李莉莎，倪宏波*

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江大慶 163363）

凱美欣對(duì)大鼠亞慢性毒性作用分析

李莉莎，倪宏波*

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江大慶 163363）

凱美欣，主要活性成分為磺胺氯噠嗪鈉（Sulfachlorphrazine，SPZ）和按一定比例添加甲氧芐啶（Trimethoprim，TMP）。本實(shí)驗(yàn)主要檢測(cè)該復(fù)方藥物及其主要方劑通過(guò)對(duì)大鼠灌服不同劑量的凱美欣后的臨床癥狀、血液指標(biāo)和病理變化等，對(duì)藥物的安全性進(jìn)行檢測(cè)分析。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試劑

SPZ原粉；瑞氏染液；BUN、CREA、SOD、MDA、C-GT、AKP、尿蛋白、尿NAG測(cè)定試劑盒；二甲苯；蘇木精；伊紅；阿氏液等。生理鹽水、無(wú)菌注射用水、灌胃針、胃導(dǎo)管、若干一次性1ml注射器。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

大鼠80只，體重180g。所有動(dòng)物試驗(yàn)前進(jìn)行臨床檢查，觀察一周，試驗(yàn)期間常規(guī)飼養(yǎng)。

1.3 儀器設(shè)備

電子分析天平，離心機(jī)，漩渦振蕩器，組織切片機(jī)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

大鼠共80只，隨機(jī)分成5組，雌雄各半，16只/組。第Ⅰ-Ⅳ組為試驗(yàn)組，根據(jù)藥品對(duì)大鼠LD50的測(cè)定，結(jié)果由低到高設(shè)為正常量、5倍、10倍和20倍組，第Ⅴ組為對(duì)照組。第Ⅰ-Ⅳ組中大鼠按20～30mg/kg·bw的劑量分別灌服不同梯度的凱美欣，第Ⅴ組灌服1mL生理鹽水作對(duì)照。每1d灌服1次，連續(xù)給藥2周。每日觀察，在7、14、21d時(shí)稱(chēng)重，代謝取尿，剖殺取血。

2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥

在大鼠盒內(nèi)固定好其頭部,使腹部輕貼在盒內(nèi)壁上，處于自然站姿。右手持灌胃器，從大鼠左嘴角緩慢進(jìn)針，用針輕壓其上腭使口腔與食道成一直線，等灌胃針深入約5cm時(shí)，用食指輕推注射器的活塞使藥液緩慢入胃。

2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣本采集

（1）尿液將載玻片置于大鼠籠內(nèi)，任其小便于玻片上；輕壓大鼠后下腹部，使其直接排尿在玻片上；用1mL注射器吸取排于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上的尿液。

（2）血液鼠尾采血：用50℃左右的溫水浸泡尾部約2min，待充血后用酒精棉消毒，剪去尾尖5～10mm，從尾根部向尾尖按摩，血自會(huì)流出。心臟采血：用乙醚將大鼠迷暈，使腹側(cè)朝上，針頭緊貼胸部劍突下，緩慢進(jìn)針，發(fā)現(xiàn)針頭泵入少量血液時(shí)將采血針軟管的另一頭插入真空采血管內(nèi)，血液即可大量流出。

2.4 血常規(guī)檢測(cè)

每次選取5只大鼠，采血待檢。檢測(cè)包括血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)以及血紅蛋白的含量。

2.5 血液生化檢測(cè)

包括肝功能的檢測(cè)和腎功能的檢測(cè)。每次選取五只大鼠，分離出肝、腎臟，采集血清直接用ELISA試劑盒檢測(cè)。肝臟功能主要檢測(cè)GGT、AKP、ALT、甘油三脂、總蛋白、白蛋白等。腎臟功能主要檢測(cè)：血清尿素氮和肌酐。

2.6 臟器指數(shù)測(cè)定

隨機(jī)選擇采樣大鼠，剖殺前稱(chēng)重，每組剖殺5只，取其主要臟器稱(chēng)重，計(jì)算大鼠的各臟器指數(shù)。臟器指數(shù)即臟器重量（mg）與活體體重（g）的比值。

2.7 病理解剖學(xué)與組織學(xué)檢測(cè)

（1）病理解剖學(xué)觀察：剖殺大鼠，取出主要臟器如肝臟、脾臟、腎臟等，觀察其病變。

（2）病理組織學(xué)檢查：將已有病變的器官，浸于10%的福爾馬林中，石蠟固定切片，H.E.染色，置于光鏡下觀察。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果

將血常規(guī)主要檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果分別用折線圖表示。白細(xì)胞數(shù)量介于9×109/L～14×109/L之間，個(gè)別數(shù)據(jù)低于或高于這個(gè)區(qū)間；除20倍量組部分個(gè)體以外，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)絕大多數(shù)介于6×1012/L～10×1012/L之間；血紅蛋白含量介于140～200g/L，少數(shù)超出此范圍；血小板數(shù)據(jù)點(diǎn)折線圖在500× 109/L～700×109/L范圍內(nèi)，淋巴細(xì)胞（LY%）均在70%～90%之間。結(jié)果表明，各劑量組數(shù)據(jù)保持比較穩(wěn)定的走勢(shì)，無(wú)顯著差異。

3.2 血液生化檢測(cè)結(jié)果

血液是運(yùn)輸動(dòng)物機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物的載體，也是機(jī)體實(shí)現(xiàn)體液調(diào)節(jié)的途徑。血液的生化指標(biāo)反映機(jī)體全身或局部帶些變化和組織正常生理功能較為敏感的指標(biāo)。

3.2.1 肝功能指標(biāo)（1）酶是細(xì)胞的物質(zhì)成分，是生物體內(nèi)物質(zhì)代謝的催化劑。谷-丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）是動(dòng)物肝細(xì)胞的細(xì)胞核及線粒體中重要的轉(zhuǎn)氨酶，與氨基酸、蛋白質(zhì)的代謝有關(guān)，反映動(dòng)物肝損傷的敏感性。ALT介于40～70U/L之間，AST除20倍組個(gè)別數(shù)據(jù)有差異，其他保持在150～250U/L。堿性磷酸酶主要存在于骨化的軟骨組織中，與骨鹽沉積、骨膠原蛋白的形成和動(dòng)物正常生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)，數(shù)據(jù)點(diǎn)顯示各組ALP、GGT數(shù)據(jù)大體穩(wěn)定，無(wú)明顯變化。

（2）甘油三酯（TG）和總膽固醇（CHOL）的水平反映動(dòng)物機(jī)體內(nèi)脂類(lèi)代謝狀況。TG是人體內(nèi)含量最多的脂類(lèi)，在0.8～1.5mmol/L范圍內(nèi)；膽固醇是動(dòng)物組織細(xì)胞中不可或缺的重要物質(zhì)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)多在0.7～1.2mmol/L內(nèi)；葡萄糖（GLU）指標(biāo)趨于8～15mmol/L之間，各組數(shù)據(jù)基本無(wú)差異。

（3）總蛋白（TP）可以反映肝臟合成蛋白質(zhì)的能力。白蛋白是衡量肝臟功能的重要指標(biāo)?？偟鞍孜挥?0g/L～90g/L之間，白蛋白介于20～35g/L，球蛋白介于30～50g/L，有各數(shù)據(jù)點(diǎn)折線圖分析可知，各組指標(biāo)大體保持穩(wěn)定。

3.2.2 腎功能指標(biāo)血清尿素氮（BUN）和肌酐（CREA）是反映腎功能的重要檢測(cè)指標(biāo)。BUN的濃度與動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡狀況息息相關(guān)。肌酐是肌酸的代謝產(chǎn)物，在體內(nèi)生成的量是相對(duì)恒定的，絕大部分由腎小球?yàn)V過(guò)后排出體外。血清尿素氮在各劑量組中比較穩(wěn)定，在3～5mmol/L之間。肌酐指標(biāo)在25～40umol/L范圍內(nèi)，各組之間無(wú)顯著性差異性。

3.3 臟器指數(shù)測(cè)定結(jié)果

從取樣后的三組指數(shù)得知，對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)組的胸腺、脾、腎、肝的臟器指數(shù)均在正常參考值范圍內(nèi)，各給藥組的指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05），不同劑量的凱美欣對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常生長(zhǎng)發(fā)育并無(wú)明顯影響。

3.4 病理解剖學(xué)與組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果

用肉眼觀察對(duì)照組與試驗(yàn)各組的各個(gè)取樣臟器表面、內(nèi)膜均無(wú)淤血等現(xiàn)象，胸腔、腹腔均無(wú)積液等病理改變，各組織臟器正常，未見(jiàn)異常的病理變化。無(wú)論是在40×還是200×顯微鏡下觀察組織切片不難發(fā)現(xiàn)：對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)組雖用藥劑量不同，但對(duì)脾臟、腎臟及肝臟并未產(chǎn)生致病作用，可清晰的看到各器官無(wú)明顯的病理變化，說(shuō)明這種復(fù)方藥物對(duì)大鼠的肝臟、腎臟等主要器官為造成毒性影響，無(wú)毒副作用可以應(yīng)用到生產(chǎn)中。

4 討論

給藥后試驗(yàn)動(dòng)物活動(dòng)量減少，精神不振，排泄物呈藥物顏色，說(shuō)明動(dòng)物機(jī)體在灌服藥液后產(chǎn)生了反應(yīng)，隨后每日灌服機(jī)體也恢復(fù)正常且試驗(yàn)期間無(wú)一死亡。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)各組指標(biāo)趨于穩(wěn)定，無(wú)顯著差異（P＞0.05），證明了凱美欣這種復(fù)方磺胺類(lèi)藥物對(duì)大鼠的正常生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)不良影響。從病理解剖學(xué)與組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)大鼠并未產(chǎn)生任何的毒副作用和不良反應(yīng)，在短期內(nèi)使用此藥有一定的安全性。同時(shí)磺胺類(lèi)藥物也因療效顯著且價(jià)格低廉，性質(zhì)穩(wěn)定，吸收快等優(yōu)點(diǎn)適用于臨床應(yīng)用，但為了確保長(zhǎng)期使用的安全性還可進(jìn)行深入探究。

[1]王書(shū)林，等.獸醫(yī)臨床診斷學(xué)[M].北京：雞中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001.181-188.

[2]朱蓓蕾.動(dòng)物毒理學(xué)[M].上海：上?？萍汲霭嫔?，1989.133-137.

[3]陳奇.中藥藥理研究方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.312-319.

[4]李文軍.養(yǎng)雞生產(chǎn)中應(yīng)正確使用磺胺類(lèi)藥物[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,1999，25 （11）:49-52.

[5]鄭延平.正確使用磺胺類(lèi)藥物給家畜治病[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2005，39 （4）:53-56.

[6]閻繼業(yè).畜禽藥物手冊(cè)[M].北京：金盾出版社，2002，32-57.

[7]胡功政.家禽用藥指南[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2000，420-431.

[8]姜大富.磺胺類(lèi)藥物的臨床應(yīng)用及使用心得[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2006，6:84-86.

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．05.021

李莉莎（1987～），黑龍江哈爾濱人，碩士研究生

★通信作者：倪宏波