jī)的運(yùn)行，血液的循環(huán)，津液的敷布，水谷的運(yùn)化表現(xiàn)為行與塞、泄與攝和吐與納的和諧，是生理之通的結(jié)果。泄攝有度則汗出汗止、便行便終、經(jīng)來經(jīng)停、乳泌乳收正常。病理之通總因生理之通失常，以致泄強(qiáng)攝弱，泄多攝少。汗出、滑精、吐衄、漏乳即是如此。治法之通不能簡(jiǎn)單理解為通下、利下，實(shí)為助力于生理之通的各種治法。多汗例的疏通陽(yáng)氣，布達(dá)水津；滑精例的疏肝行氣，兼以利濕；經(jīng)行吐衄例的行氣疏肝，助血?dú)w經(jīng)；漏乳例的疏肝理氣，通經(jīng)行乳均是以治法之通除病理之通，求生理之通。生理之通是泄與攝的統(tǒng)一，而泄與攝都需耗氣。病理之通總由生理之通的不足而致，所謂“邪之所湊，其氣必虛”［5］。所治雖是有通泄實(shí)證，但也需時(shí)時(shí)顧護(hù)正氣，在通泄方藥中酌加補(bǔ)益護(hù)正之品。并要通中顧攝，適當(dāng)加入收澀之品。一般宜首重通后重澀，通藥先重后輕，澀藥先輕后重。總之，“因人、因時(shí)、因地制宜地針對(duì)個(gè)體患者調(diào)整其各系統(tǒng)之間的具體紊亂，促進(jìn)其自愈機(jī)制，使之在新的水平上重新恢復(fù)相對(duì)平衡”［6］。

［1］ 印會(huì)河．中醫(yī)基礎(chǔ)理論［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1988：132-133．

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［6］ 匡調(diào)元．中醫(yī)病理研究［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1980：28．Astragalus TLC and Gentiana TLC and aconitine test as the investigation index.L9 （34） orthogonal test was adoptd to optimize the extracting process. Result：The extraction process of aconiti preparata and prepared kusnezoff monkshood root extracted for two times，for the first time，added with 10 times the amount of water and decocted for 2.5 h，the second time，added with 8 times the amount of water，and decocted for 2 h. The ten herbs such as Radix Astragali added with 10 times the amount of water，decocted for 3 times and 1h each time. TLC spots were clear，Check the limit of Aconitine met the requirements. Conclusion：The optimized extraction technology was stable and feasible，which could be used for production of Liaogu Capsules.

療骨膠囊為我院老中醫(yī)長(zhǎng)期使用的經(jīng)驗(yàn)方，由制川烏、制草烏、黃芪、秦艽等組成，具有活血通絡(luò)、散寒除濕、補(bǔ)益肝腎之功效，主要用于退行性骨關(guān)節(jié)病、風(fēng)濕性、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、股骨頭缺血性壞死等屬肝腎虧損、筋脈瘀滯證。原方以湯劑應(yīng)用，攜帶不便，故擬改劑型為膠囊劑，現(xiàn)進(jìn)行其提取工藝的優(yōu)選。根據(jù)其功效及有效成分，擬采取綿萆薢、薏苡仁粉碎為細(xì)粉，制川烏、制草烏單獨(dú)水提，藥渣與黃芪、秦艽等10味藥材混合提取，以浸膏得率、黃芪、秦艽的薄層色譜及烏頭堿的限量為考察指標(biāo)，為療骨膠囊的提取工藝提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材 料

DBQ-Ⅱ型薄層自動(dòng)鋪板器（重慶南岸貝爾德儀器廠），BRANSON超聲波清洗器［必能信超聲（上海）有限公司］，TDL80-2B型低速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），212型電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］，HW·SY21-K型電熱恒溫水浴鍋（北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表廠），DHG-9146A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），CAMAG薄層掃描儀及成像系統(tǒng)（瑞士卡瑪）。中藥飲片均購(gòu)于重慶市桐君閣股份公司，經(jīng)鑒定符合2010年版《中國(guó)藥典》一部相關(guān)項(xiàng)下規(guī)定，黃芪甲苷對(duì)照品（批號(hào)110781-200613）、龍膽苦苷（批號(hào)110770-201013），烏頭堿（批號(hào)110720-200410）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，所用化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 出粉率考察［1］

按處方比例分別稱取綿萆薢50g、薏苡仁100g，混為1份，共3份，粉碎過篩（80目）稱重，計(jì)算出粉率，結(jié)果見表1。

表1 出粉率結(jié)果

2.2 制川烏、制草烏水提取工藝考察

烏頭堿限量檢查［2，3］。精密稱取濃縮樣品6g，加溫水50mL使溶解，加稀鹽酸調(diào)pH值1～2，離心（3000轉(zhuǎn)/min）15min，取上清液用乙醚提取3次（20、20、10mL）；酸水液加濃氨水調(diào)pH9～10，再用乙醚提取4次（25、20、15、10mL）；離心時(shí)余下的沉淀物用乙醚洗滌2次，每次15mL。合并乙醚提取液，用適量無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液回收乙醚至干，殘?jiān)訜o水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取烏頭堿對(duì)照品，加無水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述供試品溶液10μL，對(duì)照品溶液8μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用氨蒸氣飽合后，以正已烷-醋酸乙酯-乙醇（6.4∶3.6∶1）為展開劑，氨蒸氣飽和20min，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，檢視出相應(yīng)烏頭堿斑點(diǎn)小于對(duì)照品的斑點(diǎn)或不出現(xiàn)斑點(diǎn)。

制川烏、制草烏提取工藝考察［4，5］?？紤]其有效成分，參考相關(guān)文獻(xiàn)及預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定制川烏、制草烏采用水提取兩次，第1次加水10倍煎煮2.5h，第2次加水8倍煎煮2h，藥渣與剩余10味藥合并提取，提取液濃縮成樣品，烏頭堿限量檢查。

2.3 黃芪等藥材提取工藝考察

黃芪、秦艽TLC。①黃芪薄層鑒別［6，7］：取樣品5g，加水50mL，水浴中溫浸1h，取出，放冷，超聲處理20min，離心（3000轉(zhuǎn)/分）15min，吸取上清液置分液漏斗中，用乙醚30mL洗滌，棄去乙醚液，水液用水飽和的正丁醇提取4次（30、30、20、20mL），合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20mL，棄去氨試液后蒸干。殘?jiān)靡掖?mL溶解，加于已處理好的中性氧化鋁柱（8g，內(nèi)徑1.2cm，干法裝柱）上，用50%乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液10μL，對(duì)照品溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。②秦艽薄層鑒別［8-10］：取樣品6g，加環(huán)己烷50mL，置水浴上加熱回流2h，濾過，棄去濾液，藥渣加丙酮50mL，置水浴上加熱回流30min，濾過，棄去濾液，藥渣加甲醇50mL，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至約2mL，加于已處理好的中性氧化鋁柱（120目，中性氧化鋁8g，內(nèi)徑1.2cm，干法裝柱）上，用甲醇洗脫至無色，收集洗脫液，濃縮至約2mL，作為供試品溶液。取龍膽苦苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液5μL，對(duì)照品溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（30∶10∶3）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，至紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

提取工藝考察。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇對(duì)有效成分溶出量影響較大的3個(gè)因素，即加水量（A）、煎煮時(shí)間（B）、煎煮次數(shù)（C）為考察因素，選用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行了優(yōu)化研究，每因素選擇3個(gè)水平，提取工藝因素水平見表1。

表1 因素水平表

按處方比例稱取黃芪、秦艽、牛膝等10藥材，共9份，同時(shí)分別加入制川烏、制草烏水提后的藥渣，按照L9（34）正交試驗(yàn)表安排的因素水平條件進(jìn)行煎煮，濃縮制成樣品。

正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表2 L9（34）正交試驗(yàn)表

表3 方差分析表

由表3直觀分析可知，各因素對(duì)水提工藝的影響依次為C＞A＞B，方差分析表明，C因素對(duì)提取結(jié)果有非常顯著性影響（P＜0.01），A因素對(duì)提取結(jié)果有顯著性影響（P＜0.05），B因素?zé)o顯著性影響，故最佳提取工藝為A3B1C3，其結(jié)果為：加水量10倍，煎煮時(shí)間每次1h，煎煮3次。

驗(yàn)證試驗(yàn)：按處方比例稱取各味藥材，根據(jù)優(yōu)選工藝結(jié)果進(jìn)行提取，平行三次試驗(yàn)，黃芪等十味藥材的浸膏得率為12.5%、11.6%、12.8%，黃芪、秦艽薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，烏頭堿限量檢查符合規(guī)定。此工藝穩(wěn)定可行，重復(fù)性好。

3 討 論

制川烏、制草烏為方中君藥，其藥效成分、毒性成分均為雙酯型生物堿，具有散寒止痛之功效，用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)痛、腰腿痛、神經(jīng)痛等的治療，烏頭堿類藥物對(duì)風(fēng)寒濕痹的關(guān)節(jié)疼痛有治療作用［11］，能明顯對(duì)抗角叉菜膠引起的大鼠和小鼠后踝關(guān)節(jié)腫，抑制組織胺引起的皮膚滲透性增加，減少受精雞胚漿膜囊上肉芽組織形成。但劑量過大可導(dǎo)致呼吸麻痹和中樞抑制，文獻(xiàn)報(bào)道煎煮時(shí)間在6h，能發(fā)揮較好的鎮(zhèn)痛功效［5］。結(jié)合實(shí)際情況，為保障本制劑安全、有效，預(yù)試驗(yàn)比較了制川烏、制草烏與黃芪等藥味合并與分開提取，合并提取3h后，烏頭堿不能達(dá)到控制劑量，故參考相關(guān)文獻(xiàn)，確定制川烏、制草烏單獨(dú)提取4.5h后，再與其余藥味合并提取。同時(shí)進(jìn)行烏頭堿成分的限量檢查，確保毒性成分在安全劑量范圍。

秦艽祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)，黃芪益氣健脾、利濕消腫，威靈仙祛風(fēng)濕，通經(jīng)絡(luò)，用于風(fēng)濕痹痛，肢體麻木，筋脈拘攣，屈伸不利，共為方中臣藥，選擇秦艽、黃芪進(jìn)行薄層色譜鑒定，以控制本制劑的質(zhì)量。在預(yù)試驗(yàn)中進(jìn)行了單因素試驗(yàn)，比較煎煮次數(shù)對(duì)浸膏得率的影響，結(jié)果表明，前3次提取的浸膏得率的累計(jì)總和為92.3%，第4次的得率小于10%，故確定提取次數(shù)為3次。

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［收稿日期］2015-01-05

Objective：To optimize the extraction process for Liaogu Capsules. Method：With the extract yield， 15min，過濾取汁后，再將其藥加適量清水煎煮，如此煎煮3次，將3次所得藥汁混勻，分3次溫?zé)峥诜?，連服4劑。10月30日復(fù)診，已來月事，胸部作脹，噯氣頻頻，時(shí)有頭暈，尚無嘔吐和鼻出血，經(jīng)色經(jīng)量正常，手足麻木感減弱，面色稍欠榮潤(rùn)，舌淡紅苔白潤(rùn)，脈弦細(xì)。病有減勢(shì)，守方以治。藥用香附15g，川芎15g，蒼術(shù)15g，神曲15g，柴胡15g，枳實(shí)15g，白芍20g，郁金20g，甘草10g。每日1劑，煎服法同前，連服4劑。11月6日復(fù)診，僅有嘔吐感覺，未嘔出，也未出鼻血。面色已顯紅潤(rùn)，舌淡紅苔白干，脈弦細(xì)。囑其精神放松，多參加團(tuán)體活動(dòng)，用紅花、山楂等適量泡水代茶飲，余不再藥。半年后回訪，病愈體健。

Liaogu Capsules；extraction process；orthogonal test；TLC

R284.2

B

1004-2814（2015）05-0473-03

2015-01-04