馬建山

（遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，遼寧沈陽(yáng) 110000）

豬丹毒的實(shí)驗(yàn)室診斷方法

馬建山

（遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，遼寧沈陽(yáng) 110000）

豬丹毒是由豬丹毒桿菌引起的急性敗血型，或在皮膚發(fā)生特異性紅疹的熱性傳染性疾病，是豬的主要疫病之一。該病可根據(jù)流行病學(xué)資料、癥狀和病理解剖進(jìn)行判斷，但因急性豬丹毒往往不易與其他急性的豬病區(qū)別，所以較為可靠的診斷方法是細(xì)菌檢查和動(dòng)物接種，至于血清學(xué)的檢驗(yàn)也有一定的診斷意義。

1 細(xì)菌檢查

細(xì)菌檢查是診斷豬丹毒較為可靠的方法，可用于病豬生前和死后的檢查。

1.1 顯微鏡檢查在診斷豬病時(shí)，可從耳靜脈采血或切開疹塊擠出血液和滲出液作涂片。對(duì)急性病例的尸體，可從血液、脾、肝、腎及淋巴結(jié)采取材料作涂片，用革蘭氏或瑞氏法染色后作顯微鏡檢查。豬丹毒菌多是散在于紅細(xì)胞之間，也有成堆地存在，并常發(fā)現(xiàn)許多菌被白細(xì)胞吞噬的現(xiàn)象。慢性豬丹毒容易從心內(nèi)膜炎的瓣膜增生的纖維組織中找到細(xì)菌，并可見由長(zhǎng)絲狀菌體構(gòu)成的叢狀物。此外，在顯微鏡檢查時(shí)，因豬丹毒桿菌在血液中數(shù)目較少，至少要看10個(gè)以上的視野再作判斷。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)如經(jīng)顯微鏡檢查找不到細(xì)菌或不能確定判定時(shí)，就要采用培養(yǎng)檢查法。即以無(wú)菌手續(xù)采取病豬的耳血或劃破疹塊部的皮膚取組織液，死豬尸體則從心血或肝、脾、腎及淋巴結(jié)中采取材料，接種于pH7.6～7.8的血液瓊脂斜面及馬丁肉湯中，置35℃培養(yǎng)24h后，按照豬丹毒桿菌的培養(yǎng)特性進(jìn)行觀察，判斷結(jié)果。慢性病例應(yīng)從心瓣膜的纖維性增生組織中或有病變的關(guān)節(jié)囊內(nèi)采取材料作培養(yǎng)。

1.3 對(duì)死亡后時(shí)間已久的尸體作細(xì)菌培養(yǎng)由于這種材料容易被腐生菌污染，所以培養(yǎng)方法時(shí)用含有10%血清的馬丁瓊脂平面劃線接種，或者取管狀的骨髓作培養(yǎng)。但有的學(xué)者認(rèn)為用骨髓不如用腎臟培養(yǎng)準(zhǔn)確。但在交通不便的地區(qū)運(yùn)送材料或遇尸體已經(jīng)腐敗時(shí)，應(yīng)采用骨髓作培養(yǎng)。被檢的材料可放在30%～40%的甘油或食鹽溶液內(nèi)，以防腐敗。

此外，用細(xì)菌培養(yǎng)法診斷豬丹毒時(shí)，常會(huì)遇到混感情況，除丹毒菌外，還可分離出大腸桿菌、巴氏桿菌等，因此應(yīng)注意觀察，分清主次。

2 動(dòng)物接種

當(dāng)被檢材料中含菌量極少，或已被污染，僅做細(xì)菌分離診斷有困難的，可以接種小動(dòng)物作為補(bǔ)助診斷。接種材料可取疹塊部組織或血液，或脾、肝、腎等臟器，加少量生理鹽水作成乳劑直接注射，也可用病豬材料的24h肉湯培養(yǎng)物注射，劑量一般為小鼠皮下注射0.2mL，同時(shí)還注射豚鼠。如被檢材料是豬丹毒，則小鼠在接種后3～5d死亡，并可以從死亡動(dòng)物的心血及脾、肝、腎等臟器內(nèi)分離到豬丹毒桿菌。

3 血清學(xué)檢查

3.1 凝集反應(yīng)主要檢測(cè)慢性豬丹毒病豬血清中的凝集點(diǎn)。有顯微鏡下檢查法、試管凝集反應(yīng)與全血平板凝集反應(yīng)三種，其中以全血平板凝集反應(yīng)檢查方法最簡(jiǎn)便。

（1）全血平板凝集反應(yīng)法：將選出的豬丹毒桿菌接種于10%馬血清的馬丁肉湯中，在37℃培養(yǎng)24h，加0.4%福爾馬林殺菌24h，再離心沉淀洗出菌體，懸浮于1%福爾馬林生理鹽水中，作為本試驗(yàn)的抗原。為便于觀察反應(yīng)，可在抗原中加入20%甘油及0.001%結(jié)晶紫。取被檢豬的血液1滴放于清潔的玻片上，加抗原1滴混合后在1min左右出現(xiàn)凝集的為陽(yáng)性反應(yīng)?；技毙载i丹毒的病例在發(fā)病2～5d檢查，即可得出陽(yáng)性結(jié)果，但應(yīng)注意凡經(jīng)豬丹毒菌苗免疫的或注射抗丹毒血清的豬，在一定時(shí)期內(nèi)亦呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，健康豬有時(shí)也有輕度凝集或可凝反應(yīng)，不過(guò)出現(xiàn)反應(yīng)的時(shí)間多在1.5～2.0min以后。

（2）顯微鏡下凝集反應(yīng)法：此法與全血平板凝集反應(yīng)檢查相似，只是將血清與抗原各一滴混合于蓋玻片，作成懸滴標(biāo)本，在鏡下檢查。細(xì)菌凝集成團(tuán)塊的為陽(yáng)性，而細(xì)菌仍均勻分布為陰性。

3.2 試管凝集反應(yīng)法取被檢血清以生理鹽水作不同倍數(shù)的稀釋，加入抗原混合后置于37℃溫箱4h，取出用低速離心沉淀數(shù)分鐘，陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)上液透明，陰性的仍為混濁狀。按照這種方法檢查，陽(yáng)性反應(yīng)豬的凝集價(jià)，有的可達(dá)1:200以上。有人曾用血清生長(zhǎng)凝集試驗(yàn)診斷急性豬丹毒獲得成功。方法是將病豬耳部或死亡豬只實(shí)質(zhì)性臟器接種于馬丁肉湯中，內(nèi)含1:40抗豬丹毒高免血清與1mL有1000U的卡那霉素，36℃培養(yǎng)12h觀察結(jié)果觀察結(jié)果，如系豬丹毒病豬，在試驗(yàn)管底部可見明顯的凝集反應(yīng)。

3.3 沉淀反應(yīng)這種反應(yīng)用于死豬尸體診斷，其方法與診斷炭疽的沉淀反應(yīng)方法相同。沉淀素血清用兔制造的比一般抗丹毒血清的效力好。抗原可用病死豬的疹塊部組織，或肝、脾、腎等臟器加5倍生理鹽水磨成乳劑，煮沸5～10min后用石棉濾過(guò)至透明即可。檢驗(yàn)時(shí)，取適量沉淀素血清，裝入小試管中，斜持試管，沿管壁加入抗原，重迭于血清上，經(jīng)15～30min后，如在兩液接觸面上有白環(huán)出現(xiàn)的為陽(yáng)性反應(yīng)。

3.4 熒光抗體法也可以直接的熒光抗體法鑒別豬丹毒培養(yǎng)物和病理組織切片標(biāo)本，均能在1～2h內(nèi)做出判定。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．12.064